天然藥物化學(xué)-黃酮類(圖文并茂)講課教案

1、天然藥物化學(xué)-黃酮類(圖文并茂) 黃酮類化合物黃酮類化合物，是自然界存在的一類具有多方面生理和藥理作用的物質(zhì)，蜂膠蜂膠中含的黃酮類化合物黃酮類化合物其品種和數(shù)量都非常豐富，有關(guān)科研人員從各種不同的蜂膠中，分離和鑒定的黃酮類化合物黃酮類化合物就有桷皮素等46種，其中，5，7-二羥基-3,4二甲基黃酮和5-羥基4，7-二甲氧基雙氫黃酮， 首次從蜂膠中發(fā)現(xiàn)，成為蜂膠中獨(dú)特的有效成分。不同產(chǎn)地、不同的膠源植物種類，其所含的黃酮類化合物黃酮類化合物的品種和數(shù)量不同。 研究人員(1985年)測定了中國產(chǎn)的蜂膠樣品，其黃酮平均含量為10.31 0.29。醫(yī)學(xué)工作者發(fā)現(xiàn)，許多治療冠心病的中草藥和有活血化瘀作用

2、的中藥，都含有黃酮類成分。因此，黃酮類化合物黃酮類化合物是一種具有重要藥理作用的化合物。三碳鏈氧化程度三碳鏈氧化程度B環(huán)（苯基）連接位置（環(huán)（苯基）連接位置（2-位或位或3-位）位）以及三碳鏈?zhǔn)欠駱?gòu)成環(huán)狀以及三碳鏈?zhǔn)欠駱?gòu)成環(huán)狀6O5432187654321BAC黃酮類化合物的苷元的結(jié)構(gòu)類型根據(jù)黃酮類化合物的苷元的結(jié)構(gòu)類型根據(jù):分為下列類型：分為下列類型：12種種OOHOOHOHOHluteolin 木犀草素（木犀草素（luteolin），存在于忍冬藤、），存在于忍冬藤、菊花、浮萍中，具有抗菌作用。菊花、浮萍中，具有抗菌作用。 1. 黃酮類（黃酮類（flavones）抗菌成分主要有抗菌成分主要有

3、:黃芩為清熱解毒類中藥，黃芩為清熱解毒類中藥，黃芩苷黃芩苷(baicalin)次黃芩素次黃芩素(wogonin)等等OOOOOHO黃芩素(黃色)OOOHHOHO黃芩酶黃芩苷COOHHOOHOHOOOOHHOO槐米中含有槐米中含有:2. 黃酮醇類（黃酮醇類（flavonols）蘆丁蘆丁槲皮素槲皮素 槐米為豆科植物槐樹( Sophora jdponica L.)的花蕾。在二千年前我國即作藥用，神農(nóng)本草經(jīng)將愧實列為上品。其中，蘆丁是有效成分，可用于治療毛細(xì)血管脆性引起的出血癥，并用于高血壓的輔助治療劑。 RUTINOOOHHOOHOHOrutinoseOOOHHOOHOHOHQUERCETIN槲皮素

4、槲皮素(quercetin)具有抗炎、止咳祛痰等作用。槲具有抗炎、止咳祛痰等作用。槲皮素片用于治療支氣管炎。此外還有降低血壓、增皮素片用于治療支氣管炎。此外還有降低血壓、增強(qiáng)毛細(xì)血管抵抗力、減少毛細(xì)血管脆性、降血脂、強(qiáng)毛細(xì)血管抵抗力、減少毛細(xì)血管脆性、降血脂、擴(kuò)張冠狀動脈、增加冠脈血流量等作用。擴(kuò)張冠狀動脈、增加冠脈血流量等作用。 蘆丁蘆丁(rutin)是是槲皮素的槲皮素的3O蕓香糖苷蕓香糖苷。用于治療毛。用于治療毛細(xì)管脆弱引起的出血病，并用作高血壓的輔助治療細(xì)管脆弱引起的出血病，并用作高血壓的輔助治療劑。劑。 OCH3OOOOOHOCH3rutinose O橙皮苷(hesperidin),具

5、有Vp樣作用3. 二氫黃酮類二氫黃酮類(flavanones)甘草苷(liquiritin),具有潰瘍抑制作用OOOglcHO 柚柚皮素（皮素（Naringenin）：來源于蕓香科植物柚）：來源于蕓香科植物柚(Citrus paradisi Macfadyen)的果實；分子式的果實；分子式C15H12O5；分子量；分子量 272.25結(jié)構(gòu)式：結(jié)構(gòu)式： 柚柚皮皮苷苷OOOHOCH3rutinose O橙皮苷(hesperidin),具有Vp樣作用OCH3OHOHOHOOOHOOHOCH2OHOOHOHOOHOOHOHOOCH2OHOHOCH3水飛薊素(SILYBIN)4二氫黃酮醇類二氫黃酮醇類(

6、flavanonols) 水飛薊素水飛薊素是是二氫黃酮醇二氫黃酮醇與與苯丙素衍生物苯丙素衍生物縮合成縮合成的黃酮木脂素類成分。的黃酮木脂素類成分。 具有保肝作用，用于治療急、慢性肝炎及肝硬化，具有保肝作用，用于治療急、慢性肝炎及肝硬化，代謝中毒性肝損傷。代謝中毒性肝損傷。查耳酮654321654321O5查爾酮類（查爾酮類（chalcones）查爾酮為苯甲醛縮苯乙酮類化合物查爾酮為苯甲醛縮苯乙酮類化合物。OHHOOOHO鄰羥基查耳酮二氫黃酮 二氫黃酮的吡酮環(huán)芳香性低，在堿的作用二氫黃酮的吡酮環(huán)芳香性低，在堿的作用下易開環(huán)生成下易開環(huán)生成6-羥基查耳酮，由無色轉(zhuǎn)為深黃羥基查耳酮，由無色轉(zhuǎn)為深黃色

7、，后者經(jīng)酸化又能轉(zhuǎn)化為原來的二氫黃酮。色，后者經(jīng)酸化又能轉(zhuǎn)化為原來的二氫黃酮。其鄰羥基衍生物可視為二氫黃酮的異構(gòu)體，二者可相互轉(zhuǎn)化。其鄰羥基衍生物可視為二氫黃酮的異構(gòu)體，二者可相互轉(zhuǎn)化。菊科植物紅花。菊科植物紅花。紅花所含的色素紅花所含的色素-紅花苷紅花苷。是第一個發(fā)現(xiàn)的查是第一個發(fā)現(xiàn)的查耳酮類植物成分。耳酮類植物成分。SO2氧化酶異構(gòu)化醌式紅花苷(紅色)紅花苷(carthamone)(黃色)新紅花苷(neo-carthamin)(無色)OHOOOOglcOHOHOHOHOOglcOHOOHOHOOglcOH 紅花紅花在在開花初期開花初期，花冠呈淡黃色；，花冠呈淡黃色； 開花中期開花中期，花冠

8、呈深黃色；，花冠呈深黃色； 開花后期開花后期或采收干燥過程中由于酶的作用，或采收干燥過程中由于酶的作用， 氧化成紅色。氧化成紅色。取代基7,4-二OH4-OH, 7-glc7,4-二OH,8-C-glc化合物名稱大豆素大豆苷葛根素OOHOOH 主要存在于豆科、主要存在于豆科、鳶鳶(yuan)尾科等植物中。尾科等植物中。 如如葛根葛根主要含有下列幾種異黃酮類成分。主要含有下列幾種異黃酮類成分。6異黃酮類異黃酮類 (isoflavones)葛根素葛根素 葛根總黃酮具有擴(kuò)冠、增加冠脈流量及降葛根總黃酮具有擴(kuò)冠、增加冠脈流量及降低心肌耗氧量等作用。低心肌耗氧量等作用。OOHOOHgl u 大豆素具有類

