銀屑病皮損中TIG1mRNA表達(dá)及其與異常分化的關(guān)系

1、銀屑病皮損中TIG1 mRNA表達(dá)及其與異常分化的關(guān)系【摘要】 目的 檢測銀屑病中抑癌基因TIG1的表達(dá)變化以揭示其在尋常型銀屑病發(fā)病機(jī)制中的作用。方法 用原位雜交的方法檢測正常組皮膚組織、銀屑病組未受累皮膚組織和皮損中TIG1m RNA的表達(dá)。結(jié)果 在正常組皮膚組織中，TIG1表達(dá)于表皮全層；在銀屑病組未受累皮膚組織和銀屑病邊緣皮損中，可見TIG1表達(dá)于基底上層，在銀屑病中間皮損中無表達(dá)。TIG1在銀屑病邊緣皮損和未受累組織基底層中的表達(dá)低于其在正常組皮膚基底層中的表達(dá)(P<0.01)；TIG1在銀屑病中間皮損基底上層中的表達(dá)低于其在未受累皮膚和正常組皮膚的表達(dá)(P&l

2、t;0.01)。結(jié)論 TIG1可保持表皮正常分化功能，TIG1的降低可能與銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞的異常分化相關(guān)。 【關(guān)鍵詞】 銀屑病 tazarotene誘導(dǎo)基因1 tazaroteneABSTRACT: Objective To detect alteration of antioncogene TIG1 mRNA in order to reveal the mechanism of TIG1 in psoriasis vulgaris. Methods Expression of TIG1 mRNA in normal tissues, uninvolved skin tissues and

3、 psoriatic lesions was detected by in situ hybridization. Results TIG1 mRNA was expressed in all layers of normal epidermis. In uninvolved tissues and the marginal part of psoriatic lesions, TIG1 expression could be observed in the suprabasal layers of epidermis, and there was no expression in the c

4、entral part of psoriatic lesions. TIG1 expression was less in the basal layer of the marginal part of psoriasis and uninvolved tissues compared with that of the normal skin (P<0.01). TIG1 expression was also less in the suprabasal layers of the central part of psoriasis compared with that of

5、the normal skin and the uninvolved tissues (P<0.01). Conclusion TIG1 may maintain the normal differentiation of epidermal keratinocytes and may be associated with the abnormal differentiation of psoriatic keratinocytes.2 / 13KEY WORDS: psoriasis; tazaroteneinduced gene 1; tazarotene維A酸通過與核內(nèi)兩類

6、受體結(jié)合而調(diào)節(jié)表皮增生、誘導(dǎo)分化，并抑制表皮腫瘤的形成。Tazarotene作為一類合成的RAR/選擇性炔類維A酸，可誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞(keratinocyte, KC)表達(dá)抑癌基因tazarotnene誘導(dǎo)基因(TIG)1，2和313。TIG1于1996年克隆成功1，在體內(nèi)及體外可被tazarotene誘導(dǎo)KC表達(dá)，在維A酸治療后的銀屑病皮損中，TIG1的表達(dá)升高。TIG1的強(qiáng)烈表達(dá)可誘導(dǎo)維A酸受體(retinoid acid receptor, RAR)特異性因子表達(dá)，且TIG1可類似于一種免疫細(xì)胞中的維酸反應(yīng)分子CD384。在正常皮膚組織中，KC在表皮中從基底層到角質(zhì)層，逐漸分化脫落，而

7、鱗癌組織中，出現(xiàn)大量分化不良的KC。由于TIG1與細(xì)胞的增殖和分化狀態(tài)有關(guān)，又可被維A酸誘導(dǎo)，而銀屑病為復(fù)發(fā)性慢性炎癥性皮膚病，其主要治療方法為維A酸，故我們檢測TIG1在尋常性銀屑病中的表達(dá)以了解其作用機(jī)制。1 材料與方法1.1 研究對象和分組 收集臨床和病理確診的進(jìn)行期尋常型銀屑病28例(男17例，女11例；年齡16-48歲，平均33.8歲)為銀屑病組。18例正常組織(男12例，女6例，年齡18-51歲，平均36.1歲)為正常組。此兩組一般狀況統(tǒng)計學(xué)分析差異無統(tǒng)計學(xué)意義。1.2 材料 原位雜交試劑盒購自武漢博士德生物公司，TIG1的探針序列：5>AAAGT TCACG TGG

