紫外可見分光光度計技術(shù)講座

1、 技術(shù)講座技術(shù)講座中南大學(xué)現(xiàn)代分析測試中心中南大學(xué)現(xiàn)代分析測試中心 內(nèi)容提要第一篇 第二篇 第三篇 光的選擇吸收光的選擇吸收 當(dāng)一束光照射到某種物質(zhì)的固態(tài)物或溶液上時，一部當(dāng)一束光照射到某種物質(zhì)的固態(tài)物或溶液上時，一部分光會被分光會被吸收吸收或被或被反射反射，不同的物質(zhì)對于照射它們的光束，不同的物質(zhì)對于照射它們的光束的吸收程度是不同的，對某個波長的光吸收強烈，對另外的吸收程度是不同的，對某個波長的光吸收強烈，對另外波長的光吸收很小或不吸收，我們把這種現(xiàn)象稱為光的選波長的光吸收很小或不吸收，我們把這種現(xiàn)象稱為光的選擇吸收。擇吸收。 物質(zhì)呈現(xiàn)出特征的顏色，就是它們對可見光中某些特物質(zhì)呈現(xiàn)出特征的顏

2、色，就是它們對可見光中某些特定波長的光線選擇吸收的緣故。定波長的光線選擇吸收的緣故。 一切物質(zhì)都會對可見和不可見光中的某些波長的光進(jìn)一切物質(zhì)都會對可見和不可見光中的某些波長的光進(jìn)行吸收行吸收 物質(zhì)顏色和吸收光顏色的關(guān)系物質(zhì)顏色和吸收光顏色的關(guān)系 吸吸 收收 光光 物質(zhì)顏色物質(zhì)顏色 顏顏 色色 波波 長長(nm) 黃黃 綠綠 紫紫 400 450 黃黃 藍(lán)藍(lán) 450 480 橙橙 綠綠 藍(lán)藍(lán) 480 490 紅紅 藍(lán)藍(lán) 綠綠 490 500 紫紫 紅紅 綠綠 500 560 紫紫 黃黃 綠綠 560 580 藍(lán)藍(lán) 黃黃 580 600 綠綠 藍(lán)藍(lán) 綠綠 600 650 藍(lán)藍(lán) 綠綠 紅紅 650

3、750 電磁波譜圖電磁波譜圖 0.01nm 0.1nm 800nm 10m 500m 1cm 波長波長 200nm 400nm 2.5m 25m 1m 光譜光譜 可可區(qū)域區(qū)域 見見 射線射線 射線射線 紫外光紫外光 光光 紅外光紅外光 微波微波 無線電波無線電波 分析分析 分光分光方法方法 射線射線 光度光度 核磁共振核磁共振 射線光譜法射線光譜法 光譜法光譜法 紫外光譜法紫外光譜法 法法 紅外光譜法紅外光譜法 微波光譜法微波光譜法 光譜法光譜法 1m = 104 m = 106nm = 109 入射光入射光I0透射光透射光I 光程長光程長 光源光源透射率透射率 T =I0I檢測器檢測器LAM

4、BERT-BEERLAMBERT-BEER定定律律此處此處T: 透射率透射率e e: 摩爾消光系數(shù)摩爾消光系數(shù)l: 光程長光程長 C: 濃度濃度 吸收吸收 A = log = e e C l1T 當(dāng)一束平行的單色光通過某一均勻溶液時，溶液的吸當(dāng)一束平行的單色光通過某一均勻溶液時，溶液的吸光度與溶液的濃度和光程的長度的乘積成正比。光度與溶液的濃度和光程的長度的乘積成正比。A = log = - log T = e e C l = abc吸光度、透過率與濃度的關(guān)系吸光度、透過率與濃度的關(guān)系（ （波長、吸收池光程一定）波長、吸收池光程一定）00.20.40.60.8100.511.522.533.5