9、似罌粟堿的解痙作用。大豆素具有類似罌粟堿的解痙作用。 大豆苷、大豆苷、葛根素葛根素及大豆素均能緩解高血壓患者的頭痛等癥狀。及大豆素均能緩解高血壓患者的頭痛等癥狀。OOOHHO大豆素大豆素紫檀素OOOOCH3O7二氫異黃酮類二氫異黃酮類豆科豆科植物紫檀植物紫檀tanGINKGETINOOOHCH3OOCH3OHHOOHOO8雙黃酮類雙黃酮類 由二分子黃酮衍生物聚合生成的二聚由二分子黃酮衍生物聚合生成的二聚物，多分布于裸子植物中。物，多分布于裸子植物中。 其主要的活性成分為兩類：黃酮類和其主要的活性成分為兩類：黃酮類和萜類。萜類。德國的銀杏專利提取物德國的銀杏專利提取物EGb761（黃（黃酮酮24

10、%，萜內(nèi)酯，萜內(nèi)酯6%） 銀杏中含有多種雙黃酮，如銀杏素。銀杏中含有多種雙黃酮，如銀杏素。 矢車菊苷元(蘭色)花青素母核OHOOHOHOHO9花色苷類花色苷類(anthocyanidins) 是使花、葉、果、莖等呈現(xiàn)藍(lán)、紫、紅是使花、葉、果、莖等呈現(xiàn)藍(lán)、紫、紅等顏色的色素。以苷的形式存在于細(xì)胞液中，等顏色的色素。以苷的形式存在于細(xì)胞液中，經(jīng)水解可生成苷元經(jīng)水解可生成苷元花色素及糖?；ㄉ丶疤恰?(+)兒茶素(-)表兒茶素OHOOHOHHOHHOHHOHOOHOHOHOHH10黃烷黃烷-3-醇醇(flavan-3-ols)及黃及黃 烷烷-3，4-二醇二醇(flavan-3,4-diols)類類兒

11、茶兒茶87654321異芒果素(isomengiferin)OOHOHOOHOHglc 水龍骨科植物水龍骨科植物石韋石韋中的中的異芒果素異芒果素具有止咳祛痰具有止咳祛痰的功效。的功效。 11苯駢色酮苯駢色酮 (xanthanes)OCHHOOHOHO黃花波斯菊花黃花波斯菊花中含有中含有硫磺菊素硫磺菊素(sulphuretin)12橙酮類化合物橙酮類化合物 天然黃酮類化合物多和糖形成苷而存在，并且由于糖的種類、數(shù)量、連接位置及連接方式不同，組成了各種各樣的黃酮苷類。 除氧苷外，天然黃酮類化合物中還發(fā)現(xiàn)有C-鍵苷，如：葛根黃素木糖苷。 和葛根素共同構(gòu)成了中藥葛根擴(kuò)張冠狀動脈的有效成分。OOOHHO

12、OCH2OHHOOOHH葛根黃素木糖苷OOHOOHgl u葛根素糖糖醋酸-丙二酸途徑莽草酸途徑RCH2COCoACoAOOCOHx 3OHOOH查耳酮OOOHOO二、黃酮類化合物的生物合成途徑二、黃酮類化合物的生物合成途徑A環(huán)來自三個丙二酰輔酶環(huán)來自三個丙二酰輔酶AB環(huán)來自桂皮酰輔酶環(huán)來自桂皮酰輔酶A三、黃酮類化合物的生物活性三、黃酮類化合物的生物活性1. 對心血管系統(tǒng)的作用對心血管系統(tǒng)的作用 Vp樣作用：樣作用：蘆丁、橙皮苷等有蘆丁、橙皮苷等有Vp樣作用，能樣作用，能 降低血管脆性及異常通透性，可用作防治高降低血管脆性及異常通透性，可用作防治高 血壓及動脈硬化的輔助治療劑。血壓及動脈硬化的輔

13、助治療劑。 擴(kuò)冠作用：擴(kuò)冠作用：蘆丁、槲皮素、葛根素、人工全蘆丁、槲皮素、葛根素、人工全 合成的力可定合成的力可定(乙氧黃酮乙氧黃酮 )。 降血脂及膽固醇：降血脂及膽固醇：木樨草素木樨草素 蘆丁是從中國所獨(dú)有的國槐的花蕾中提取的植物蘆丁是從中國所獨(dú)有的國槐的花蕾中提取的植物藥，也稱維生素藥，也稱維生素P，具有降低毛細(xì)血管的異常通透性，具有降低毛細(xì)血管的異常通透性和脆性的作用，和脆性的作用，是心腦血管保護(hù)藥是心腦血管保護(hù)藥，國內(nèi)國內(nèi)用于心腦血用于心腦血管藥品制劑的主要成分，管藥品制劑的主要成分，國外國外還大量用于食品添加劑還大量用于食品添加劑和和化妝品化妝品。 鑒別：鑒別： (1)取本品的細(xì)粉少

14、許，加氫氧化鈉試液取本品的細(xì)粉少許，加氫氧化鈉試液5mL，溶液顯，溶液顯橘黃色。橘黃色。(2)取本品的細(xì)粉少許，加乙醇取本品的細(xì)粉少許，加乙醇15mL，微熱使蘆丁溶，微熱使蘆丁溶解，溶液分成二份：一份中加鹽酸解，溶液分成二份：一份中加鹽酸1mL與金屬鎂或金與金屬鎂或金屬鋅數(shù)小粒，漸顯紅色；另一份中加三氯化鐵試液屬鋅數(shù)小粒，漸顯紅色；另一份中加三氯化鐵試液1滴，顯棕綠色。滴，顯棕綠色。 蘆丁片蘆丁片2. 抗肝臟毒作用抗肝臟毒作用 從水飛薊種子中得到的水飛薊素具有保肝作從水飛薊種子中得到的水飛薊素具有保肝作 用，用于治療急、慢性肝炎、肝硬化及多種用，用于治療急、慢性肝炎、肝硬化及多種 中毒性肝損傷

15、。中毒性肝損傷。 （+）-兒茶素兒茶素(catergen)也可抗肝臟毒作用，也可抗肝臟毒作用， 治療脂肪肝及因半乳糖胺或四氯化碳等引起治療脂肪肝及因半乳糖胺或四氯化碳等引起 的中毒性肝損傷。的中毒性肝損傷。 本品為菊科植物水飛薊（紫花）本品為菊科植物水飛薊（紫花）Silybum marianum (L) Gacntm的果實，經(jīng)提取精制所的果實，經(jīng)提取精制所得的淡黃色粉末，或結(jié)晶性粉末。無味、無得的淡黃色粉末，或結(jié)晶性粉末。無味、無臭、易溶于丙酮、臭、易溶于丙酮、醋醋酸乙酯、乙醇及由醇、酸乙酯、乙醇及由醇、難溶于氯仿，不溶于水，主要化學(xué)成份為水難溶于氯仿，不溶于水，主要化學(xué)成份為水飛薊賓（飛薊賓

