臨床微生物標本采集及運送

1、臨床微生物標本采集及運送臨床微生物標本采集及運送微生物標本規(guī)范化采集的重要性 正確采集、處理與運送細菌培養(yǎng)的標本直接關系到致病菌培養(yǎng)的正確性與陽性率的高低，是臨床細菌檢驗成功的關鍵。 標本質(zhì)量的好壞直接影響診斷結果的正誤，不當?shù)臉吮究蓪е录訇幮?、假陽性結果的出現(xiàn)，因此標本采集與處理的規(guī)范化是準確、及時地向臨床提供重要的臨床感染信息的基礎。 好的微生物檢驗標本可提升實驗室工作效率及病患照顧質(zhì)量，降低醫(yī)療成本。2臨床標本的分類31. 發(fā)現(xiàn)感染應及時采集微生物標本作病原學檢查，二、三級醫(yī)院微生物標本送 檢率不應低于70%。2. 盡量在抗菌藥物使用前采集標本。3. 標本采集時應嚴格執(zhí)行無菌操作，減少或

2、避免機體正常菌群及其他雜菌污染。4. 標本采集后應立即送至實驗室。床邊接種可提高病原菌檢出率。5. 以棉拭子采集的標本如咽拭、肛拭或傷口拭子，宜采用插入運送培養(yǎng)基送檢。6. 混有正常菌群的標本如咳痰、尿液、傷口拭子，不可置肉湯培養(yǎng)基內(nèi)送檢。7. 盛標本容器須經(jīng)滅菌處理，但不得使用消毒劑。8. 送檢標本應注明來源和檢驗目的，使實驗室能正確選用相應的培養(yǎng)基和適宜的培養(yǎng)環(huán)境。4血培養(yǎng)5采集的臨床指征一般患者出現(xiàn)以下一種體征時可作為采血的重要指征： 發(fā)熱（38）或（低溫36） 寒戰(zhàn) 白細胞增多（特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細胞） 皮膚黏膜出血、昏迷、多器官衰竭、血壓降低、CRP升高及呼吸快 特殊

3、患者（如血液病）出現(xiàn)粒細胞減少（成熟的多形核白細胞1000109/L）、血小板減少等，或同時具備上述幾種體征的臨床可疑菌血癥應采集血培養(yǎng) 新生兒菌血癥，進行血培養(yǎng)同時應增加尿液和腦脊液培養(yǎng) 對入院危重感染患者在未進行系統(tǒng)性抗菌藥物治療之前，應及時采集血培養(yǎng)6采血量： 血液中細菌和真菌的檢出率依賴于足夠的血量，但并非越多越好，超過一定數(shù)量的采血量會稀釋培養(yǎng)基內(nèi)的肉湯，使肉湯無法有效中和血中的抑制物質(zhì)（補體、抗體、抗生素）。血量與培養(yǎng)液的比例以 1：10為宜，但對已接受抗菌藥物長達 10 天以上的患者， 采血量與培養(yǎng)基的比例應為 1：20 或大于 1：20 為宜。 成人1015ml 兒童35ml

4、嬰幼兒12ml 骨髓12ml78標本采集常規(guī)消毒病人采血部位，抽一定量血液后，另換一無菌針頭，消毒接種瓶口后將血液接種在瓶內(nèi)（一瓶需氧，一瓶厭氧），輕輕搖勻。9采集要點：1. 每一對血培養(yǎng)應當從身體的不同部位采集2. 用來培養(yǎng)的血應當是靜脈血而不是動脈血3. 盡量避免從靜脈導管中抽血4. 皮膚和瓶子的消毒非常關鍵10采集時機：應在病人發(fā)病初期或發(fā)熱高峰到來之前采集。一般情況下應盡量選擇在使用抗菌藥之前進行，在24h內(nèi)采集2-3份血培養(yǎng)（一次靜脈采血注入到多個培養(yǎng)瓶中應視為單份血培養(yǎng)）。如患者已經(jīng)應用抗菌藥物進行治療，應在下一次用藥之前采血培養(yǎng)。11采血套數(shù) 檢測靈敏度12血培養(yǎng)瓶的運送 采集后

5、的血培養(yǎng)瓶應立即送檢（室溫25個/低倍視野，鱗狀上皮細胞10個/低倍視野為合格標本。采集合格標本對細菌的診斷極為重要。2324注意事項 在抗生素應用前采集痰標本 對于細菌性肺炎，痰標本送檢每天1次，連續(xù)23天；不建議24h內(nèi)多次采集，除非痰液外觀形狀改變 懷疑分枝桿菌感染者，應連續(xù)收集3天清晨痰液送檢，也可收集24h痰液。25痰培養(yǎng)標本的運送 標本采集后正確蓋好，防止泄露或容器外部留有殘留物 采集后的標本應立即送往實驗室（室溫2） 申請抗酸桿菌檢查或真菌培養(yǎng)的痰液如不能及時送檢，應放入4冰箱，以免雜菌生長，但存放時間應不超過24 懷疑嗜血桿菌或肺炎鏈球菌感染時，標本應立即送檢，切忌冷藏26中段

