高速逆流色譜技術(shù)

1、高速逆流色譜技術(shù)目 錄介紹1高速逆流色譜的原理11.系統(tǒng)描述21.1主機(jī)21.2恒流泵21.3紫外檢測(cè)器31.4恒溫循環(huán)器31.5色譜工作站32.主機(jī)描述32.1操作42.1.1傳感器控制面板42.1.2電源開關(guān)42.1.3樣品進(jìn)樣口及樣品出樣口42.1.4進(jìn)口42.1.5出口42.2六通閥42.3進(jìn)樣步驟82.4控制面板92.4.1功能鍵介紹92.4.2控制面板的操作92.5TBE-300B高速逆流色譜的工作流程103.安裝103.1檢查包裹103.2安裝環(huán)境103.3連接管103.4連接保溫系統(tǒng)的管路113.5連接信號(hào)線124.操作124.1準(zhǔn)備124.2操作程序124.3系統(tǒng)平衡134.

2、3.1單泵平衡134.3.2雙泵平衡144.4樣品分離145.維護(hù)145.1清洗系統(tǒng)145.2警告156.系統(tǒng)特性及工作參數(shù)15附錄A15附錄B16附錄C17同田生物介紹逆流色譜（CCC）是一種無(wú)固體載體支持的液-液分配色譜技術(shù)。與其他柱色譜相比，逆流色譜不會(huì)導(dǎo)致不可逆吸附，樣品，變性，污染及 等問(wèn)題。除此之外，它能夠分離分子量從小變到大的化合物，甚至一些生物大分子。高速逆流色譜（HSCCC）是逆流色譜中的最新的發(fā)展。高速逆流色譜不僅減少的分離時(shí)間，而且也極大地提高了分離度和制備能力。高速逆流色譜的應(yīng)用：1、 制備性地分離毫克到克規(guī)模的樣品；2、 從粗樣品中分離目標(biāo)化合物；3、 分離放射性同位

3、素。高速逆流色譜在分離天然產(chǎn)物中的優(yōu)勢(shì)：1、 更加方便和迅速；2、 不需要對(duì)樣品進(jìn)行前處理；3、 液-液分配容積系統(tǒng)的選擇廣泛；4、 因?yàn)闆]有固體載體，所以無(wú)死吸附，無(wú)污染；5、 高的重現(xiàn)性及重復(fù)性。高速逆流色譜的原理高速逆流色譜是基于一種特殊的現(xiàn)象流體動(dòng)力學(xué)平衡。當(dāng)高速逆流色譜在運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，在呈螺旋狀盤繞的線圈的高速行星式運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的離心力的作用下，不相容的兩相將不斷地混合。其中一相將作為固定相(上相或者下相)，而另一相將作為流動(dòng)相通過(guò)恒流泵不斷地注入柱子中去。固定相在行星運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的離心力作用下會(huì)保留在螺線管柱中，而流動(dòng)相將不斷地穿過(guò)固定相然后經(jīng)出口流出。溶解物被流動(dòng)相帶入柱子中，在兩相溶劑之間不

4、斷地重復(fù)分配，然后根據(jù)各自不同的分配系數(shù)一次流出柱子。在流動(dòng)相中分配系數(shù)大的溶質(zhì)將先被洗脫出來(lái)，在流動(dòng)相中分配系數(shù)小的溶質(zhì)將后被洗脫出來(lái)。圖1描述了流體動(dòng)力學(xué)運(yùn)動(dòng)以及行星運(yùn)動(dòng)中不相容的兩相溶劑的分布情況。在描述的上部分中，流體動(dòng)力學(xué)平衡達(dá)到穩(wěn)定后，柱子中出現(xiàn)徹底不同的兩個(gè)區(qū)域：靠近軸直徑四分子一的區(qū)域是混合區(qū)；該區(qū)域兩相溶劑高頻混合。其他區(qū)域是固定區(qū)：溶劑分成兩層。重相溶劑相在系統(tǒng)外部，輕相溶劑系統(tǒng)在系統(tǒng)內(nèi)部。在兩相表面之間有一個(gè)分界線。描述的下部分是柱子從到到拉伸圖，其與上部分描述中的和是符合的。隨著柱子的旋轉(zhuǎn)，每一混合區(qū)域都將以同樣的速度朝著柱子的尾端流動(dòng)（類似海浪表面的運(yùn)動(dòng)原理）。圖1