16、（Silybin) C25H22O10及其異物等黃酮類及其異物等黃酮類物質(zhì)。物質(zhì)。 功能與主治：本品具有保肝及降血脂作用，功能與主治：本品具有保肝及降血脂作用，用于治療慢性肝炎，早期肝硬變、代謝中毒用于治療慢性肝炎，早期肝硬變、代謝中毒性肝損傷及高血脂癥。性肝損傷及高血脂癥。水飛薊片水飛薊片3. 抗炎抗炎 蘆丁及其衍生物羥乙基蘆丁、二氫槲皮素等具蘆丁及其衍生物羥乙基蘆丁、二氫槲皮素等具 抗炎作用。抗炎作用。 4. 抗菌及抗病毒作用抗菌及抗病毒作用 如木樨草素、黃芩苷、黃芩素如木樨草素、黃芩苷、黃芩素 5. 解痙作用解痙作用 異甘草素、大豆素：解除平滑肌痙攣；異甘草素、大豆素：解除平滑肌痙攣；

17、大豆苷、葛根素及葛根總黃酮可緩解高血壓患大豆苷、葛根素及葛根總黃酮可緩解高血壓患者的頭痛等癥狀；者的頭痛等癥狀； 杜鵑素、川陳皮素、槲皮素、山奈酚、芫花素、杜鵑素、川陳皮素、槲皮素、山奈酚、芫花素、羥基芫花素：止咳祛痰。羥基芫花素：止咳祛痰。己烯雌酚HOOH大豆素(dadzein)OOHOOH6. 雌性激素樣作用雌性激素樣作用 大豆素大豆素(daidzein)等異黃酮具有雌性激素等異黃酮具有雌性激素樣作用，可能與它們與樣作用，可能與它們與己烯雌酚己烯雌酚結(jié)構(gòu)類似。結(jié)構(gòu)類似。 7. 清除人體自由基作用清除人體自由基作用 黃酮類化合物多具有黃酮類化合物多具有酚羥基酚羥基，易氧化，易氧化成醌類而提供

18、成醌類而提供氫離子氫離子，故有顯著的抗氧特，故有顯著的抗氧特點。點。 另外還有降血脂、血糖，抗動脈粥樣另外還有降血脂、血糖，抗動脈粥樣硬化及抗癌抗突變等作用。硬化及抗癌抗突變等作用。8.抗腫瘤作用抗腫瘤作用 抗癌新藥抗癌新藥Flavopiridol的發(fā)現(xiàn)與研制的發(fā)現(xiàn)與研制 Flavopiridol是一種源于植物（是一種源于植物（CDYSOXYLUM BINECTARIFERUM）的黃酮類化合物。）的黃酮類化合物。 目前正被用于十幾項一期和二期的癌癥臨床試驗。目前正被用于十幾項一期和二期的癌癥臨床試驗。 它的早期發(fā)現(xiàn)得益于工業(yè)界對自然產(chǎn)物的研究興趣。它的早期發(fā)現(xiàn)得益于工業(yè)界對自然產(chǎn)物的研究興趣。

19、在從樹皮中提取出純化合物后，前在從樹皮中提取出純化合物后，前HOECHST公司又進(jìn)公司又進(jìn)行了結(jié)構(gòu)與人工合成的研究。行了結(jié)構(gòu)與人工合成的研究。 由此建立了一系列同型物，包括由此建立了一系列同型物，包括Flavopiridol的專利。的專利。 最新的研究采用基因芯片的技術(shù)發(fā)現(xiàn)藥物flavopiridol殺傷癌細(xì)胞的令人驚訝的機(jī)理。這項研究是由美國國家衛(wèi)生院、美國國家癌癥研究院和EMMES公司聯(lián)合完成的，是把最新的基因工程技術(shù)用于醫(yī)藥研究的典范。它是從印度植物中提煉的植物堿，植物的葉和根是印度應(yīng)用的草藥。 在在NIH大規(guī)?？拱┪锖Y選中，大規(guī)?？拱┪锖Y選中，F(xiàn)lavopiridol脫穎而出，成為一種

20、新的低毒性的研究藥物。脫穎而出，成為一種新的低毒性的研究藥物。 它的治癌機(jī)理被認(rèn)為是作用于激酶，從而它的治癌機(jī)理被認(rèn)為是作用于激酶，從而阻斷細(xì)胞循環(huán)。這一解釋間接地為阻斷細(xì)胞循環(huán)。這一解釋間接地為CDK2-Flavopiridol的復(fù)合晶體結(jié)構(gòu)所證實。的復(fù)合晶體結(jié)構(gòu)所證實。 跨學(xué)科外向的合作以及現(xiàn)代技術(shù)的應(yīng)用是跨學(xué)科外向的合作以及現(xiàn)代技術(shù)的應(yīng)用是加速加速Flavopiridol和其他后續(xù)藥物的研究與開發(fā)和其他后續(xù)藥物的研究與開發(fā)所不可缺少的。所不可缺少的。 cyclin dependent kinase(CDK)細(xì) 胞 周 期 蛋 白 依 賴 激 酶最近，不同的研究者證實其對艾滋病也有異于其他

21、藥物的療效。最近，不同的研究者證實其對艾滋病也有異于其他藥物的療效。第二節(jié)第二節(jié) 黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)一、性狀一、性狀 1. 多為結(jié)晶性固體，少為（如黃酮苷類）無定多為結(jié)晶性固體，少為（如黃酮苷類）無定 形粉末。形粉末。 2. 旋光性旋光性：游離苷元中，除二氫黃酮、二氫黃：游離苷元中，除二氫黃酮、二氫黃 酮醇、黃烷、黃烷醇及雙黃酮有旋光外，其酮醇、黃烷、黃烷醇及雙黃酮有旋光外，其余無旋光性。余無旋光性。 苷類由于結(jié)構(gòu)中引入糖的分子，均有旋光苷類由于結(jié)構(gòu)中引入糖的分子，均有旋光性，且多為左旋。性，且多為左旋。 OOOOOO3. 顏色：與顏色：與分子中是

22、否存在交叉共軛體系分子中是否存在交叉共軛體系 助色團(tuán)的數(shù)目助色團(tuán)的數(shù)目 取代基的位置有關(guān)取代基的位置有關(guān) 色原酮部分原本無色，但在色原酮部分原本無色，但在2位引入苯環(huán)位引入苯環(huán)后，即形成交叉共軛體系，且通過電子的轉(zhuǎn)移，后，即形成交叉共軛體系，且通過電子的轉(zhuǎn)移，重排，使共軛鏈延長，而表現(xiàn)出顏色。重排，使共軛鏈延長，而表現(xiàn)出顏色。 黃酮、黃酮醇及苷類黃酮、黃酮醇及苷類 灰黃灰黃- -黃色黃色 查耳酮查耳酮 黃黃- -橙黃色橙黃色 二氫黃酮、二氫黃酮醇二氫黃酮、二氫黃酮醇 無色無色 異黃酮異黃酮 微黃色微黃色 其中，黃酮、黃酮醇及苷類、查耳酮等因分子其中，黃酮、黃酮醇及苷類、查耳酮等因分子中存在交叉

23、共軛體系，在中存在交叉共軛體系，在7,4位引入位引入-OH, OCH3等供等供電子基團(tuán)則促進(jìn)電子移位、重排，使化合物顏色加電子基團(tuán)則促進(jìn)電子移位、重排，使化合物顏色加深。深。 花色苷及其苷元的顏色隨花色苷及其苷元的顏色隨pH的不同而改變：呈的不同而改變：呈現(xiàn)紅（現(xiàn)紅（pH8.5） 二、溶解度二、溶解度1. 游離苷元難溶或不溶于水，易溶于游離苷元難溶或不溶于水，易溶于MeOH, EtOH, EtOAc, Et2O 黃酮、黃酮醇及查耳酮是平面型分子，分黃酮、黃酮醇及查耳酮是平面型分子，分子堆砌緊密，分子間引力較大，更難溶于水。子堆砌緊密，分子間引力較大，更難溶于水。 二氫黃酮、二氫黃酮醇是非平面型

