細胞生物學研究中的激活劑和抑制劑

1、細胞生物學研究中的激活劑和抑制劑Anandika Dhaliwal Ph.D.anandika dot dhaliwal at gmail dot comRutgers University, New Jersey, United States譯者王秀英博士mary at labome dot com美國新澤西州普林斯頓合原研究有限責任公司 (Synatom Research)DOI/10.13070/.3.185日期更新 : 2013-10-19; 原始版 : 2013-04-27引用實驗材料和方法 2013;3:185介紹細胞生物學研究細胞結構、生理特性及細

2、胞功能。它涉及到對細胞器、細胞與周圍環(huán)境間相互作用、生命周期、分化及死亡的研究。細胞生物學與遺傳學、分子生物學、發(fā)育生物學和生物化學等其它生物學領域是密切相關的。圖 1.真核細胞骨架。肌動蛋白纖維顯示為紅色，微管為綠色，核為藍色。肌動蛋白染色使用的是羅丹明-鬼筆環(huán)肽，微管使用的是連接有Alexa488的抗微管蛋白著色劑，DNA則使用的是Hoechst染料。對于細胞生物學領域的研究者而言，為了更加全面地理解細胞的功能、細胞的信號傳遞以及控制細胞命運、功能及表型的胞內機制，抑制劑與激活劑是至關重要的研究工具。許多抑制劑和激活劑都被廣泛用于研究細胞動力學及功能。這里我們對真核細胞中各種細胞生物學研究

3、如細胞內吞、分泌、粘附、細胞骨架動力學、內質網和高爾基體研究中常用的抑制劑和激活劑進行了綜述。細胞骨架細胞骨架為細胞提供了特定的結構與形狀。真核細胞主要有三種細胞骨架纖維：1）微絲，2）中間絲和3）微管。微絲（肌動蛋白絲）：這是細胞骨架中最細的纖維。它們由肌動蛋白亞基的線性聚合物所組成，通過在纖維一端的伸長并伴隨著另一端的收縮來產生力，從而使其間的纖維產生凈移動。中間絲：這種纖維的平均大小為直徑10納米并且比肌動蛋白絲更穩(wěn)定（是緊密結合的），是細胞骨架的異質成分。中間絲負責組織細胞內部的三維結構和細胞器，是核纖層的結構性組成部分。它們也參與一些細胞-細胞間和細胞-基質間的連接過程。微管：它們是

4、直徑為23nm的空心圓柱，大多數(shù)情況下由13條原纖維組成，而這些原纖維則是alpha微管蛋白和beta微管蛋白的聚合物。它們具有很高的動態(tài)活性，通過結合GTP來進行聚合反應并通常由中心體來組織。抑制劑靶點機制作用特點及效果參考文獻、來源及供應商細胞松弛素D（C30H37NO6）肌動蛋白結合于肌動蛋白核和F-肌動蛋白的生長端，從而抑制聚合反應。誘導肌動蛋白解聚。溶于DMSO和乙醇。抑制收縮。抑制依賴于p-53的細胞通路。引起G1-S轉化過程中的細胞周期阻滯。抑制胰島素刺激的葡萄糖轉運。pm 23516549, 3023337 19235199, Sigma-Aldrich, EMD4Biosci

5、ences, Tocris Bioscience, Enzo Life Science, Invitrogen, Santa Cruz Biotechnology, Cayman ChemicalLantraculin A（C22H31NO5S）肌動蛋白擾亂微絲介導的過程。與G-肌動蛋白單體形成1:1的復合物（Kd = 200 nM）。溶于DMSO和乙醇。比細胞松弛素的抑制效果強10-100倍。抑制巨噬細胞的吞噬作用。比Lantraculin B的效果更強。1234, Invitrogen, Tocris Bioscience, Sigma-Aldrich, Cayman Chemical,

6、Santa Cruz Biotechnology, EMD4BiosciencesLantraculin B（C20H29NO5S）肌動蛋白體外反應中抑制肌動蛋白的聚合（Kd = 60 nM）。擾亂微絲的組織和微絲介導的過程。溶于DMSO、甲醇或乙醇。比細胞松弛素的抑制效果強10-100倍。在該復合物持續(xù)存在的情況下被血清緩慢失活并導致短暫的誘導變化。567, Invitrogen, Sigma-Aldrich, Cayman Chemical, Santa Cruz Biotechnology, EMD4Biosciences, Enzo Life ScienceWiskostatin（C1

7、7H18Br2N2O）肌動蛋白選擇性地抑制N-WASP（Wiskott-Aldrich綜合癥蛋白（WASp）家族成員）并抑制Arp2/3復合物的活化。該分子阻斷肌動蛋白絲的組裝。在DMSO中溶解度可達100 mM。同樣抑制PIP2誘導的肌動蛋白聚合反應(EC50 4M)。抑制依賴于肌動蛋白的細胞功能（遷移、運輸、吞噬、內褶）。8910, Affix Scientific, Enzo Life Science, Sigma-Aldrich, Tocris BioscienceMycalolide B（C52H74N4O17）肌動蛋白它選擇性地將F-肌動蛋白徹底解聚成G-肌動蛋白。 與肌動蛋白以1