5、螺旋管柱中流體動(dòng)力學(xué)運(yùn)動(dòng)及兩相溶劑分布在螺線管柱的任意一部分，兩相溶劑總是以很高的頻率混合和分層。當(dāng)柱子以800轉(zhuǎn)/分的速度旋轉(zhuǎn)時(shí)，流動(dòng)將在一分鐘內(nèi)13次通過(guò)固定相。因此，流動(dòng)相流率在一個(gè)相對(duì)寬跨度的范圍內(nèi)，高速逆流色譜仍然達(dá)到很高的分離效率。1.系統(tǒng)描述TBE-300B高速逆流色譜系統(tǒng)包括如下幾個(gè)部分：TBE-300主機(jī)，泵，檢測(cè)器，溫度調(diào)節(jié)循環(huán)器及色譜工作站。1.1主機(jī)主機(jī)分離樣品。在螺旋管柱中，樣品將被分成單一成分。根據(jù)它們各自的分配率，不同的成分將依次隨流動(dòng)相流出。主機(jī)系統(tǒng)包括，速度調(diào)節(jié)，六通閥，分離柱，保溫膜等。1.2恒流泵恒流泵以恒定流率將主機(jī)泵入主機(jī)中。當(dāng)泵運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，泵的過(guò)濾器應(yīng)該

6、處于溶劑表面之下以避免空氣進(jìn)入泵中，導(dǎo)致分離效率受影響。注意：建議采用中壓及低壓泵。安全壓力設(shè)為2Mpa，精確度不超過(guò)0.1mL。1.3紫外檢測(cè)器檢測(cè)器會(huì)利用脈沖將經(jīng)過(guò)分離的各組分的信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，同時(shí)將電信號(hào)傳遞到色譜工作站。在收集信號(hào)前，應(yīng)該將檢測(cè)器預(yù)熱45min。1.4恒溫循環(huán)器通過(guò)提供包裹有保溫膜的恒定溫度的工作介質(zhì)，恒溫循環(huán)器將幫助分離過(guò)程維持一個(gè)恒定及合適地溫度。1.5色譜工作站色譜工作站將來(lái)自檢測(cè)器的電信號(hào)經(jīng)相關(guān)軟件轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號(hào)，并記錄它們的起伏。2.主機(jī)描述流路六通閥進(jìn)樣六通閥進(jìn)口出口樣品進(jìn)口樣品出口電源開關(guān)傳感器控制面板圖3 TBE-300B主機(jī)前面視圖2.1操作2.1.

7、1傳感器控制面板控制和顯示旋轉(zhuǎn)速度（轉(zhuǎn)/分）。2.1.2電源開關(guān)向上推表示開，向下推表示關(guān)。用于接通和切斷電源。當(dāng)儀器不工作時(shí)，必須切斷設(shè)備電源。在切斷電源之前，必須保證主機(jī)完全停止運(yùn)轉(zhuǎn)。2.1.3樣品進(jìn)樣口及樣品出樣口使用兩個(gè)注射器針頭作為樣品進(jìn)樣口和出樣口。將裝有樣品溶液的干凈注射器A與樣品進(jìn)樣口相連，將另一只空的注射器B與樣品出樣口相連。通過(guò)抽注射器B將注射器A中的樣品吸入樣品環(huán)中。2.1.4進(jìn)口通過(guò)管將泵與分配柱的進(jìn)口相連接。泵將流動(dòng)相從進(jìn)口經(jīng)六通閥（當(dāng)連接時(shí)）泵入分配柱中。主機(jī)面板上以In標(biāo)記。2.1.5出口高速逆流色譜柱通過(guò)管與檢測(cè)器相連。檢測(cè)器不斷地檢測(cè)流出物。主機(jī)面板上以O(shè)ut