24、分子，二氫黃酮、二氫黃酮醇是非平面型分子，分子排列不緊密，分子間引力降低，對水的分子排列不緊密，分子間引力降低，對水的溶解度較大。溶解度較大。 花青素二氫黃酮X -或OH -OORHOH 花色苷元（花青素）類雖系平面型分子，花色苷元（花青素）類雖系平面型分子，但因以離子形式存在，具有鹽的通性，故親但因以離子形式存在，具有鹽的通性，故親水性較強(qiáng)，水溶度較大。水性較強(qiáng)，水溶度較大。 黃酮苷元引入羥基越多，水溶性越黃酮苷元引入羥基越多，水溶性越強(qiáng)，羥基甲基化后，則增加在有機(jī)溶劑強(qiáng)，羥基甲基化后，則增加在有機(jī)溶劑中的溶解度。中的溶解度。 如一般黃酮類化合物不溶于石油醚如一般黃酮類化合物不溶于石油醚中，

25、可與脂溶性雜質(zhì)分開，但川陳皮素中，可與脂溶性雜質(zhì)分開，但川陳皮素（5,6,7,8,3,4-六甲氧基黃酮六甲氧基黃酮）卻可溶于）卻可溶于石油醚。石油醚。 2. 黃酮類化合物的羥基苷化后，水溶性黃酮類化合物的羥基苷化后，水溶性相應(yīng)增大，而在有機(jī)溶劑中的溶解度相相應(yīng)增大，而在有機(jī)溶劑中的溶解度相應(yīng)減小應(yīng)減小 黃酮苷一般易溶于黃酮苷一般易溶于H2O, MeOH, EtOH等，難溶或不溶于苯，氯仿等。等，難溶或不溶于苯，氯仿等。三、酸堿性三、酸堿性1. 酸性酸性 黃酮類化合物多具有酚羥基而呈酸性，可黃酮類化合物多具有酚羥基而呈酸性，可 溶于堿性水液，吡啶，甲酰胺及二甲基甲酰溶于堿性水液，吡啶，甲酰胺及二

26、甲基甲酰胺。胺。 酸性強(qiáng)弱順序：酸性強(qiáng)弱順序：7, 4-二羥基二羥基 7, 或或4羥基羥基 一般酚羥基一般酚羥基5-羥基羥基 此性質(zhì)可用于提取、分離及鑒定工作。此性質(zhì)可用于提取、分離及鑒定工作。H2OHClClOOHOO 黃酮類化合物溶于濃硫酸中生成的黃酮類化合物溶于濃硫酸中生成的烊烊鹽常鹽常表表現(xiàn)現(xiàn)特殊的顏色，可用于鑒別。特殊的顏色，可用于鑒別。 2. 堿性堿性 -吡喃酮上的吡喃酮上的1-位氧原子上有未共用電子對，位氧原子上有未共用電子對，表性微弱的堿性，可與強(qiáng)無機(jī)酸如濃硫酸，鹽酸表性微弱的堿性，可與強(qiáng)無機(jī)酸如濃硫酸，鹽酸生成生成烊烊鹽，但極不穩(wěn)定，加水即可分解。鹽，但極不穩(wěn)定，加水即可分解

27、。 四、顯色反應(yīng)四、顯色反應(yīng)(一一)還原反應(yīng)還原反應(yīng)1. 鹽酸鹽酸-鎂粉（鹽酸鎂粉（鹽酸-鋅粉）鋅粉）反應(yīng)反應(yīng) 黃酮、黃酮醇及二氫黃酮、二氫黃酮醇類在鹽酸黃酮、黃酮醇及二氫黃酮、二氫黃酮醇類在鹽酸-鎂粉作用下，易被氫化還原，迅速生成紅鎂粉作用下，易被氫化還原，迅速生成紅-紫紅（個紫紅（個別有綠別有綠-蘭色）。蘭色）。 將將樣品樣品溶于甲醇或乙醇，加少量鎂粉振搖，滴加溶于甲醇或乙醇，加少量鎂粉振搖，滴加幾滴濃鹽酸，幾滴濃鹽酸，1-2分鐘內(nèi)（必要時微熱）即可出現(xiàn)顏分鐘內(nèi)（必要時微熱）即可出現(xiàn)顏色。多顯橙紅色。多顯橙紅-紫紅色，少數(shù)蘭紫紅色，少數(shù)蘭-紫色，紫色，B環(huán)有環(huán)有-OH或或OCH3取代時，顏

28、色隨之加深，查耳酮、橙酮、兒茶取代時，顏色隨之加深，查耳酮、橙酮、兒茶素類則不反應(yīng)。素類則不反應(yīng)。 花色素及部分查耳酮、橙酮等在濃鹽酸酸性條件花色素及部分查耳酮、橙酮等在濃鹽酸酸性條件下也會發(fā)生色變，故須先做一對照。下也會發(fā)生色變，故須先做一對照。 2. 四氫硼鈉反應(yīng)四氫硼鈉反應(yīng) 與與二氫黃酮類化合物二氫黃酮類化合物產(chǎn)生紅產(chǎn)生紅-紫色。紫色。 (其它其它黃酮類化合物黃酮類化合物均不顯色，均不顯色，可與之區(qū)別可與之區(qū)別) 取樣品取樣品10mg溶于甲醇，加溶于甲醇，加NaBH4 10mg，再滴加再滴加1%濃鹽酸或濃硫酸，呈紅濃鹽酸或濃硫酸，呈紅-紫色。紫色。 OOOHHONaBH4OOHHOOHH

29、-H2OHOHOHHO+OHOHHO+（二）金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng)（二）金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng) ?？膳c鋁鹽、鉛鹽、鋯鹽、鎂鹽等試劑生?？膳c鋁鹽、鉛鹽、鋯鹽、鎂鹽等試劑生成有色絡(luò)合物。成有色絡(luò)合物。 鋁鹽鋁鹽 1%AlCl3或或Al(NO3)3： 生成絡(luò)合物為黃色生成絡(luò)合物為黃色( max=415nm)，并有熒光。，并有熒光。 黃酮類化合物分子結(jié)構(gòu)中多有黃酮類化合物分子結(jié)構(gòu)中多有:3-OH, 4=O5-OH, 4=O鄰二酚羥基鄰二酚羥基2. 鉛鹽鉛鹽 1%PbAc2或堿式醋酸鉛水液。生成黃或堿式醋酸鉛水液。生成黃-紅色沉淀。紅色沉淀。 醋酸鉛可沉淀具有醋酸鉛可沉淀具有鄰二酚羥基或兼有鄰二酚羥基或