8、:1的摩爾比進行結合（Kd=13-20 nM）。溶于DMSO、甲醇或異丙醇。抑制肌動球蛋白ATP酶。111213, Santa Cruz Biotechnology, Enzo Life ScienceNocodazole（C14H11N3O3S）微管抑制微管的動態(tài)變化并促使微管解聚。與微管蛋白結合并阻止兩個鏈間二硫鍵中任意一個的形成。在DMSO的溶解度達10 mg/ml。有絲分裂抑制劑。將細胞周期阻滯在G2/M期。抑制各種癌癥相關的激酶，包括ABL、c-KIT、BRAF、MEK1、MEK2和MET。14151617, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, Cel

9、l Signaling Technology, EMD4Biosciences長春堿（C46H58N4O9 · H2SO4）微管解聚微管。與微管蛋白結合并誘導其自締形成螺旋形聚合體，抑制微管組裝。溶于水和甲醇。通過阻斷有絲分裂紡錘體的形成將細胞周期阻滯于G2/M期。在一些腫瘤細胞系中誘導凋亡。抑制自噬體的成熟。181619, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, EMD4Biosciences, Santa Cruz Biotechnology。秋水仙堿（C22H25NO6）微管與微管蛋白結合并阻止其聚合在乙醇中溶解度達50 mg/ml，在水中溶解度可達

10、100 mM，DMSO中溶解度可達100 mM。有絲分裂抑制劑。在一些正常的及癌癥細胞系中誘導凋亡202122, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, EMD4Biosciences長春新堿（C46H56N4O10 · H2SO4）微管能與微管蛋白結合并抑制微管形成的吲哚生物堿。解聚微管。溶于甲醇和水。延遲細胞周期的進程。在人類淋巴瘤細胞中誘導凋亡。232425, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, EMD4Biosciences, Santa Cruz Biotechnology。表1.常用的細胞骨架抑制劑。激活劑靶點機

11、制作用特點及效果參考文獻、來源及供應商Jasplakinolide（C36H45BrN4O6）肌動蛋白在體外誘導肌動蛋白聚合及穩(wěn)定。在體內同樣誘導肌動蛋白單體聚合成F-肌動蛋白。在DMSO中溶解度>2 mg/ml。一種具有殺菌、殺蟲、抗癌特性的環(huán)羧酚酸肽。無熒光且具有細胞透性的F-肌動蛋白。26272829, Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences, Santa Cruz Biotechnology, Invitrogen, Tocris Bioscience紫杉醇（Taxol）（C47H51NO14）微管結合于-微管蛋白的N端，促進微管組裝并抑制微管蛋白分解溶于D

12、MSO和甲醇?？鼓[瘤和抗白血病試劑。將細胞周期阻止于G2/M期。導致異常的有絲分裂并且有時會引起凋亡。303132, Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences, Cell Signaling Technolgy, Cytoskeleton Inc.鬼筆環(huán)肽（C35H48N8O11S）肌動蛋白與聚合的F-肌動蛋白結合并保持其穩(wěn)定，防止解聚的發(fā)生（F-肌動蛋白轉變?yōu)镚-肌動蛋白）溶于乙醇和甲醇。從真菌中分離出的有毒雙環(huán)七肽。干擾富含肌動蛋白的結構行使功能。鬼筆環(huán)肽的偶聯(lián)物被用作確認纖維狀肌動蛋白的探針。333435, Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences

13、, Tocris Bioscience, Santa Cruz Biotechnology, Enzo Life Science表2.常用的細胞骨架激活劑。內質網內質網（ER）是真核生物中一種會形成互連的膜囊泡網絡的細胞器。它參與了細胞物質的合成、修飾和運輸。它從細胞膜開始伸展，經過細胞質，一直與核膜相連。取決于細胞類型、細胞功能和細胞需求，內質網具有多種不同的功能。在結構與功能上，它由兩種區(qū)域組成。粗面內質網：它是一系列扁平狀囊泡且胞漿側由核糖體組成。核糖體是細胞中的蛋白質合成位點。粗面內質網加工膜及分泌蛋白，在某些白細胞中產生抗體，而在胰腺細胞中產生胰島素。其它功能還包括組裝過程中的起始N

14、-糖基化和溶酶體酶的加工。滑面內質網：它是一個光滑的微管網絡并且不包含核糖體。它通常與粗面內質網相連，是那些負責將內質網產物運輸?shù)讲煌稽c的囊泡的過渡區(qū)域。它具有多種功能，包括脂質合成、碳?銜锎弧評胱優(yōu)鵲鶻凇锝舛競褪芴甯階諾較赴鞍住詡庵校婺謚釋庀赴氖賬酰諛韻赴性蠔銑尚坌院痛菩院啥傘?內質網應激：內質網介導的蛋白折疊一旦失衡就會引起內質網應激。內質網的應激信號傳導通路或應激響應被稱作未折疊蛋白反應（UPR）。最初的UPR只是嘗試通過停止蛋白翻譯并激活可增加參與蛋白折疊的分子伴侶的信號通路來恢復細胞的正常運作。當UPR的這種初始嘗試失敗而擾亂還在持續(xù)的情況下，UPR就會開始誘導凋亡。下面提到的抑制