8、標(biāo)記。2.1.6六通閥見下面的2.2部分。2.2六通閥儀器配備有兩個(gè)六通閥：流路轉(zhuǎn)換六通閥（閥A）和進(jìn)樣六通閥（閥B）。閥A用于控制流動(dòng)相的流路；在正向洗脫的情況下，當(dāng)閥A轉(zhuǎn)向In（錯(cuò)誤的設(shè)置），流動(dòng)相的流動(dòng)方向是從分離柱的頭到分離柱的尾。當(dāng)閥A轉(zhuǎn)向Out時(shí)，流動(dòng)相的流動(dòng)方向是從分離柱的尾到分離柱的頭。過(guò)程A和B：過(guò)程A 流動(dòng)相：親水性相。洗脫方向：從頭到尾（向下）。當(dāng)閥A處于In時(shí)，流動(dòng)相的流動(dòng)方向是從分離柱的頭到分離柱的尾。在親脂性相中分配系數(shù)小的（K值）組分1首先被洗脫出來(lái)。其次，組分2被洗脫出來(lái)。K值大的組分3和4很難被洗脫出來(lái)而保留在疏水性的固定相中。洗脫組分3和4的操作：1. 在不

9、停主機(jī)的情況下，停泵；2. 將閥A從In轉(zhuǎn)向Out；3. 調(diào)換流動(dòng)相和固定相。用疏水性的相作為流動(dòng)相，而用親水性的相作為新的固定相；4. 重新連接，開泵；5. 如果出現(xiàn)基線漂移和真實(shí)的洗脫速度與設(shè)定的洗脫速度不一致的情況，在管的出口設(shè)置一個(gè)反壓。6.過(guò)程B 流動(dòng)相：疏水性相。 洗脫模式：從尾到頭（向上）。如圖C所示，當(dāng)閥A轉(zhuǎn)向Out，組分3和4的分配系數(shù)減小，然后被洗脫下來(lái)，因?yàn)橛H水相和疏水相之間的調(diào)換。如圖d所示，當(dāng)閥A處于“In”且用親水相作為流動(dòng)相時(shí)，成份1和2被一次洗脫出來(lái)。當(dāng)閥A處于“Out”且用親脂相作為流動(dòng)相時(shí)，成份3和4被洗脫出來(lái)。這樣，樣品中所有的成份都被洗脫出來(lái)了。 閥B是

10、用于將待分離的樣品引入分離柱中。當(dāng)閥B轉(zhuǎn)向“Load”時(shí)，樣品進(jìn)入樣品環(huán)中；然后，將閥B轉(zhuǎn)向“Inject”，樣品被流動(dòng)相帶入分配柱中。兩個(gè)閥的連接及閥A的工作流路描述：圖4 當(dāng)閥A轉(zhuǎn)向“In”時(shí)（閥B處于Inject）圖5 當(dāng)閥A轉(zhuǎn)向“Out”時(shí)（閥B處于Inject）注意：當(dāng)主機(jī)順時(shí)針旋轉(zhuǎn)時(shí)，閥A應(yīng)該轉(zhuǎn)向In。相反，當(dāng)主逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)時(shí)，閥A應(yīng)該轉(zhuǎn)向Out。樣品經(jīng)過(guò)閥B的描述：圖6 當(dāng)閥B轉(zhuǎn)向Load注射器與樣品環(huán)相連，樣品被注入樣品環(huán)中（閥A處于In）圖7 當(dāng)閥B轉(zhuǎn)向Inject泵與樣品環(huán)相連，同時(shí)樣品環(huán)與注射器之間的連接中斷。樣品環(huán)中的樣品被流動(dòng)相帶入分離柱中。（閥A處于In）。當(dāng)進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)

11、向Load。當(dāng)進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)向Load位置時(shí)，拉注射器B的活塞使進(jìn)樣管中產(chǎn)生一個(gè)負(fù)壓，注射器A中的樣品在負(fù)壓的作用下進(jìn)入進(jìn)樣閥；然后將進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)向Inject位置。這樣，整個(gè)進(jìn)樣完成。2.3進(jìn)樣步驟1、稱取適量待分離樣品；2、用分離系統(tǒng)溶劑（流動(dòng)相或者固定相或者兩者的混合溶劑）溶解樣品。溶液中不應(yīng)出現(xiàn)可見的顆粒。3、將進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)向“Load”（在轉(zhuǎn)換時(shí)，操作要迅速以防瞬時(shí)產(chǎn)生的高壓使管道爆破）。4、通過(guò)注射器將樣品吸入樣品環(huán)中。5、將閥B轉(zhuǎn)向“Inject”。6、清洗進(jìn)樣閥的進(jìn)樣管道清洗步驟如下：1） 向注射器A中倒入大約20mL清洗液（例如乙醇）；2） 通過(guò)注射器B將清洗液抽入樣品環(huán)中；3） 重復(fù)步驟