30、兼有3-OH, 4=O或或5-OH, 4=O者者。 堿式醋酸鉛堿式醋酸鉛可沉淀具有可沉淀具有一般酚類化合物一般酚類化合物。 觀察顏色2%枸櫞酸甲醇液黃色1ml2% ZrOCl210ml甲醇溶樣品0.5-1mg黃色不褪黃色褪去2%枸櫞酸黃色鋯絡(luò)合物 鋯鹽3-OH, 4=O5-OH, 4=O3. 鋯鹽鋯鹽: 2%氯氧化鋯甲醇液氯氧化鋯甲醇液OOHOHOOOHOHZrOClH2O4. 鎂鹽鎂鹽 醋酸鎂甲醇液作顯色劑，可在紙上進(jìn)行。醋酸鎂甲醇液作顯色劑，可在紙上進(jìn)行。 二氫黃酮（醇）類顯天藍(lán)色熒光，若具有二氫黃酮（醇）類顯天藍(lán)色熒光，若具有C5-OH， 色澤更明顯。色澤更明顯。 而黃酮、黃酮醇及異黃酮

31、類則顯黃而黃酮、黃酮醇及異黃酮類則顯黃-橙黃橙黃-褐色。褐色。 5. 氯化鍶氯化鍶(SrCl2) 使具有使具有鄰二酚羥基的黃酮鄰二酚羥基的黃酮顯綠顯綠-棕色棕色-黑色沉淀。黑色沉淀。OOHOHOOHOHOHSrOHOOHOHOOOOH2+Sr6. 氯化鐵氯化鐵(FeCl3) 檢查酚羥基。檢查酚羥基。 多數(shù)黃酮類化合物具有酚羥基，可產(chǎn)生多數(shù)黃酮類化合物具有酚羥基，可產(chǎn)生正反應(yīng)，生成綠、藍(lán)、黑、紫等顏色。正反應(yīng)，生成綠、藍(lán)、黑、紫等顏色。CCCOOH2. 有無機(jī)酸或有機(jī)酸存在有無機(jī)酸或有機(jī)酸存在 在草酸存在下，顯黃色并帶綠色熒光。在草酸存在下，顯黃色并帶綠色熒光。 在枸櫞酸丙酮存在條件下，只顯黃色

32、而無熒光。在枸櫞酸丙酮存在條件下，只顯黃色而無熒光。（三）硼酸顯色反應(yīng)（三）硼酸顯色反應(yīng)條件：條件： 1. 具有下列結(jié)構(gòu)（具有下列結(jié)構(gòu)（5-羥基黃酮，羥基黃酮，2-羥基查耳酮）羥基查耳酮）查耳酮654321654321OHOHOHOOO（四）堿性試劑顯色反應(yīng)（四）堿性試劑顯色反應(yīng) 日光及紫外光下，通過紙斑反應(yīng)，觀察樣日光及紫外光下，通過紙斑反應(yīng)，觀察樣品用堿性試劑處理后的色變情況。品用堿性試劑處理后的色變情況。 1. 二氫黃酮類易在堿液中開環(huán)，轉(zhuǎn)變成相應(yīng)二氫黃酮類易在堿液中開環(huán)，轉(zhuǎn)變成相應(yīng)異構(gòu)體異構(gòu)體查耳酮類化合物，顯橙查耳酮類化合物，顯橙-紅色。紅色。 2. 黃酮醇類在堿液中先呈黃色，通入空

33、氣后黃酮醇類在堿液中先呈黃色，通入空氣后變?yōu)樽厣?，?jù)此可與黃酮類區(qū)別。變?yōu)樽厣?，?jù)此可與黃酮類區(qū)別。 3. 黃酮類化合物當(dāng)分子中有鄰二酚羥基取代黃酮類化合物當(dāng)分子中有鄰二酚羥基取代或或3,4-二羥基取代時，在堿液中不安定，很二羥基取代時，在堿液中不安定，很快氧化，由黃色快氧化，由黃色深紅色深紅色綠棕色沉淀。綠棕色沉淀。 (五五)與五氯化銻的反應(yīng)與五氯化銻的反應(yīng) 查耳酮的無水查耳酮的無水(!)CCl4溶液與五氯化銻作溶液與五氯化銻作用生成紅或紫紅沉淀用生成紅或紫紅沉淀,黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、黃酮醇、二氫黃酮類顯黃黃酮類顯黃-橙黃色。橙黃色。 方法：方法：樣品樣品5-10mg溶于溶于5ml無水無

34、水CCl4中，中，加加1ml 2%的五氯化銻的的五氯化銻的CCl4溶液。溶液。 反應(yīng)必須無水反應(yīng)必須無水，否則生成沉淀不穩(wěn)定。，否則生成沉淀不穩(wěn)定。（六）（六）Gibbs反應(yīng)反應(yīng)檢查檢查5-OH對位未被取代的黃酮對位未被取代的黃酮。 將樣品溶于吡啶中，加入將樣品溶于吡啶中，加入Gibbs試劑顯藍(lán)試劑顯藍(lán)或藍(lán)綠色。或藍(lán)綠色。 Gibbs試劑試劑: 甲液：甲液：0.5%2,6-二氯苯醌二氯苯醌-4氯亞胺的乙醇氯亞胺的乙醇溶液。溶液。 乙液：硼酸乙液：硼酸-氯化鉀氯化鉀-氫氧化鉀緩沖液氫氧化鉀緩沖液(pH9.4)五、五、Wessely-Moser 重排重排 P181OOHOOHHO-L-arabin

35、opyranosyl-D-glucopyranosylOOHOOHHO-L-arabinopyranosyl-D-glucopyranosyl6%HCl100/7hrschaftosideisoschaftoside因此因此在鑒定該類苷的結(jié)構(gòu)時盡量不能用酸處理，而要用在鑒定該類苷的結(jié)構(gòu)時盡量不能用酸處理，而要用2D-NMR技術(shù)來確定其結(jié)構(gòu)技術(shù)來確定其結(jié)構(gòu)。第三節(jié)第三節(jié) 黃酮類化合物的提取分離黃酮類化合物的提取分離一、提取一、提取 黃酮類化合物在花、液、果等組織中，黃酮類化合物在花、液、果等組織中，多以苷的形式存在；多以苷的形式存在； 在木部堅硬組織中，多以游離苷元形式在木部堅硬組織中，多以游離

36、苷元形式存在；存在； 根據(jù)化合物極性不同，溶解性不同，采根據(jù)化合物極性不同，溶解性不同，采用不同溶劑提取。用不同溶劑提取。1. 苷元苷元 多用多用CHCl3、Et2O、EtOAc等極性較小溶等極性較小溶劑提取；劑提?。?對于多對于多OCH3化的成分，用苯、石油醚提化的成分，用苯、石油醚提??；??； 對于極性大的成分，如查耳酮、橙酮、對于極性大的成分，如查耳酮、橙酮、雙黃酮、羥基黃酮等，用雙黃酮、羥基黃酮等，用EtOAc、EtOH、Me2CO、MeOH:H2O(1:1)等溶劑提取。等溶劑提取。 2. 苷類苷類 水或熱水提取，（多糖苷在熱水中溶解水或熱水提取，（多糖苷在熱水中溶解度較大，在冷水中溶解

37、度較?。?；度較大，在冷水中溶解度較?。?； 也可用也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。提取。 3. 含羥基的苷或苷元，可用含羥基的苷或苷元，可用堿水堿水提取。提取。 4. 提取花青素類可加入少量酸，但一般黃提取花青素類可加入少量酸，但一般黃酮類化合物則應(yīng)避免。酮類化合物則應(yīng)避免。 二、粗提物的精制處理二、粗提物的精制處理1溶劑萃取法去雜溶劑萃取法去雜 石油醚：除去石油醚：除去葉綠素、胡葉綠素、胡籮籮卜素卜素等脂溶性色素等脂溶性色素 水溶醇沉：除去水溶醇沉：除去蛋白質(zhì)、多糖、大分子蛋白質(zhì)、多糖、大分子水溶性物水溶性物質(zhì)質(zhì) 逆流分配：水逆流分配：水-乙乙酸乙酯，正丁醇酸乙酯，正丁醇-石油醚石油