15、劑是用于抑制內質網功能或誘發(fā)內質網應激的，而提到的激活劑則用于誘導內質網功能或抵抗內質網應激的：抑制劑靶點機制作用特點及效果參考文獻、來源及供應商Eeyarestatin I（C27H25Cl2N7O7）內質網相關蛋白降解（ERAD）靶向p97相關的去泛素化過程（PAD）并抑制依賴于ataxin-3（atx3）的去泛素化過程。抑制內質網中Sec61介導的蛋白質轉運。在DMSO中溶解度達100mM，在乙醇中溶解度達5mM。在淋巴樣細胞系、BJAB、HBL-2、JEKO-1、Jurkat、KMS-12、MINO以及慢性淋巴細胞白血病中的原代白血病細胞中誘發(fā)細胞毒性。通過促凋亡蛋白NOXA誘導細胞死

16、亡。3637383940, Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences, Tocris Bioscience, Santa Cruz BiotechnologyDBeQ（C22H20N4）內質網相關蛋白降解途徑以可逆且ATP競爭性的方式（Ki = 3.2 µM）抑制ATP酶p97活性（對于野生型或C522A p97的IC50 = 1.6 µM）DMSO中溶解度達100 mM。在RPMI8226、HeLa和HEK29細胞中抑制細胞增殖。抑制caspase 3/7活性及凋亡。4142, Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences, Tocri

17、s Bioscience, BioVision Inc.Xestospongin C（C28H50N2O2）血管舒緩激肽和內質網的鈣外流可逆地抑制內質網鈣庫中的血管舒緩激肽-和氨甲酰膽堿-Ca2+外流。溶于DMSO、乙醇和甲醇。大環(huán)雙-1-oxaquinolizidine的合成形式。具有膜通透性?？赡娴匾种艻P3受體。434445, Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences, Cayman Chemicals, Tocris BioscienceKifunensine（C8H12N2O6）內質網相關蛋白降解（ERAD）抑制內質網相關的甘露糖苷酶活性。水（雙蒸熱水）中溶解度達

18、50 mM。生物堿化合物。選擇性抑制負責加工I類糖蛋白的-甘露糖苷酶。4647, Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences, Cayman Chemicals, Tocris Bioscience, Santa Cruz Biotechnology.衣霉素（C39H60N4O16）蛋白折疊誘導內質網應激。抑制N-糖基化并阻斷N-糖苷蛋白-糖類鍵的形成。溶于DMF、DMSO和吡啶。衣霉素A、B、C和D的混合物。引起G1期阻滯。抑制N-乙酰葡糖胺磷酸轉移酶（GPT）。劑量依賴性地抑制DNA合成。484950, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience,

19、EMD4Biosciences, Santa Cruz Biotechnology。毒胡蘿卜素（C34H50O12）肌漿網Ca2+ ATP酶（SERCA）抑制肌漿網Ca2+-ATP酶。抑制自噬過程并誘發(fā)內質網應激。溶于DMSO和乙醇?？蓾B透細胞。誘導凋亡。被用于誘導哺乳動物細胞自噬。515253, Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences, Tocris Bioscience.ERO1抑制劑I, Erodoxin（C7H5BrN2O5）內質網氧化酶1抑制劑選擇性抑制酵母內質網氧化酶1（ERO1）。對小鼠ERO1（IC50 = 400 µM）抑制較弱溶于DMSO。體

20、外抑制依賴于ERO1的硫氧還蛋白-1（Trx1）氧化活性。與參與蛋白折疊、糖基化和細胞壁合成的基因聚類。54, EMD4Biosciences兔抗內質網蛋白72（623-638）多克隆抗體識別小鼠大腦、脾臟、睪丸和大鼠腦、肌肉、脾、睪丸組織中72 kDa的ERp72蛋白。以及人宮頸上皮細胞（HeLa）、人成纖維細胞（A431）、人胸腺細胞（Hs67）和小鼠成纖維細胞（3T3）的細胞裂解物。555657, EMD4Biosciences, US Biological, Novus Biologicals.表3.常用的內質網抑制劑激活劑靶點機制作用特點及效果參考文獻、來源及供應商5,8,11-二十

21、碳三炔酸（C20H28O2）在MDCK細胞中引發(fā)Ca2+從內質網中釋放。引起Ca2+從內質網、線粒體和其它濃度達30 µM的鈣庫中釋放出來乙醇中溶解度達25mg/ml，DMSO中溶解度達25mg/ml或溶于二甲基甲酰胺。脂肪氧化酶的抑制劑。在較高濃度下抑制環(huán)氧合酶。5859, Sigma-Aldrich, Cayman Chemicals, Enzo Life SciencesSalubrinal（C21H17Cl3N4OS）防止內質網應激保護細胞免受內質網應激所誘導的凋亡（EC50 15 M）。溶于DMSO。選擇性抑制使真核翻譯啟動因子2亞基（eIF-2）去磷酸化的磷酸酶復合體60