12、1和2，直到載樣管道被清洗干凈。注意：在進(jìn)樣時(shí)，首先通過(guò)進(jìn)樣閥B向樣品環(huán)中注入一些空氣以從Outlet端排除樣品環(huán)中的空氣；然后，拉注射器B的活塞將樣品吸入樣品環(huán)中。2.4控制面板控制面板用于調(diào)節(jié)分離柱的旋轉(zhuǎn)參數(shù)。緩慢的增加（順時(shí)針）或減少（逆時(shí)針）旋轉(zhuǎn)速度直到獲得理想速度。2.4.1功能鍵介紹：調(diào)高及調(diào)低設(shè)定值“FWD”：順時(shí)針旋轉(zhuǎn)鍵。選著順時(shí)針旋轉(zhuǎn)模式。“REV”：逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)鍵。選著逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)模式。速度調(diào)節(jié)旋鈕。調(diào)節(jié)旋轉(zhuǎn)速度。順時(shí)針旋轉(zhuǎn)增加轉(zhuǎn)速，逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)減小轉(zhuǎn)速?！癝TOP”：停止鍵。關(guān)閉主機(jī)。2.4.2控制面板的操作調(diào)節(jié)順時(shí)針旋轉(zhuǎn)速度1、 打開電源開關(guān)。三秒鐘后，顯示屏將閃爍。2、 按

13、下FWD鍵，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)指示燈將變亮。3、 緩慢正向調(diào)節(jié)速度調(diào)節(jié)旋鈕直到顯示器上的速度到達(dá)理想值。調(diào)節(jié)逆向旋轉(zhuǎn)速度1、 打開電源開關(guān)。三秒鐘后，顯示屏將閃爍。2、 按下REV鍵，逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)指示燈將變亮。3、 正向緩慢調(diào)節(jié)速度調(diào)節(jié)旋鈕直到顯示器上的速度到達(dá)理想值。停止旋轉(zhuǎn)1、 逆時(shí)針緩慢調(diào)節(jié)速度調(diào)節(jié)旋鈕直到顯示屏顯示速度為0。2、 按下STOP。旋轉(zhuǎn)指示燈將熄滅，顯示器上的0將閃爍。改變旋轉(zhuǎn)方向A、 從正向旋轉(zhuǎn)變成反向旋轉(zhuǎn)1、 按照停止旋轉(zhuǎn)的操作步驟停止分離柱的正向旋轉(zhuǎn)。2、 按照逆向速度調(diào)節(jié)操作步驟操作。B、 從逆向旋轉(zhuǎn)變成正向旋轉(zhuǎn)1、 按照停止旋轉(zhuǎn)的操作步驟停止分離柱的逆向旋轉(zhuǎn)2、 按照正向速

14、度調(diào)節(jié)操作步驟操作2.5TBE-300B高速逆流色譜的工作流程3.安裝3.1檢查包裹在安裝之前，請(qǐng)仔細(xì)檢查儀器，看是否存在明顯的破損以及附件是否齊全。3.2安裝環(huán)境必須將儀器放置在一個(gè)長(zhǎng)大約1500mm，寬大約750mm的穩(wěn)定而安全的平臺(tái)上。在儀器底部和平臺(tái)之間放置一塊厚3mm的彈性橡膠墊以防震動(dòng)。確保將儀器安放在裝有空調(diào)的房間內(nèi)，并使其遠(yuǎn)離易燃易爆物品。3.3連接管.將濾頭放入已配好的溶劑中。.將泵的出口端與TBE-300主機(jī)進(jìn)口端通過(guò)聚四氟乙烯管相連。用扳手將接口扭緊至不漏液。.將溶劑泵入高速逆流色譜儀主機(jī)。.用聚四氟乙烯管將主機(jī)路出口端與檢測(cè)器流通池進(jìn)口端相連。.溶劑從主機(jī)流出，經(jīng)管路進(jìn)