38、醚 在萃取除雜的同時，可使不同極性或極性相差較在萃取除雜的同時，可使不同極性或極性相差較大者分離，如極性不同的苷和苷元，極性苷元和大者分離，如極性不同的苷和苷元，極性苷元和非極性苷元。非極性苷元。 2堿水提酸沉淀法堿水提酸沉淀法 適用于含酚羥基的化合物，如適用于含酚羥基的化合物，如槐米中槐米中蘆丁蘆丁的的提取提取。 注意事項：注意事項： 酸堿度不宜過大酸堿度不宜過大 鄰二酚羥基的保護(hù)：堿性條件下，鄰二酚羥基鄰二酚羥基的保護(hù)：堿性條件下，鄰二酚羥基易被氧化，加硼砂保護(hù)易被氧化，加硼砂保護(hù) 石灰乳的加入可除去果膠、粘液等水溶性酸性石灰乳的加入可除去果膠、粘液等水溶性酸性雜質(zhì)雜質(zhì) 3炭粉吸附法炭粉吸

39、附法適用于苷類的精制工作。適用于苷類的精制工作。 植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，過濾得吸附苷的活性炭粉末。過濾得吸附苷的活性炭粉末。 依次用沸甲醇、沸水、依次用沸甲醇、沸水、7%酚酚/水、水、15%酚酚/醇洗脫，分步收集、檢查、合并。醇洗脫，分步收集、檢查、合并。 大部分苷類可用大部分苷類可用7%酚酚/水洗下水洗下，經(jīng)減壓濃，經(jīng)減壓濃縮至小體積，乙醚除酚，余下水層經(jīng)減壓縮至小體積，乙醚除酚，余下水層經(jīng)減壓濃縮得較純黃酮苷。濃縮得較純黃酮苷。 4離子交換法離子交換法用陽離子交換樹脂從水提液中吸附黃酮用陽離子交換樹脂從水提液中吸附黃酮 類化合物，與不被吸附

40、的雜質(zhì)分離，再類化合物，與不被吸附的雜質(zhì)分離，再 用甲醇將黃酮類化合物洗脫。用甲醇將黃酮類化合物洗脫。 RSO3-H+ + ArOH（黃酮）（黃酮） 無法交無法交 換，故實際上樹脂僅起到換，故實際上樹脂僅起到吸附作用吸附作用。 三、分離三、分離 極性大小不同極性大小不同 利用吸附或分配原理進(jìn)行分離利用吸附或分配原理進(jìn)行分離 常用吸附劑有聚酰胺、硅膠、纖維素常用吸附劑有聚酰胺、硅膠、纖維素粉粉）聚酰胺層析）聚酰胺層析 主要有三種主要有三種: 聚己內(nèi)酰胺型聚己內(nèi)酰胺型(Perlon) 六次甲基二胺已二酸鹽型六次甲基二胺已二酸鹽型(Nylon) 聚乙烯吡咯烷酮型聚乙烯吡咯烷酮型(Polyclar)

41、其其原理原理是酰胺羰基與黃酮酚羥基形成氫是酰胺羰基與黃酮酚羥基形成氫鍵締合而吸附，吸附能力與酚羥基多少、位鍵締合而吸附，吸附能力與酚羥基多少、位置及氫鍵締合力大小有關(guān)。置及氫鍵締合力大小有關(guān)。 各種溶劑在聚酰胺柱上洗脫能力由各種溶劑在聚酰胺柱上洗脫能力由弱弱至至強(qiáng)強(qiáng)依次為：依次為： 水，甲醇，丙酮，氫氧化鈉水溶液，甲水，甲醇，丙酮，氫氧化鈉水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰胺，脲素水溶液酰胺，二甲基甲酰胺，脲素水溶液 水甲醇丙酮?dú)溲趸c溶液甲酰胺二甲基甲酰胺尿素水溶液弱強(qiáng)濃度小大破壞氫鍵締合都含有酰胺基與待分離的物質(zhì)競爭與聚酰胺聚酰胺形成氫鍵締合黃酮類化合物從聚酰胺柱洗脫時有下列規(guī)律：黃酮類化合物從聚

42、酰胺柱洗脫時有下列規(guī)律：苷元相同，洗脫先后順序一般為：苷元相同，洗脫先后順序一般為： 三糖苷三糖苷 雙糖苷雙糖苷 單糖苷單糖苷 苷元苷元 ? 母核上增加羥基，洗脫速度相應(yīng)減慢母核上增加羥基，洗脫速度相應(yīng)減慢 羥基位置的影響：具有羥基位置的影響：具有鄰位羥基鄰位羥基黃酮黃酮 具有對位具有對位（或間位）羥基黃酮（或間位）羥基黃酮 ?不同類型的黃酮類化合物，先后流出順序一般是：不同類型的黃酮類化合物，先后流出順序一般是： 異黃酮異黃酮 二氫黃酮醇二氫黃酮醇 黃酮黃酮 黃酮醇黃酮醇 分子中芳香核、共軛雙鍵多者吸附力強(qiáng)，故查耳分子中芳香核、共軛雙鍵多者吸附力強(qiáng)，故查耳酮往往較相應(yīng)的二氫黃酮難于洗脫。酮往

43、往較相應(yīng)的二氫黃酮難于洗脫。 ）硅膠層析）硅膠層析對酚羥基多的黃酮類，如多羥基黃酮及對酚羥基多的黃酮類，如多羥基黃酮及 其苷類，硅膠其苷類，硅膠減活性減活性(含水量高含水量高)使用使用 對酚羥基少的黃酮類，如甲基化、乙酰對酚羥基少的黃酮類，如甲基化、乙酰 化黃酮及二氫黃酮、異黃酮，則無須減化黃酮及二氫黃酮、異黃酮，則無須減 活性?；钚浴?2. 利用分子大小不同，用葡聚糖凝膠分子篩分離利用分子大小不同，用葡聚糖凝膠分子篩分離 主要用兩種型號的凝膠主要用兩種型號的凝膠 Sephadex-G型型和和Sephadex- LH-20型型 分離游離黃酮主要是吸附作用，極性小分離游離黃酮主要是吸附作用，極性

44、小大洗脫。大洗脫。 分離黃酮苷類，主要是分子篩作用，分子大分離黃酮苷類，主要是分子篩作用，分子大小洗脫。小洗脫。 總的洗脫順序：糖多的苷總的洗脫順序：糖多的苷糖少的苷糖少的苷游離苷元游離苷元 （極性?。O性小大）大） 常用洗脫劑：常用洗脫劑：堿性水溶液，含鹽水溶液堿性水溶液，含鹽水溶液 醇及含水醇醇及含水醇 含水丙酮，甲醇氯仿含水丙酮，甲醇氯仿 3.利用酸性強(qiáng)弱，采用利用酸性強(qiáng)弱，采用pH梯度萃取法梯度萃取法 混合物溶于有機(jī)溶劑，依次用混合物溶于有機(jī)溶劑，依次用:5% NaHCO3、 5% Na2CO3、0.2%NaOH、4%NaOH萃取萃取 相應(yīng)的黃酮類化合物洗脫順序：相應(yīng)的黃酮類化合物洗脫