22、6162, Tocris Bioscience, Santa Cruz Biotechnology, EMD4Biosciences.?；敲撗跄懰幔═UDCA）（C26H44NaNO6S）抵抗內質網應激抑制內質網應激。溶于水。被用作去垢劑來使脂質和膜結合蛋白增溶。606162, Sigma Aldrich, Santa Cruz Biotechnology, EMD4Biosciences.表4.常用的內質網激活劑。高爾基體高爾基體是真核細胞中的一種細胞器，是細胞內膜系統(tǒng)的一部分。高爾基體長約1 µM，并由兩部分組成：被稱為潴泡的扁平膜囊和膜封閉的小泡。它在各種蛋白分泌前的加工過程中

23、起著重要的作用。高爾基體的各種功能包括：它從來自粗面內質網、含有蛋白質的囊泡處接收蛋白并進行進一步修飾。細胞合成的各種大分子在分泌前或被送到各自目的地之前，都由它負責修飾、富集、分類及包裝。它通過加入糖基和磷酸基團來對蛋白修飾。它在動物細胞胞外基質的蛋白聚糖合成中起著重要作用。植物細胞壁中的多糖合成位點。抑制劑靶點機制作用特點及效果參考文獻、來源及供應商1,3-環(huán)己烷雙甲胺（CBM）（C6H10(CH2NH2)2）通過高爾基體運輸?shù)劫|膜。在體內和體外都可以抑制外被體蛋白與高爾基體膜結合以及完整細胞的分泌溶于乙醇和乙醚636465, Sigma-Aldrich, Fisher Scientifi

24、c布雷菲德菌素A（BFA）(C16H24O4）膜運輸、高爾基體<40 ng/ml時在許多哺乳動物細胞系中引起高爾基體解體和內質網腫脹溶于甲醇?？赡娴刈钄嗟鞍踪|從內質網（ER）向高爾基體的轉運。高密度脂蛋白-介導的膽固醇外流的抑制劑。介導人腫瘤細胞凋亡。666768, Sigma-Aldrich.Alomone Labs, Tocris Bioscience, Cell Signaling Technology, EMD4Biosciences.Golgicide A（C17H14F2N2）組裝和運輸通過結合在Arf1和GBF1 Sec7功能域間形成的界面裂縫中選擇性地可逆抑制順面高爾基體

25、ArfGEF GBF1。Arf屬于Ras GTP酶家族并介導囊泡運輸。溶于DMSO（>10 mg/ml）。導致高爾基體和反面高爾基網的解體與分散。抑制可溶性的和膜結合的蛋白質分泌。6970Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, Santa Cruz Biotechnology, EMD4Biosciences1-Deoxymannojirimycin（DMM）（C6H13NO4·HCl）糖蛋白加工抑制N-糖基化。抑制甘露糖苷酶I。溶于乙醇和水。用于高爾基體介導的糖蛋白加工過程的研究。717273, EMD4Biosciences, Sigma-Ald

26、rich, Tocris Bioscience, Santa Cruz Biotechnology.表5.常用的高爾基體抑制劑。生物分子的分泌分泌是指細胞或腺體產生和釋放一種有用的物質，包括激素、酶、細胞因子和細胞外基質蛋白。該過程中物質被包裝進囊泡然后以胞吐方式從細胞中分泌出來。分泌途徑：在真核細胞中，經典的分泌過程是通過內質網、高爾基體和其它細胞內囊泡來實現(xiàn)的，是一個由細胞嚴格調控的過程。廣義上來說，要輸送出去的蛋白被核糖體合成后?？吭趦荣|網上進行轉運。然后含有正確折疊的蛋白的囊泡進入高爾基體。糖基化修飾后進一步進行翻譯后修飾。然后蛋白質進入分泌囊泡，沿著細胞骨架移至細胞邊緣。最后一步就是

27、囊泡在一個被稱為融合孔的結構處與細胞膜融合并進行胞吐，蛋白就被釋放到環(huán)境中。非經典的蛋白質分泌途徑：有許多蛋白不是通過牽涉到內質網和高爾基體的經典途徑來分泌的，相反是利用各種不同的非經典的蛋白質分泌途徑來分泌的。這些蛋白包括FGF-1（aFGF）、FGF-2（bFGF）和白細胞介素-1（IL1） 74 75。非經典的分泌機制大致可分為?街幀?1) 直接使物質跨過胞質蛋白的質膜進行轉運，例如FGF2的分泌。2) 胞內轉運中間物，例如?；o酶A結合蛋白的分泌 76。抑制劑靶點機制作用特點及效果參考文獻、來源及供應商CP-10447（C16H13BrN2O）載脂蛋白B（apoB）分泌抑制微粒體甘油三

28、酯轉移蛋白（MTP, MTTP）并刺激apoB的早期內質網降解溶于DMSO（10 mg/ml）。抑制甘油三酯分泌而不影響其合成。人體肝臟微粒體甘油三酯轉運活性的有效抑制劑。777879, Sigma-Aldrich, PfizerExo 1（C15H12NFO3）胞吐在哺乳動物細胞中通過誘導高爾基體膜解體和成管以及重新運輸回內質網來可逆地抑制從內質網到高爾基體間的囊泡運輸。溶于DMSO、DMF、甲醇或乙醇。它的影響僅限于高爾基體，不能影響其它的內吞細胞器。活化高爾基ARF 1（ADP核糖基化因子）GTP酶。80, Sigma-Aldrich, EMD MilliporeExo 2（C18H18