6、尿培養(yǎng)27采集的臨床指征 1. 尿痛、尿急、尿頻等典型的尿路感染癥狀 2. 出現(xiàn)血尿或膿尿 3. 泌尿系統(tǒng)疾病手術前 4. 留置導尿管時間太長，患者出現(xiàn)發(fā)熱 5. 尿常規(guī)中WBC高和（或）亞硝酸鹽陽性 尿感根據(jù)感染部位分為： 上尿路感染（腎盂腎炎） 下尿路感染（膀胱炎、尿道炎) 男性可出現(xiàn)前列腺炎28標本采集一般認為來自正常尿液是無菌的，而尿道口有正常菌群寄生，標本的采集必須無菌操作。1. 女性（female）：成年女性外陰部以肥皂水清洗，再用無菌水洗凈，用無菌紗布擦拭，然后排尿棄去前段尿，留取中段尿 3 毫升，置于無菌容器內(nèi)。2. 男性（male）：用肥皂水清洗尿道口，后用清水洗后取中段尿。

7、包皮過長者為防止包皮內(nèi)細菌污染，可將包皮翻開沖洗后再取中段尿。3. 兒童（children）：采集中段尿較困難。如尿中細菌明顯增多，可高度懷疑尿路感染，無細菌則可否定，細菌數(shù)中度增加時，有必要用膀胱穿刺術（vesicopuncture）或?qū)颍╱rethral catheterization）采集尿液。29留取中段尿 簡單易行，又無感染的危險。通常取晨起第一次尿送檢。尿液在膀胱內(nèi)停留6-8h以上（給細菌足夠的繁殖時間） 尿標本必須用無菌帶螺帽的容器采集，否則為拒收標本。 痰培養(yǎng)容器？NO。30腦脊液培養(yǎng)31采集的臨床指征 在生理情況下，血液和腦脊液之間有血腦屏障，阻礙各種微生物通過血液進入中樞

8、神經(jīng)系統(tǒng)。因此正常人的腦脊液是絕對無菌的。 當懷疑結核性、化膿性、流行性、霉菌性腦膜炎時進行腦脊液培養(yǎng)。32嚴格無菌操作33標本采集 以 70%酒精或 2%碘酊消毒背部下方，并麻醉之，然后以一特制通管針，輕輕的由第三與第四腰椎間的中線部位穿刺入脊髓蛛網(wǎng)膜，采集約 3-5ml 腦脊液于 3 支無菌試管中，每支試管至少 1-2ml，然后馬上將第 2 根（或第 1 根）送至實驗室。做腦脊液培養(yǎng)時，建議同時做血培養(yǎng)。腰穿時必須作徹底消毒和無菌操作。34腦脊液標本的運送 采集后應正確蓋好，防止泄漏或容器外部留有殘留物。常溫立即送檢，實驗室收到標本后應立即接種。腦脊液標本送檢的理想時間為 15 分鐘內(nèi)，半

9、小時送檢是可接受的，如果送檢時間超過 1 小時，則會影響結果。注：某些細菌具有自溶酶，放置時間過長易自溶死亡，因此，標本應立即送檢，并且保溫（禁止放冰箱，因腦膜炎雙球菌遇冷死亡）35穿刺液培養(yǎng)36穿刺液主要包括： 膽汁 胸水 腹水 心包液 關節(jié)液 腦脊液在正常人體中，上述體液均是無菌的。有感染的情況下檢出的細菌，在排除污染后應視為病原菌，及時給予正確的治療。37采集的臨床指征 臨床上出現(xiàn)胸腔積液（胸水）、腹腔積液（腹水）、關節(jié)液、心包腔積液、鞘膜腔積液等情況時，多因漿膜腔發(fā)生循環(huán)障礙、炎癥、癌浸潤等病變，腔內(nèi)液體滲漏增加所致。38標本采集 一般由臨床醫(yī)師在無菌操作下穿刺抽取或外科手術采集標本。

10、取于無菌肝素抗凝管中（.肝素可抗凝標本），充分混勻后立即送檢，不能有凝塊。39大便培養(yǎng)40采集指征 腹瀉病人應盡量在急性期（天內(nèi)）、在用抗生素前留取標本以提高病原菌的檢出率，陳舊標本影響檢出陽性率。 連續(xù)出現(xiàn)膿血、黏液、糊狀、米泔樣等形狀異常的糞便。 疑似細菌性食物中毒患者，大便培養(yǎng)可作為一個輔助檢查手段。 懷疑感染傷寒沙門菌、細菌性痢疾的患者。 胃腸道感染懷疑霍亂等弧菌感染者。41標本采集 無需特別準備，但最好不要住院超過，在使用抗生素前采集最佳。 自然排便后，可挑取新鮮糞便中有膿血、黏液部分的糞便約，液體糞便取絮狀物，糊狀、米泔樣等性狀異常的糞便盛于無菌的容器中或置于保存液中送檢。42大便