45、順序：7,4二羥基二羥基7或或4羥基羥基一般酚羥基一般酚羥基 5 羥羥基黃酮基黃酮4.根據(jù)分子中某些特定官能團(tuán)進(jìn)行分離根據(jù)分子中某些特定官能團(tuán)進(jìn)行分離醋酸鉛沉淀法醋酸鉛沉淀法 硼酸絡(luò)合法：根據(jù)具有鄰二酚羥基的黃酮硼酸絡(luò)合法：根據(jù)具有鄰二酚羥基的黃酮 與硼酸絡(luò)合，與硼酸絡(luò)合，生成物易溶于水的性質(zhì)與其生成物易溶于水的性質(zhì)與其 它類型黃酮分離。它類型黃酮分離。 通常在不與水混溶的有機(jī)溶劑如乙醚中，通常在不與水混溶的有機(jī)溶劑如乙醚中，用硼酸液萃取，水相即為鄰二酚羥基類黃酮。用硼酸液萃取，水相即為鄰二酚羥基類黃酮。R=芹菜糖II（無鄰二酚羥基）I（具有鄰二酚羥基）OOROOHOCH3OHOOROOHOH

46、OH舉例舉例： 從芹菜從芹菜Apium graveolens L.種子中種子中分離分離graveobiodide A及及B淺黃色蔟狀結(jié)晶(graveobioside A)(I)乙醇重結(jié)晶黃色結(jié)晶濃縮至小體積，冰箱放置沉淀(PbS)濾液淺黃色針晶(graveobioside B) (II)乙醇重結(jié)晶黃色結(jié)晶溶于少量乙醇中，放置晶塊同鉛鹽(A)法進(jìn)行復(fù)分解黃色鉛鹽沉淀(B)加入堿式醋酸鉛的熱水溶液至沉淀完全，過濾懸浮乙醇中，通H2S，過濾濾液棕色沉淀(A)溶于熱水中，煮沸，逐滴加入中性醋酸鉛的熱水溶液，直至不再析出沉淀為止，乘熱過濾醚不溶物減壓濃縮后，用醚處理雜質(zhì)提取液乙醇提取脫脂藥料石油醚浸泡脫

47、脂原料（種子）堿式醋酸鉛可沉淀具有一般酚類化合物堿式醋酸鉛可沉淀具有一般酚類化合物有鄰二酚羥基有鄰二酚羥基無鄰二酚羥基無鄰二酚羥基第四節(jié)第四節(jié) 黃酮類化合物的檢識與結(jié)構(gòu)測定黃酮類化合物的檢識與結(jié)構(gòu)測定 目前主要采用的方法有：目前主要采用的方法有： 與與標(biāo)準(zhǔn)品或與文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)品或與文獻(xiàn)對照對照PPC或或TLC得到的得到的 Rf或或hRf值（值（Rf 100） 分析對比樣品分析對比樣品,在甲醇溶液中在甲醇溶液中,加入酸、堿加入酸、堿 或金屬鹽類試劑后得到的或金屬鹽類試劑后得到的UV光譜光譜 1H-NMR 13C-NMR MS 一、層析在黃酮類鑒定中的作用一、層析在黃酮類鑒定中的作用1. 紙層析紙層析(

48、PPC) 苷類成分可采用雙向展開，第一相展開采苷類成分可采用雙向展開，第一相展開采用醇性溶劑，如用醇性溶劑，如BAW系統(tǒng)（正丁醇：系統(tǒng)（正丁醇： 醋酸：醋酸：水水4：1：5上層）；第二相展開用水性溶劑，上層）；第二相展開用水性溶劑，如氯仿：醋酸：水（如氯仿：醋酸：水（3：6：1） 苷元則多采用醇性溶劑。苷元則多采用醇性溶劑。 花色苷及其苷元，可用含鹽酸或醋酸的花色苷及其苷元，可用含鹽酸或醋酸的溶劑。溶劑。 2. 薄層層析薄層層析(TLC)）硅膠薄層）硅膠薄層 用于弱極性黃酮較好。用于弱極性黃酮較好。 常用甲苯：甲酸甲酯：甲酸（常用甲苯：甲酸甲酯：甲酸（5：4：1）；苯：甲醇）；苯：甲醇（95：

49、5）或苯：甲醇：冰醋酸（）或苯：甲醇：冰醋酸（35：5：5）等。）等。 ）聚酰胺層析聚酰胺層析 適用范圍廣，可分離含游離酚羥基或其苷類。適用范圍廣，可分離含游離酚羥基或其苷類。 常用展開系統(tǒng)：乙醇：水（常用展開系統(tǒng)：乙醇：水（3：2）；丙酮：水（）；丙酮：水（1：1）等。等。 顯色劑：紫外光；顯色劑：紫外光；2%三氯化鋁甲醇液；三氯化鋁甲醇液； 1%FeCl3 / 1%K3Fe(CN)6(1:1)混合液?；旌弦?。蘆丁蘆丁R槲皮素槲皮素Q蘆丁蘆丁R槲皮素槲皮素QRfRRfQRfRRfQ醇性展開劑醇性展開劑HAc:H2O(85:15)分配原理分配原理吸附原理吸附原理PC聚酰胺層析聚酰胺層析二、紫外

50、光譜在黃酮類鑒定中的應(yīng)用二、紫外光譜在黃酮類鑒定中的應(yīng)用 可用于確定黃酮母核類型及確定某些位置是否可用于確定黃酮母核類型及確定某些位置是否含有羥基。含有羥基。 一般程序：一般程序： 測定樣品在甲醇中的測定樣品在甲醇中的UV譜以了解母核類型；譜以了解母核類型； 在甲醇溶液中分別加入各種診斷試劑后測在甲醇溶液中分別加入各種診斷試劑后測UV譜和譜和可見光譜以了解可見光譜以了解3,5,7,3,4有無羥基及鄰二酚羥基；有無羥基及鄰二酚羥基； 苷類可水解后（或先甲基化再水解），再用上法苷類可水解后（或先甲基化再水解），再用上法測苷元的測苷元的UV譜以了解糖的連接位置。譜以了解糖的連接位置。OOOO（一）黃

51、酮類化合物在甲醇溶液中的紫外光譜（一）黃酮類化合物在甲醇溶液中的紫外光譜 多數(shù)黃酮類化合物由兩個主要吸收帶組成：多數(shù)黃酮類化合物由兩個主要吸收帶組成： 帶帶I在在300-400nm區(qū)間，由區(qū)間，由B環(huán)桂皮酰系統(tǒng)環(huán)桂皮酰系統(tǒng)的電子躍遷所引起的電子躍遷所引起OOOO 帶帶II在在240-285nm區(qū)間，由區(qū)間，由A環(huán)苯甲酰系環(huán)苯甲酰系統(tǒng)的電子躍遷所引起統(tǒng)的電子躍遷所引起帶帶II(240-285nm)（苯甲酰系統(tǒng)）（苯甲酰系統(tǒng)） 帶帶I(300-400nm) 桂皮酰系統(tǒng)桂皮酰系統(tǒng) 類類 型型 說說 明明 250-285304-350黃酮類黃酮類 -OH越多，帶越多，帶I帶帶II越紅移越紅移 B環(huán)環(huán)3

52、,4有有-OH基，帶基，帶II為雙峰為雙峰（主峰伴肩峰）（主峰伴肩峰） 328-357黃酮醇類黃酮醇類 (3-OR) 352-385黃酮醇類黃酮醇類(3-OH)245-270 270-295 300-400異黃酮類異黃酮類 二氫黃酮二氫黃酮（醇）（醇） B環(huán)上有環(huán)上有-OH, OCH3對帶對帶I影響影響不大不大 220-270340-390 或或340-390(Ia) 300-320(Ib) 查耳酮類查耳酮類 查耳酮查耳酮2-OH使使帶帶I向紅移影響向紅移影響大大 370-430(3-4個小峰個小峰) 橙酮類橙酮類 NoImageNoImageNoImage查耳酮654321654321O不同