29、N4O2S）胞吐類似于BFA但是選擇性更強?？赡艿陌悬c包括TGN（反面高爾基網）、高爾基體和一部分早期內涵體溶于DMSO（>20 mg/ml）。抑制志賀毒素運送到內質網。作為胞內運輸?shù)囊环N化學探針。818283, Sigma-Aldrich, Santa Cruz Biotechnology生長激素抑制素（C76H104N18O19S2）生長激素、胰島素和胰高血糖素抑制生長激素、胰島素和胰高血糖素的內源性肽溶于5%乙酸，水中溶解度為0.30 mg/ml。它是一個環(huán)狀十四肽。同樣抑制電壓門控Ca2+通道。848586, Tocris Bioscience, Sigma-Aldrich, E

30、MD4Biosciences奧曲肽（C49H66N10O10S2）胃腸胰肽激素和生長激素它是一個合成的較長作用八肽，是生長激素抑制素的類似物。溶于水8788, Sigma-Aldrich, Bachem, Tocris BioscienceSXN101742，一種定向分泌抑制劑（TSI）生長激素它靶向于GHRH（生長激素釋放激素）受體并使參與GH（生長激素）胞吐過程的SNARE蛋白耗盡。TSI是來自于肉毒毒素（BoNTs）的重組蛋白。8990, Syntaxin Ltd.抗FGF1抗體酸性成纖維細胞生長因子（aFGF）酸性成纖維細胞生長因子抗體/Beta血管內皮細胞生長因子抗體。產自于兔子或小

31、鼠。與人反應。其應用包括WB、ELISA、IHC-P及中和。用于各種應用的方法及濃度請參考生產商的操作流程91929394, Sigma-aldrich, Abcam, Origene, Thermo Scientific.表6.常用的分泌抑制劑激活劑靶點機制作用特點及效果參考文獻、來源及供應商-蛛毒素誘導胞吐與蛛毒素受體結合。利用Ca2+依賴性和非依賴性的作用機制。溶于50%甘油。引起神經遞質的釋放。導致Ca2+非依賴性的胰島素胞吐。刺激皮質星形膠質細胞培養(yǎng)物中Ca2+非依賴性的GABA和谷氨酸釋放。959697, Alomone Labs, EMD4Biosciences, Enzo Li

32、fe Sciences那格列奈（C19H27NO3）胰島素通過增加胞漿中Ca2+濃度來引起胰腺-細胞中的胰島素分泌。溶于DMSO（>5 mg/ml）。它是Kir6.2/SUR1通道的抑制劑。刺激ATP敏感性鉀通道依賴性和非依賴性胰島素分泌。降血糖藥。9899100101, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, TCI America血管緊張素II（C50H71N13O12）醛固酮導致腎上腺中的醛固酮釋放溶于水或5%乙酸。刺激血管生成并增加微血管密度。有很強的血管收縮效果。在血管平滑肌細胞中活化p60c-src和ERK1/2、JNK及p38絲裂原活化蛋白激酶。

33、102103104, Sigma-Aldrich, Calbiochem/ EMD4Biosciences.甲苯磺丁脲（磺脲類）（C12H18N2O3S）胰島素通過直接作用于胰腺細胞中的ATP敏感性鉀通道引起胰島素釋放溶于DMSO或100%乙醇。被CYP2C9（甲苯磺丁脲羥化酶）所代謝105106107108, Santa Cruz Biotechnology, Sigma-Aldrich, Abcam.瑞格列奈（C27H36N2O4）胰島素關閉胰腺細胞質膜上的ATP敏感性鉀（KATP）通道在DMSO中溶解度達100 mM，在乙醇中溶解度達100 mM。體內具有降血糖效果。1091101111

34、12, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience油酸鈉（CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COONa）載脂蛋白B100（Apo-B）增加肝臟中的載脂蛋白B100分泌溶于水（100 mg/ml）、甲醇（50 mg/ml）和乙醇。激活肝細胞中的蛋白激酶C（PKC）。在較高生理劑量下抑制載脂蛋白B100分泌。113114, Santa Cruz Biotechnology, Sigma-Aldrich, TCI America分泌素（C130H220N44O40）胰液刺激富含碳酸鹽的胰液分泌溶于5%的乙酸或水。它是一種強堿性胃腸肽類激素。放松平滑肌。引起胰管線中劑量依賴

35、性的cAMP積累。115116117, Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences表7.常用的分泌激活劑。內吞細胞通過內陷產生的囊泡從膜上脫落來吸收大分子和溶質的過程被稱為“內吞”。內吞可大致分為兩類：1）吞噬和2）胞飲。吞噬是特定細胞攝取大顆粒。胞飲是所有細胞中都發(fā)生的攝入液體和溶質過程。當泛指細胞內化時，“吞噬”和“胞飲”多數(shù)被用作同義詞。主要有三種內吞途徑：1）網格蛋白介導的內吞作用，2）胞膜窖介導的內吞作用和3）巨胞飲。在這三種內吞途徑中，內化步驟始于質膜內陷并將該膜轉變?yōu)榉Q作內涵體的封閉囊泡。每個途徑都有控制內化的一套分子。抑制劑靶點機制作用特點及效果參考文獻、來源