11、標本的運送標本采集后應正確蓋好，防止泄漏或容器外部留有殘留物。糞便標本：室溫 1 小時內(nèi)送至。直腸拭子（procto swab）：室溫 1 小時內(nèi)送至。高度懷疑霍亂弧菌感染的標本室溫 1 小時內(nèi)送至，運送必須符合特殊標本的安全要求。堿性蛋白胨水：霍亂弧菌增菌培養(yǎng)43膿性分泌物44采集指征：軟組織有急性化膿性炎癥、化膿性疾病、膿腫、創(chuàng)傷感染等。45標本采集無菌生理鹽水擦洗病灶表面后，用棉拭子采取病灶深部的膿液和分泌物，置運送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。開放性膿腫：盡可能抽吸或?qū)⑹米由钊雮?，緊貼傷口前沿取樣。從膿腫底部或膿腫壁取樣最好。封閉性膿腫：宜用碘酒、酒精消毒皮膚后，無菌注射器抽取膿液送檢，最好做厭氧培

12、養(yǎng)。采樣前病灶局部應避免用抗菌藥物或消毒劑。 采集量：盡可能多取46生殖道標本47標本采集 男性：翻起包皮，無菌生理鹽水沖洗尿道口，采集從尿道口溢出的膿性分泌物或用男性專用拭子插入尿道內(nèi)24cm處取分泌物。前列腺液可用前列腺按摩法采集標本于無菌試管。 女性：先用生理鹽水局部沖洗，使用窺器擴張陰道，用無菌棉拭子根據(jù)臨床需要采集陰道、宮頸、宮內(nèi)分泌物。 采集之后的標本需密封好，盡可能采用轉運培養(yǎng)基拭子轉運（阿米斯拭子），冷藏（28）保存，懷疑有淋球菌感染的應采用常溫保存，盡快送檢。注：推薦用革蘭染色方法確定細菌性陰道炎.細菌培養(yǎng)往往容易誤導。484950其他實驗標本的采集 尿毒品（urine do

13、pe）檢測：使用新鮮尿液 2ml，不需任何特殊處理 其它血清學實驗：用潔凈干燥的試管采血 2ml，及時送檢 其它需要找細菌、找隱球菌、找抗酸桿菌的標本用無菌容器送檢51標本的保存和運送1. 需培養(yǎng)的標本均應保存于無菌容器中，防止干燥，盡快送檢。2. 血液和骨髓接種的需氧和厭氧培養(yǎng)瓶應立即送到實驗室，如因某種原因不能及時送檢，應將培養(yǎng)瓶放在室溫，切勿放入冰箱或溫箱，否則將影響實驗結果。3. 做培養(yǎng)的尿液標本應立即送檢或冷藏保存 ，通常不超過 2 小時。尿液標本中不得加防腐劑和消毒劑，以免影響檢出率。4. 培養(yǎng)的大便標本應盡快送檢，不能立即送檢者應放入卡里-布來爾運送培養(yǎng) 基或PH7.0 的磷酸鹽

14、甘油中保存?？芍?2-8 度冰箱保存待檢。5. 結核菌培養(yǎng)、真菌培養(yǎng)和一般細菌培養(yǎng)應及時送檢，若不能則保存于 2-8冰箱中。526. 支原體培養(yǎng)（mycoplasma culture）的標本一定要使用阿米斯運送培養(yǎng)基7. （2-8冷藏保存 )。8. 腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌能產(chǎn)生自溶酶，離體后迅速自溶，對寒冷和干燥敏 感。肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌對外界環(huán)境抵抗力低。故需要培養(yǎng)這些菌的標本采集后必須立即保溫送檢（25-37），或進行床旁接種，切不可置冰箱保存。淋球菌培養(yǎng)標本或男女生殖道分泌物和一般分泌物可用阿米斯運送培養(yǎng)基保存。9. 做院感實驗的培養(yǎng)液或培養(yǎng)基送檢時間不得超過 6h，若樣品保存在

15、 0-4， 則不得超過 24h。10.嗜異性凝集試驗、肥達氏試驗、外斐氏試驗的標本分離血清 2-8冷藏送檢。53標本的處理標本處理過程中均應遵循無菌操作（sterile operation）的原則。痰培養(yǎng)標本的處理：微生物室收到標本后分區(qū)劃線接種于血平板和巧克力平板。中段尿一般培養(yǎng)標本的處理：無菌取 10ul 尿液，垂直劃線，35普通培養(yǎng)箱培養(yǎng) 18-24 小時。大便常規(guī)培養(yǎng)標本應分區(qū)劃線接種于血平板、麥康凱（MAC）平板、SS平板?；魜y弧菌培養(yǎng)接種于弧菌顯色平板（VIB）。傷口分泌物（膿液）、前列腺液、穿刺液等標本的處理：分區(qū)劃線接種于血平板和MAC平板。特殊細菌培養(yǎng)標本的處理：淋球菌培養(yǎng)接種淋球菌平板，念珠菌培養(yǎng)接種念珠菌顯色平板。已接種的培養(yǎng)基放CO2培養(yǎng)箱，35培養(yǎng) 18-24h。54培養(yǎng)基的選擇痰標本（血、巧） 傷口分泌物、膿汁（血、MAC）淋球菌（GC）真菌培養(yǎng)（血、念顯）尿（血）大便（血、MAC、