53、類型黃酮類化合物的紫外光譜2加入診斷試劑后引起的位移及結(jié)構(gòu)測加入診斷試劑后引起的位移及結(jié)構(gòu)測定定加入試劑加入試劑帶帶II 帶帶I 說明說明樣品樣品+MeOH 250-285 304-385 兩峰強(qiáng)度基本相同，具體位置與兩峰強(qiáng)度基本相同，具體位置與母核上電負(fù)性取代基母核上電負(fù)性取代基(-OH, -OCH3)有關(guān)，有關(guān)，-OH, -OCH3越多，越多，越長移越長移 甲醇鈉甲醇鈉 +NaOMe 或或+NaOH A環(huán)有環(huán)有-OH，紅，紅移小，無移小，無意義意義 40-60nm（ 不變或增強(qiáng)）不變或增強(qiáng)） 50-60nm（ 下降）下降） 有有4-OH，無，無3-OH 有有3-OH，無，無4- OH有有3

54、,4-OH或或3,3,4-OH（衰減更（衰減更快）快） 7-OH 帶帶I，II隨加隨加NaOMe時間延長，逐漸衰減時間延長，逐漸衰減 320-330nm有小峰有小峰+NaOAc (未熔溶未熔溶) 醋酸鈉醋酸鈉 5-20有有3-OH,4OH也也發(fā)生紅移，發(fā)生紅移，但意義不大但意義不大 7-OH 加入試劑加入試劑帶帶II帶帶I說明說明+NaOAc/H3BO3 5-10 12-30 B環(huán)有鄰二酚羥基環(huán)有鄰二酚羥基A環(huán)有鄰二酚羥基環(huán)有鄰二酚羥基(不不包括包括5,6-OH) AlCl3/HCl 60 50-60 35-55 17-20 0有有3-OH 有有3,5-二二OH 有有5-OH，無，無3-OH

55、有有6-OR 無無3-OH, 5-OH或或6-OR存在存在AlCl3光譜光譜-AlCl3/ HCl光譜光譜30-40 50-65 0B環(huán)有鄰二酚羥基環(huán)有鄰二酚羥基 A,B環(huán)皆有鄰二酚羥基環(huán)皆有鄰二酚羥基 A,B環(huán)皆無鄰二酚羥基環(huán)皆無鄰二酚羥基OOO 另有另有3,4-OH或或3,3,4-OH時，在時，在 NaOMe作用下易氧化破壞作用下易氧化破壞，故峰有衰減。，故峰有衰減。 2）NaOAc為弱堿，僅使酸性較強(qiáng)者，如為弱堿，僅使酸性較強(qiáng)者，如 7,4-OH解離。解離。說明：說明：1）+NaOMe, OHOMe，紅移，紅移 backHCl/H2OAlCl3Al3+OOOHOHOHOAl3+Al3+O

56、OOOOHOOOOHOHHOOH3）形成絡(luò)合物的能力：）形成絡(luò)合物的能力： 黃酮醇黃酮醇3-OH 黃酮黃酮5-OH二氫黃酮二氫黃酮5-OH 鄰二酚羥鄰二酚羥基基 二氫黃酮醇二氫黃酮醇3-OH 鄰二酚羥基和鄰二酚羥基和二氫二氫黃酮醇黃酮醇3-OH在酸性條件下不在酸性條件下不與與AlCl3絡(luò)合；絡(luò)合； 但但不在酸性條件下不在酸性條件下，五者皆與，五者皆與Al3+絡(luò)合；形成絡(luò)絡(luò)合；形成絡(luò)合物越穩(wěn)定，紅移越多。合物越穩(wěn)定，紅移越多。 4）二者相減可檢測鄰二酚羥基。）二者相減可檢測鄰二酚羥基。backOOOOAl2+OOOHOHHOHOHCl/H2OAlCl3 從中藥柴胡中得到山奈苷，酸水從中藥柴胡中得

57、到山奈苷，酸水解解PPC檢查出鼠李糖，該苷及苷元的檢查出鼠李糖，該苷及苷元的UVmax(nm)譜如下，解析結(jié)構(gòu)。譜如下，解析結(jié)構(gòu)。山奈苷山奈苷 帶帶II 帶帶I MeOH 265 345 NaOMe 265 388 43，4-OHAlCl3 275 399 54，5-OH AlCl3/HCl 275 399 AlCl3= AlCl3/HCl：無鄰二酚羥基：無鄰二酚羥基 NaOAc 265 399 帶帶II無紅移，無無紅移，無7-OH NaOAc/H3BO3 265 386 41? OO HOOOO HrharhaKaempferitrin 山奈苷元山奈苷元 帶帶II 帶帶I MeOH 265

58、367 NaOMe 276 424（分解）（分解） 帶帶I紅移紅移57，且分解，且分解，3，4-OHAlCl3 270 424 54，5-OH AlCl3/HCl 269 424 AlCl3= AlCl3/HCl：無鄰二酚羥基：無鄰二酚羥基 NaOAc 276 387 帶帶II紅移紅移20，7-OH NaOAc/H3BO3 267 387 40? OO HOOOO HrharhaKaempferitrin 三、三、1H-NMR常用溶劑：氘代氯仿（常用溶劑：氘代氯仿（CDDl3），氘代），氘代二甲基亞砜（二甲基亞砜（DMSO-d6），氘代吡啶），氘代吡啶（C5D5N）。）。 也可將黃酮類化合物作

59、成三甲基硅醚衍也可將黃酮類化合物作成三甲基硅醚衍生物溶于四氯化碳中進(jìn)行測定。生物溶于四氯化碳中進(jìn)行測定。hesperidinMeOH-H2Ohexa-trimethyl-silyl-rha-glc-OOOOSi(CH3)3OCH3OSi(CH3)3pyridin(CH3)3SiCl(CH3)3Si2NHrha-glc-OOOOHOCH3OH優(yōu)點：優(yōu)點： 無干擾信號，勿須昂貴的氘代試劑；無干擾信號，勿須昂貴的氘代試劑； 供試后的樣品用含水甲醇處理可回收；供試后的樣品用含水甲醇處理可回收； 三甲基硅醚衍生物可很方便的轉(zhuǎn)變成乙酰三甲基硅醚衍生物可很方便的轉(zhuǎn)變成乙酰衍生物或甲醚衍生物。衍生物或甲醚衍生

60、物。H-6, H-8, 5.7-6.9, J=2.5HzH-6較H-8高場 86OOHOOH（一）（一）A環(huán)質(zhì)子環(huán)質(zhì)子15, 7-二二OH黃酮黃酮H-6信號比信號比H-8信號位于高場信號位于高場7-OH成苷后，成苷后，H-6信號、信號、H-8信號均向低場位移信號均向低場位移H-5 7.7-8.2 (d, J=9Hz)H-6 6.4-7.1(dd, J=9, 2.5Hz) H-8 6.8-7.0 (d, J=2.5Hz) 5OOHO68 H-5較較H-6、H-8低場，是由于羰基的負(fù)低場，是由于羰基的負(fù)屏蔽效應(yīng)的影響。屏蔽效應(yīng)的影響。 7-OH黃酮黃酮中中H-6、H-8較較5, 7-二二OH黃酮黃