36、及供應商氯丙嗪（C17H19ClN2S · HCl）網格蛋白介導的內吞作用引起網格蛋白網絡在內涵體膜上的組裝并阻止細胞表面上的被膜小窩組裝。溶于水和甲醇。抑制鈣調蛋白依賴性的環(huán)核苷酸磷酸二酯酶和一氧化氮合成酶激活。對白血病細胞具有細胞毒性和抗增殖活性。118119, Santa Cruz Biotechnology, Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences金雀異黃素（C15H10O5）胞膜窖介導的內吞作用可逆性抑制酪氨酸激酶溶于DMSO。可滲透細胞。抑制表皮生長因子受體激酶?？寡苌蓜Ｒ种颇[瘤細胞增殖。抑制腫瘤細胞分化。體外抑制拓撲異構酶II活性。12012

37、1119122, Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences-環(huán)糊精（C42H70O35）胞膜窖介導的內吞作用清除膽固醇水中溶解度達50 mg/ml。由相同的環(huán)狀1,4-糖苷鍵連接的D-葡萄吡喃糖單元形成的七元環(huán)。形成包合物。常用的絡合劑。123124, Sigma-Aldrich, Fisher Scientific, EMD4Biosciences鹽酸阿米洛利（C6H8ClN7O.HCl.H2O）巨胞飲抑制Na+/H+交換。降低膜下pH值。阻止Rac1和Cdc42的信號傳導。S水中溶解度達50 mg/ml。T-型鈣通道阻滯劑。抑制尿激酶纖溶酶原激活物（uPA）。抑制血管生

38、成。125126127, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, EMD4Bioscience, Alomone LabsDynasore（C18H14N2O4）網格蛋白介導的內吞作用中的動力蛋白抑制動力蛋白1和2的GTP酶活性（IC50 15 µM）。溶于DMSO和乙醇。同樣抑制Drp1（線粒體）。會引起纖維化并在胸膜間皮細胞中誘導PAI-1。抑制BSC1細胞的細胞鋪展和遷移。128129130, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, Santa Cruz Biotechnology, EMD4Bioscience, Abc

39、am非律平（C35H58O11）胞膜窖介導的內吞作用與膜上的膽固醇結合并形成超微機構聚集與復合。非律平由4個異構的多烯大環(huán)內酯組成。非律平III是主要成分?？股睾涂拐婢?。抑制朊蛋白（PrP）的內吞。123131132133, Cayman Chemical, Sigma-Aldrich, Santa Cruz Biotechnology.制霉菌素（C47H75NO17）胞膜窖介導的內吞作用膽固醇隔離。溶于DMSO、DMF、乙醇和甲醇?？刮⑸铮ń湍浮⒅гw）。增加Na+ - K+泵活性。134135136, Sigma-Aldrich, EMD4Bioscience, Invitrogen莫

40、能菌素（C36H61O11.Na）內涵體成熟阻止內涵體酸化溶于氯仿、乙醇和甲醇。聚醚類抗生素。Na+離子載體。阻斷糖蛋白分泌。阻斷神經酰胺在高爾基體中的運輸137138139140, Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences, Enzo Life Sciences磷酸氯喹（C18H26ClN3·2H3PO4）內涵體成熟它是一種可以裝入內涵體和溶酶體這樣的酸性囊泡的弱堿，從而抑制內涵體酸化和溶酶體酶活性。水中溶解度達100 mM。內涵體Toll樣受體抑制劑（拮抗劑）。在許多癌癥細胞系中抑制細胞生長并誘導細胞死亡。128139141, Sigma-Aldrich, T

41、ocris Bioscience, Imgenex渥曼青霉素（C23H24O8）巨胞飲抑制磷脂酰肌醇-3激酶（PI3激酶）（IC50 = 5nM）溶于DMSO。具有細胞通透性。在很高濃度時抑制肌球蛋白輕鏈激酶和PI4激酶活性。抑制polo樣激酶1（PLK1）（IC50 = 5.8 nM）。142143144145, Cell Signaling Technology, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, EMD4Biosciences表8.常用的內吞作用抑制劑。HOE.64和LY294002是另外兩種巨胞飲抑制劑。單丹磺酰尸胺和巴弗洛霉素A1是用于研究網格蛋白介

42、導的內吞作用的另外兩種抑制劑。激活劑靶點機制作用特點及效果參考文獻、來源及供應商佛波醇-12-十四酸酯-13-乙酸酯（PMA）（C36H56O8）（佛波酯）巨胞飲在體內和體外都激活蛋白激酶C。誘導膜轉運和酶激活。DMSO中可溶解至100 mM，在乙醇中可溶解至10 mM。具有感光性。強力的腫瘤誘發(fā)物146147148, Sigma-Aldrich, Enzo Life Sciences, Tocris Bioscience, Abcam12-O-十四烷酰佛波醋酸酯-13（TPA）（C36H56O8）（佛波酯）內吞作用結合并激活蛋白激酶C溶于DMSO和乙醇。具有感光性。強力的腫瘤誘發(fā)物。人單核U