8、TC TTCAG CACAG AGCGC TACAA<3，5>ATAGT CAGCA TACCT GATAA TCATG GACAT ATTGA<3， 5>AATCA GA AAC CCAGA CCAAC CATCA ATGTA ACTTG<3，5地高辛標(biāo)記，與人類其他基因無同源性。1.3 方法 原位雜交方法如文獻(xiàn)5所述。銀屑病組外科無菌包切開取皮損及皮損周圍組織(距皮損小于0.5cm)，正常組織仍用無菌包切開取皮膚組織，100mL/L福爾馬林(DEPC配制)固定標(biāo)本，石蠟包埋組織，切片脫蠟水化后用30mL/L雙氧水(DEP

9、C配制)孵育10min，DEPC水洗6min；蛋白酶K37消化30min，以去除阻礙探針結(jié)合的表面蛋白；PBS和DEPC各水洗6min；每片加預(yù)雜交液20L，42孵育2h；其后加入濃度為13pmol/L的寡核苷酸探針20L，42雜交22h；2×SSC和1×SSC液各洗15min，羊血清封閉液37封閉30min，生物素化的鼠抗地高辛37孵育30min，辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素復(fù)合物37孵育30min，DAB染色，蘇木素復(fù)染。陰性對照用預(yù)雜交液(寡核苷酸不加入探針)代替雜交液。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：角質(zhì)形成細(xì)胞中有棕黃色顆粒沉著，陰性無此沉著。1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用卡方檢驗和精確概

10、率法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析(SPSS13.0)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 原位雜交檢測TIG1 mRNA在各組織中的表達(dá)結(jié)果 正常組中TIG1的棕黃染色位于正常表皮全層(圖1A)；在銀屑病組未受累皮膚組織中，其陽性主要表達(dá)于基底上層，部分區(qū)域基底層著色(圖1B)，在邊緣皮損中，TIG1表達(dá)于棘層上部，在棘層下部及基底層中無表達(dá)(圖1C)，而在中間皮損中無表達(dá)(圖1D)。圖1 原位雜交檢測TIG1 mRNA在各皮膚組織中的表達(dá)（略）Fig.1 Expression of TIG1 mRNA in different skin tissues by in situ h

11、ybridizationA: Normal skin: there was brown staining in all layers of epidermis (×200); B: Uninvolved skin tissues: brown expression could be observed in suprabasal layers of epidermis (×400); C: The marginal part of psoriatic tissues: TIG1 expression could be observed in the upper or midd

12、le layers of stratum spinosum (×200); D: The central part of psoriatic tissues: there was no staining (×100)2.2 TIG1 mRNA在各組皮膚組織表皮基底層內(nèi)的表達(dá)比較 TIG1在正常組皮膚基底層中的表達(dá)高于其在銀屑病組未受累組織和邊緣皮損基底層中的表達(dá)：TIG1在正常組皮膚基底層中的陽性率為12/18(66.7%)，而在銀屑病組未受累組織和邊緣皮損中表達(dá)分別為4/28(14.3%)，2/28(7.1%)，前者與后兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(2=13.3, 2=18.3,

13、 P<0.01)。2.3 TIG1 mRNA在各組皮膚的表達(dá)比較 TIG1在正常組皮膚和在銀屑病組未受累皮膚中的表達(dá)高于其在銀屑病中間皮損中的表達(dá)：TIG1在正常組皮膚和銀屑病組未受累皮膚中的陽性率分別為12/18(66.7%)，而在銀屑病組中間皮損中的表達(dá)為1/28(3.6%)，前者與后者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(2=21.5, P<0.01)。3 討論 我們的結(jié)果表明TIG1可能與角質(zhì)形成細(xì)胞的分化狀態(tài)有關(guān)。正常表皮各層KC均可產(chǎn)生TIG1，故TIG1具有保持正常皮膚組織分化增殖的功能67。本研究結(jié)果顯示，在銀屑病患者的未受累表皮中，高分化角質(zhì)形成細(xì)胞如棘層上部和顆粒層