15、入檢測(cè)器流通池中。.最終，溶劑經(jīng)檢測(cè)流入收集容器中。3.4連接保溫系統(tǒng)的管路將循環(huán)器的出口端與主機(jī)背面的INLET端相連。然后，將主機(jī)背面的OUTLET端與循環(huán)水浴器的進(jìn)口端相連。所有的連接都需要很好的固定。3.5連接信號(hào)線從檢測(cè)器中產(chǎn)生的信號(hào)經(jīng)由信號(hào)線傳入色譜工作站中。注意：在信號(hào)線的端口有紅、黑兩個(gè)終端。根據(jù)顏色將這些終端相連。4.操作4.1準(zhǔn)備以一定的比例混合固定相和流動(dòng)相。將混合液靜置幾個(gè)小時(shí)或者超聲脫氣半個(gè)小時(shí)。連接電源、信號(hào)線及管路。確保電源及信號(hào)線連接牢固，并確保流通管路無(wú)漏液。仔細(xì)檢查管線保證它們處于正確的連接位置。4.2操作程序打開水?。捍蜷_循環(huán)器的電源開關(guān)，介質(zhì)將在循環(huán)器和

16、主機(jī)保溫管路之間循環(huán)。根據(jù)用戶使用指南設(shè)定溫度，然后開始水浴。達(dá)到設(shè)定溫度后，樣品將在一個(gè)恒定的溫度下被分離。警告：1.在開啟主機(jī)前，確保加熱循環(huán)介質(zhì)已處于循環(huán)狀態(tài)以防主機(jī)齒輪熱膨脹被損壞。 2.我們建議采用蒸餾水作為溫度調(diào)節(jié)循環(huán)器的工作介質(zhì)，并且應(yīng)該經(jīng)常更換水。 3.循環(huán)器的設(shè)定溫度應(yīng)該小于40。 4.溫度調(diào)節(jié)循環(huán)器上顯示的溫度比保溫管中的實(shí)際溫度小2。4.3系統(tǒng)平衡在行星運(yùn)動(dòng)下，當(dāng)流動(dòng)相通過(guò)螺旋管柱時(shí)，它會(huì)逐漸占據(jù)柱子中固定相的部分空間。由于行星運(yùn)動(dòng)，柱子中的兩溶劑將到達(dá)動(dòng)力學(xué)平衡。流動(dòng)相不斷地通過(guò)固定相并流出。在此過(guò)程中，柱子中仍然會(huì)保留部分固定相。我們稱這一過(guò)程為系統(tǒng)平衡。平衡系統(tǒng)有兩

17、種方法：4.3.1單泵平衡當(dāng)色譜系統(tǒng)只配置一個(gè)當(dāng)通道泵時(shí)，單泵平衡是唯一可行的方法。操作步驟如下：a)打開泵，以最高的流速將配好的固定相從主機(jī)進(jìn)口端泵入主機(jī)；當(dāng)固定相從出口端流出時(shí)，停泵?，F(xiàn)在，主機(jī)中的管路充滿了固定相；注意：1.在實(shí)驗(yàn)之前，應(yīng)該將固定相和流動(dòng)相靜置24小時(shí)或者超聲脫氣半個(gè)小時(shí)。 2.確保固定相足夠充滿管路；確保泵的砂芯濾頭總是處于固定相的液面之下以防將空氣泵入分離柱中。 3.要經(jīng)常清洗泵的砂芯濾頭。 4.保持流體的壓力在2MPa下以防主機(jī)中管路爆破。5.當(dāng)泵下相時(shí)，做如下檢查： 5-1.確保進(jìn)樣閥處于INJECT檔； 5-2.檢查管路有無(wú)泄漏情況。如果有，按照下述操作解決：a

18、.如果管路破了，用新的管路替換。b.如果管路的連接出有泄漏，將它們扭緊。c.如果仍然有泄漏情況，檢查管路末端的氣封墊是否損壞；如果是，則用新的替換。 5-3.檢查管路是否堵塞。如果是，壓力會(huì)逐漸增高。當(dāng)超過(guò)2MPa，管路會(huì)爆破。因此，如果管路被堵塞，應(yīng)該盡快地停泵。不要運(yùn)行泵，除非故障被解決。b）打開主機(jī)電源開關(guān)，按下控制面板上的FWD鍵。然后緩慢地順時(shí)針旋轉(zhuǎn)速度調(diào)節(jié)柄知道旋轉(zhuǎn)速度到達(dá)理想值。使主機(jī)逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)，先按REV鍵，其他操作同上。c）將泵進(jìn)口端的濾頭插入流動(dòng)相液面下；運(yùn)行泵，將流動(dòng)相以適合的流速（建議2mL/min）泵入柱子中使系統(tǒng)平衡。警告：1.應(yīng)該緩慢增加或減小旋轉(zhuǎn)速度； 2.確保