43、937細胞中誘導凋亡。149150151152, Sigma-Aldrich, Cell signaling technology表9.常用的內吞作用激活劑。12,13-二丁酸佛波醇是另一種類似于PMA和TPA的佛波酯，被用于刺激內吞攝取。核運輸核運輸主要是通過核孔復合物（NPC）進行的。離子和小分子是通過被動擴散穿越NPC來進行轉運的。較大核蛋白質、RNA及核糖核蛋白的輸入由核定位信號（NLS）介導?？坑诤丝?。另一方面，核輸出是由核輸出信號（NES）介導的。核輸入途徑大致由四步組成：1）在輸入物、輸入蛋白和輸入蛋白間形成三聚復合物，2）將復合物?？坑贜PC（核孔復合物），3）通過中央通道進行

44、轉位，4）復合物解離并將輸入物釋放到核質中。抑制劑靶點機制作用特點及效果參考文獻、來源及供應商麥胚凝集素（WGA）核輸入通過直接與核孔相互作用來抑制核蛋白運輸。細胞生物學中廣泛使用的一種外源凝集素。對N-乙酰-D-葡糖胺基和N-乙酰-D-葡糖胺寡聚物有親和性。用于細胞粘附研究。也用于影響淋巴細胞活化及研究基于糖類的治療方法。153154155, Sigma-Aldrich, Polysciences Inc., Invitrogen來普霉素A（C32H46O6）核輸出直接與CRM1（輸出蛋白-1）這一主要的核輸出蛋白結合。溶于甲醇和乙醇。來普霉素A和B的性質是很相似的。具有細胞通透性，抗真菌及

45、抗生素。可以誘導野生型ERK5在核內積聚。156157, Sigma-Aldrich, Santa Cruz Biotechnology, EMD4Biosciences來普霉素B（C33H48O6）核輸出抑制核運輸受體Crm1，該蛋白用于識別底物蛋白中被稱為核輸出序列（NES）的短肽溶于乙醇?？拐婢?、抗生素?？鼓[瘤細胞毒素。比來普霉素A效力強兩倍。受來普霉素B影響的含NES的蛋白包括HIV-1 REV、肌動蛋白、c-Abl、細胞周期蛋白B1、MDM2/p53、MPF、PKA和MEK。158159160, LC labs, Sigma-Aldrich, Cell signaling techn

46、ology, EMD4BiosciencesRatjadone A（C28H40O5）核輸出通過與CRM1共價結合來抑制含有LR-NES（富含亮氨酸的核輸出信號）的蛋白溶于含水緩沖液和甲醇。可通透細胞的聚酮?？股亍Ｅc來普霉素B一樣有效。抑制擴增。導致腫瘤細胞在G1期發(fā)生細胞周期阻滯。161162163, Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences, Cell signaling technology, Santa Cruz Biotech.依維菌素（C48H74O14（22,23-dihydroavermectin B1a）+ C47H72O14（22,23dihydroa

47、vermectin B1b）核輸入最近被發(fā)現(xiàn)對于輸入蛋白/介導的核輸入具有廣譜作用抗病毒。對于研究蛋白質核輸入十分有用。調節(jié)谷氨酸-GABA活化的氯通道。164165166, MP Biomedicals, Sigma-Aldrich, Fisher Scientific表10.核運輸?shù)某Ｓ靡种苿?。一般為了誘導核輸入會將設計成NLS的肽段結合在輸入底物上。另一方面，針對諸如輸入蛋白和運蛋白等可以識別NLS的核運輸受體而設計的細胞通透性肽被用于抑制核運輸 167。細胞收縮在特定胞內Ca2+濃度下，磷脂酶C（PLC）、蛋白激酶C（PKC）、Rho GTP酶、Rho激酶（RhoA的下游效應蛋白）、肌

48、球蛋白輕鏈激酶（MLCK）和肌球蛋白輕鏈磷酸酶（MLCPh）都會參與細胞收縮過程。放大圖 2.細胞收縮MLCK和MLCPh的作用：細胞收縮主要由肌動蛋白和肌球蛋白介導。肌球蛋白輕鏈的磷酸化會誘發(fā)肌動蛋白和肌球蛋白分子之間的相互作用。肌球蛋白輕鏈的磷酸化是由肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）活化與肌球蛋白輕鏈磷酸酶（MLCPh）之間的平衡所決定的。Rho GTP酶和Rho激酶的作用：細胞通過粘附位點與微環(huán)境間的相互作用會活化Rho GTP酶?；罨腞ho GTP酶會與絲氨酸/蘇氨酸激酶、Rho激酶、ROK及相關的p160ROCK等激酶結合并提高它們的活性?；罨腞ho-激酶會抑制肌球蛋白磷酸酶的活性，