14、均表達(dá)TIG1，銀屑病邊緣皮損中TIG1的表達(dá)下降，且只表達(dá)于棘層上部。在銀屑病患者未受累組織和邊緣皮損的表達(dá)類似于involucrin的表達(dá)8，而后者是高分化角質(zhì)形成細(xì)胞的標(biāo)志，其陽性表達(dá)處說明細(xì)胞分化較好。在銀屑病中間皮損中，細(xì)胞周期加快，表皮經(jīng)過時間很短，細(xì)胞尚未分化好就經(jīng)歷凋亡9，故TIG1也未見著色，說明TIG1也有望作為一種與KC分化狀態(tài)有關(guān)的指標(biāo)。 作為一種抑癌基因，TIG1的啟動基因可以超甲基化，且TIG1基因表達(dá)與啟動子超甲基化狀態(tài)有關(guān)，當(dāng)用5AzadCyd處理后，TIG1的表達(dá)可恢復(fù)10。這些均說明，啟動子超甲基化狀態(tài)抑制了TIG1的基因表達(dá)，而TIG1基因的乙酰化狀態(tài)并不

15、能導(dǎo)致其基因沉默。TIG1基因表達(dá)依賴于RAR2促進(jìn)子的甲基化狀態(tài)，在某些腫瘤細(xì)胞系中，由于啟動子超甲基化所致的TIG1基因的缺失可導(dǎo)致對維A酸治療的反應(yīng)性喪失10。最近的研究表明：TIG1作為抑癌基因，在前列腺癌細(xì)胞系及活體腫瘤組織中表達(dá)均下降，通過轉(zhuǎn)染表達(dá)載體而恢復(fù)TIG1的表達(dá)后，在很大程度上減弱了腫瘤對裸鼠的侵襲性及致瘤性(2.4倍)11。如前所述，在某些腫瘤細(xì)胞系中，由于啟動子超甲基化所致的TIG1基因的缺失可導(dǎo)致對維A酸治療的反應(yīng)性喪失7，故TIG1的表達(dá)也與角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖狀態(tài)有關(guān)，其基因缺失可導(dǎo)致異常性增生。 故在正常皮膚組織中TIG1可保持角質(zhì)形成細(xì)胞正常增殖和分化的功能，

16、在銀屑病早期，角質(zhì)形成細(xì)胞經(jīng)歷異常分化，導(dǎo)致角質(zhì)形成細(xì)胞分泌的分化因子改變，且TIG1啟動基因可以超甲基化而影響其基因表達(dá)，形成異常增殖和分化?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1Nagpal S, Patel S, Asano AT, et al. Tazaroteneinduced gene 1, a novel retinoid acid receptorresponsive gene in skin J. J Invest Dermatol, 1996, 106:269274.2Nagpal S, Patel S, Jacobe H, et al. Tazaroteneinduced gene 2 (TI

17、G2), a novel retinoidresponsive gene in skin J. J Invest Dernatol, 1997, 109(1):9195.3Duvic M, Helekar B, Schulz C, et al. Expression of a retinoidinducible tumor suppressor, Tazaroteneinducible gene3, is decreased in psoriasis and skin cancer J. Clin Cancer Res, 2000, 6(8):32493259.4Nagpal S, Chand

18、raratna RA. Recent developments in receptorselective retinoids J. Curr Pharm Des, 2000, 6:919931.5鄭焱，彭振輝，譚升順，等. 維甲酸誘導(dǎo)前后異維甲酸受體在銀屑病中的變化 J. 西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版), 2003, 24(3):258260.6Youssef EM, Chen XQ, Higuchi E, et al. Hypermethylation and silencing of the putative tumor suppressor Tazaroteneinduced gene 1 in human cancers J. Cancer Res, 2004, 64(7):24112417.7陳建麗，曹婷婷. 全反式維甲酸對A549細(xì)胞株增殖和Caspase3蛋白表達(dá)的影響 J. 鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版), 2007, 42(3):531533.8Youssef EM, Chen XQ, Higuchi E, et al. Hypermeth