19、泵的濾頭總是處于流動(dòng)相的液體中，以防空氣被泵入分離柱中。 3.保持流體壓力小于2MPa，以防損壞分離柱。 4.當(dāng)環(huán)境中的溫度低于5時(shí)，在關(guān)掉主機(jī)后，將循環(huán)系統(tǒng)中的所有水排空。 5.當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間不使用儀器時(shí)，將循環(huán)系統(tǒng)中的水排放干凈。4.3.2雙泵平衡當(dāng)高速逆流色譜系統(tǒng)配備有2個(gè)單通道泵或一個(gè)雙通道泵時(shí)，我們能夠選擇這種方法。具體步驟如下： 以合適的比例設(shè)定兩個(gè)泵的流率，然后同時(shí)運(yùn)行它們。流速大的泵用于泵固定相，而流速小的泵用于泵流動(dòng)相。 溶劑從主機(jī)的流出口流出，表明溶劑已經(jīng)充滿柱子，停止泵固定相；然后，設(shè)定流動(dòng)相的流率作為工作流率。按照設(shè)定的速度和方向運(yùn)行主機(jī)。 當(dāng)溶劑在主機(jī)中到達(dá)平衡時(shí)，流出物為

20、流動(dòng)相。4.4樣品分離1.平衡后，記下固定相流出物的體積。通過(guò)注射器進(jìn)樣，同時(shí)調(diào)整檢測(cè)器及色譜工作站的參數(shù)。記下色譜圖，并收集樣品成份。注意：在檢測(cè)之前，運(yùn)行檢測(cè)器45min；通過(guò)記錄固定相的體積，我們能夠計(jì)算保留率。2.收集到成份后，關(guān)掉主機(jī)，排空管中的液體（用氣體或者液體），同時(shí)收集固定相中的樣品成份。5.維護(hù)5.1清洗系統(tǒng)a.在排完管路中的所有溶劑后，向分離柱中泵入大約50mL甲醇或乙醇；b.停泵，并將主機(jī)進(jìn)口端與一氣體供應(yīng)裝置相連。然后，將清洗溶劑經(jīng)由吹出。c.如果需要，重復(fù)步驟1-2兩次；d.在低于300的轉(zhuǎn)速下逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)分離柱5min，同時(shí)向分離柱中吹氣以排出剩余的溶劑。注意：根據(jù)

21、樣品的特性選擇清洗劑；甲醇和乙醇是常用的清洗劑。 如果溶劑系統(tǒng)中溶解有某種鹽或者緩沖液，首先用蒸餾水清洗系統(tǒng)，然后用甲醇或乙醇清洗； 在清洗過(guò)程中，可以將主機(jī)與檢測(cè)器相連以便檢測(cè)器的流通池能夠同時(shí)被清洗。5.2警告保持流體壓力小于2MPa（大約每平方厘米20千克），以防分離柱被損壞。主機(jī)應(yīng)該遠(yuǎn)離危險(xiǎn)品（至少1m）。操作過(guò)程中，至少應(yīng)有一人負(fù)責(zé)看管。6.系統(tǒng)特性及工作參數(shù)：管路容積：260mL旋轉(zhuǎn)速度范圍：01000rpm，建議轉(zhuǎn)速范圍700900rpm流動(dòng)相的流速：通常采用1.52.5mL/min樣品環(huán)體積：20mL最大壓力：2MPa（每平方厘米20千克）電壓：220±20v，頻率：

22、50Hz尺寸：330×600×550mm重量：80Kg環(huán)境：高度<3000m 相對(duì)濕度<80% 溫度：10-30附錄ATBE-300系統(tǒng)測(cè)試（A）分離苯酚及間苯二酚 溶劑系統(tǒng)：正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水（1:1:1.2：0.8）根據(jù)上述比率配制溶液，并靜置過(guò)液。上相溶劑作為固定相，而下相溶劑作為流動(dòng)相。溶解樣品（30mg苯酚和30mg間苯二酚）在上相和下相的混合溶劑中。1、測(cè)量柱溶劑（主機(jī)中管路的體積） 將500mL上相溶劑置于有刻度的燒瓶中，并泵入分離柱中。持續(xù)泵入固定相直至上相溶劑從出口端流出，流出液體積達(dá)到20mL。停泵后，記錄有刻度燒瓶中剩余上相溶劑的體