49、從而促使肌球蛋白輕鏈（MLC）磷酸化。PLC、 Ca2+和PKC的作用 168：收縮過程始于磷脂酶C（PLC）活化，從而產生兩種第二信使，甘油二酯（DG）和肌醇1,4,5-三磷酸（IP3）。IP3會導致Ca2+從肌質網中釋放出來。Ca2+會以兩種方式來誘導收縮：1）Ca2+與DG一起激活蛋白激酶C。PKC則通過使L型Ca2+通道和其它調控橫橋周期的蛋白發(fā)生磷酸化來進一步促進收縮，2）Ca2+與鈣調蛋白結合并活化肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）?，F(xiàn)在用于研究細胞收縮途徑的各種抑制劑和激活劑包括：抑制劑靶點機制作用特點及效果參考文獻、來源及供應商星孢菌素（C28H26N4O3）肌球蛋白輕鏈激酶（MLC

50、K）、蛋白激酶C（PKC）抑制肌球蛋白輕鏈激酶（IC50 = 1.3 nM）、蛋白激酶C（IC50 = 700 pM）溶于DMSO和甲醇。也抑制蛋白激酶A（IC50 = 7 nM）和蛋白激酶G（IC50 = 8.5 nM）。將正常細胞的細胞周期阻滯于G1期檢查點。169170171, Cell signaling Technology Inc., Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences, Tocris Bioscience, Enzo Life SciencesY-27632（C14H21N3O · 2HCl）ROCKRho關聯(lián)蛋白激酶的可逆選擇性抑制劑（p16

51、0ROCK的Ki = 140 nM)。同樣抑制ROCK-II。這種抑制對于ATP是競爭性的。在水中可溶達14 mg/ml。抑制激動劑誘導的肌球蛋白磷酸化和平滑肌收縮的Ca2+致敏。同樣抑制蛋白激酶C相關激酶（IC50 = 600 nM）。已經被發(fā)現(xiàn)會阻止凋亡并增加解離的人胚胎干細胞的存活率及克隆效率而不影響其多能性172173174175, Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences, Tocris Bioscience, Stemgent.H-1152（C16H21N3O2S.2HCl）ROCK選擇性的ATP競爭性rho激酶（ROCK）抑制劑在水中溶達100 mM，在DMS

52、O中溶達50 mM in DMSO。比Y-27632的效力及選擇性更強。對于其它絲氨酸/蘇氨酸激酶的親和性較弱（PKA的Ki=630nM，PKC的為9.27m而MLCK的為10.1mM）。176177178179, Tocris Bioscience, Enzo Life Sciences, Sigma-Aldrich, Santa Cruz Biotechnology,ML-9（C15H17N2O2SCl · HCl）肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）、蛋白激酶C（PKC）肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）（Ki = 4 M）和PKC（Ki = 54 M）的選擇性抑制劑在DMSO中溶達25 m

53、M。抑制PKA（Ki = 32 M）。 濃度為10-100 µM時抑制血管平滑肌張力并降低胞內Ca2+濃度。180181182, Tocris Bioscience, Cayman Chemical, Sigma-Aldrich, EMD4BiosciencesML-7（C15H17IN2O2S · HCl）肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）肌球蛋白輕鏈激酶的ATP競爭性選擇抑制劑（Ki = 300 nM）溶于DMSO或50%乙醇。在較高濃度時抑制蛋白激酶A（Ki = 21 µM）和蛋白激酶C（Ki = 42 µM）。ML-9的衍生物。與ML-9相比是更加強勁

54、的抑制劑。183180184, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, Santa Cruz Biotechnology, EMD4BiosciencesK-252a（C27H21N3O5）MLCK、PKC抑制PKC（IC50 = 32.9 nM）和MLCK（Ki = 20 nM）。作為ATP競爭性抑制劑同樣抑制PKA、PKG、CaMK、磷酸化酶激酶、MAP激酶和受體酪氨酸激酶的trk家族。溶于DMF或DMSO。星孢菌素類似物。阻止下游效應蛋白（MAPK、Akt）的自磷酸化與活化。通過抑制Cdc2和Cdc25來引起凋亡和細胞周期阻滯。185186187188, LC

55、 Laboratories, Tocris Bioscience, EMD4Biosciences/Millipore, Invitrogen, Sigma-Aldrich三氟拉嗪鈣調蛋白鈣調蛋白拮抗劑。抑制Ca2+/鈣調蛋白依賴性的磷酸二酯酶。吩噻嗪類抗精神病D2多巴胺受體拮抗劑，抑制門控陽離子通道（IC50 = 13 µM）并抑制肝鳥氨酸脫羧酶活性。189Sigma-Aldrich, EMD4BiosciencesW-7（C16H21ClN2O2S · HCl）鈣調蛋白抑制Ca2+/鈣調蛋白活化的磷酸二酯酶（IC50 = 28 µM）和肌球蛋白輕鏈激酶（IC50 = 51 µM）。抑制倉鼠卵巢K1細胞增殖190191192, Sigma-Aldrich, EMD4Biosciences, Santa Cruz Biotechnology表11.常用的細胞收縮抑制劑。激活劑靶點機制作用特點及效果參考文獻、來源及供應商內皮素I（C109H159N25O32S5）MLC磷酸化有效的血管收縮劑。 內皮素I通過激活Rho激酶途徑以及之后的MLC磷酸化來調節(jié)收縮在1%乙酸和水中溶解度 >1mg/ml。誘導缺氧誘導因子1及