23、積和流出液的體積：柱溶劑計(jì)算（Vwhole）：Vwhole=500-Vremianing-Voutflow(1)Vwhole分離柱的全容積（mL）Vremianing有刻度的燒瓶中剩余上相溶劑的容積（mL）Voutflow流出液的體積（mL）2、固定相保留率的測(cè)量分離柱充滿上相溶劑后，讓分離柱以850rmp速度順時(shí)針旋轉(zhuǎn)。同時(shí)，將流動(dòng)相以2.0mL/min的流速泵入分離柱中。當(dāng)流動(dòng)相從出口端開始流出時(shí)，記錄被流動(dòng)相推出的上相溶劑的容積（Vpushed）；固定相保留率計(jì)算：固定相保留率=(Vwhole-Vpushed)/(Vwhole-Vsample loop)×100%（2）固定相的

24、保留率值應(yīng)該大于40%3、 確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)峰系統(tǒng)平衡后，通過(guò)進(jìn)樣閥裝載樣品。然后，用流動(dòng)相以2.0mL/min洗脫直到標(biāo)準(zhǔn)峰出現(xiàn)。整個(gè)洗脫過(guò)程將被高度逆流色譜工作站記錄下來(lái)。附錄B經(jīng)常清洗在正常使用一段時(shí)間后，管壁上會(huì)附著一些沉淀物。這些沉淀物會(huì)使樣品受到污染，使管路堵塞甚至破裂。因此，為避免這些事情的發(fā)生，我們建議經(jīng)常清洗。清洗分離柱的程序：a) 準(zhǔn)備60mL0.5%NaOH溶液，并將其泵入分離柱中。停泵，并讓分配柱在較低的速度（不超過(guò)300rmp）下旋轉(zhuǎn)30min。然后，停止旋轉(zhuǎn)，并用氣體吹出管路中的NaOH溶液；b) 向分離柱中泵入100mL水（85），讓分配柱在較低的速度（不超過(guò)300rmp

25、）下旋轉(zhuǎn)30min以使管壁上殘留的堿液排出柱子。然后，用氣體將管路中的水慢慢吹出。c) 重復(fù)步驟b2-3次，使殘留的NaOH溶液被完全排出。d) 向分離柱中泵入100mL丙酮（分析純），并讓分配柱在較低的速度（不超過(guò)300rmp）下旋轉(zhuǎn)3-4min。當(dāng)丙酮在柱子中均勻分布后，增加轉(zhuǎn)速（不超過(guò)600rmp），并讓其旋轉(zhuǎn)30min。然后，停止旋轉(zhuǎn)，并用氣體將管路中的丙酮緩慢吹出。e) 向分離柱中泵入100mL甲醇（分析純）。讓分配柱在較低的速度（不超過(guò)300rmp）下旋轉(zhuǎn)半個(gè)小時(shí)。然后，停止旋轉(zhuǎn)，并將管路中的甲醇慢慢吹出。到此，整個(gè)清洗過(guò)程就完成了。警告：！在整個(gè)清洗過(guò)程中，泵的保護(hù)壓力應(yīng)該設(shè)為1MPa以避免管道因堵塞而破裂。！不能使用飽和碳酸氫鈉溶液以防生成沉淀導(dǎo)致管路堵塞。！如果步驟3的清洗結(jié)果不好，重復(fù)步驟3一到兩次直到管路中流出的液體澄清透明。！如果整個(gè)清洗程序不能達(dá)到理想結(jié)果，建議更換清洗劑（氯仿或者乙醇）。！設(shè)備正常使用情況下，建議每6個(gè)月對(duì)設(shè)備進(jìn)行一次完全的清洗。！整個(gè)清洗過(guò)程產(chǎn)生的廢液應(yīng)該分別存放于不同的容器中。！每年更換一次連接管路（1440工作小時(shí)），每6個(gè)月