5、4Abs%T 濃度濃度1TUV應(yīng)用領(lǐng)域大學(xué)科研院所制藥化學(xué)電機電力、供氣光學(xué)金屬醫(yī)療分析實驗室其它大學(xué)科研院所制藥化學(xué)電機電力、供氣光學(xué)金屬醫(yī)療分析實驗室其它應(yīng)用領(lǐng)域：應(yīng)用領(lǐng)域： 涉及化學(xué)化工、醫(yī)療衛(wèi)生、冶金地質(zhì)、食品飲料、農(nóng)業(yè)化肥、畜牧水產(chǎn)、機涉及化學(xué)化工、醫(yī)療衛(wèi)生、冶金地質(zhì)、食品飲料、農(nóng)業(yè)化肥、畜牧水產(chǎn)、機械制造、計量科學(xué)、環(huán)保、制藥、生物、材料、石油等領(lǐng)域中的科研、教學(xué)、生械制造、計量科學(xué)、環(huán)保、制藥、生物、材料、石油等領(lǐng)域中的科研、教學(xué)、生產(chǎn)中的質(zhì)量控制、原材料和產(chǎn)品檢驗等各個方面，進(jìn)行定性分析、定量測定、純產(chǎn)中的質(zhì)量控制、原材料和產(chǎn)品檢驗等各個方面，進(jìn)行定性分析、定量測定、純度檢查、

6、結(jié)構(gòu)分析、絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)測定、動力學(xué)研究等等。度檢查、結(jié)構(gòu)分析、絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)測定、動力學(xué)研究等等。UV的測定范圍有機化學(xué)分析無機化學(xué)分析光學(xué)測定生物化學(xué)分析環(huán)境分析色彩測定臨床分析有機化學(xué)分析無機化學(xué)分析光學(xué)測定生物化學(xué)分析環(huán)境分析色彩測定臨床分析測定范圍：測定范圍： 幾乎所有的無機元素和在紫外及可見光區(qū)有特征吸收的有機物幾乎所有的無機元素和在紫外及可見光區(qū)有特征吸收的有機物或有機化合物都能用紫外或有機化合物都能用紫外/可見分光光度法進(jìn)行測定?？梢姺止夤舛确ㄟM(jìn)行測定。 紫外紫外/可見分光光度計的基本結(jié)構(gòu)可見分光光度計的基本結(jié)構(gòu) 光源光源 單色器單色器 樣品室樣品室 檢測器檢測器

7、控制放大電路控制放大電路 顯示器顯示器 比色皿比色皿 光電管（或光電池）光電管（或光電池） 放大器放大器 單色光單色光 顯示器顯示器 單光束紫外單光束紫外/可見分光光度計可見分光光度計 斬光器斬光器 單色光單色光 光電管（或光電池）光電管（或光電池） 放大器放大器 反光鏡反光鏡 雙光束紫外雙光束紫外/可見分光光度計可見分光光度計 比色皿比色皿 光電管（或光電池）光電管（或光電池） 斬光器斬光器 放大器放大器單色光單色光 顯示器顯示器 光電管（或光電池）光電管（或光電池） 準(zhǔn)雙光束紫外準(zhǔn)雙光束紫外/可見分光光度計可見分光光度計 S1 準(zhǔn)直鏡準(zhǔn)直鏡 切尼爾切尼爾-特納特納 G 單色器結(jié)構(gòu)單色器結(jié)構(gòu)

8、 S2 準(zhǔn)直鏡準(zhǔn)直鏡第二篇第二篇紫外紫外/ /可見分光光度測定的一般方法可見分光光度測定的一般方法（一）定量分析（一）定量分析一、絕對法一、絕對法 基于朗伯基于朗伯-比爾定律比爾定律A A = = e ebCbC ，當(dāng)某一物質(zhì)在一定波長下當(dāng)某一物質(zhì)在一定波長下e e（吸吸收系數(shù)，可由已知濃度樣品通過測量、計算求得）為一常數(shù)，比色收系數(shù)，可由已知濃度樣品通過測量、計算求得）為一常數(shù)，比色皿的光程也是已知，也是一個常數(shù)皿的光程也是已知，也是一個常數(shù)，只要在吸收系數(shù)指定的波長處只要在吸收系數(shù)指定的波長處測定樣品溶液的吸光度值測定樣品溶液的吸光度值( (ODOD值值) )，然后由下式求得該樣品溶液的濃

9、，然后由下式求得該樣品溶液的濃度或含量：度或含量： C C = = A A / / e e b b 二、標(biāo)準(zhǔn)對照法二、標(biāo)準(zhǔn)對照法 在同樣條件下，在選定的波長處，分別測定已知濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液在同樣條件下，在選定的波長處，分別測定已知濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值的吸光度值A(chǔ) A標(biāo)標(biāo)和樣品溶液的吸光度值和樣品溶液的吸光度值A(chǔ) A樣樣，然后由下式求得樣品溶，然后由下式求得樣品溶液的濃度或含量：液的濃度或含量： C C樣樣 = = A A樣樣 A A標(biāo)標(biāo) C C標(biāo)標(biāo)三、標(biāo)準(zhǔn)曲線法（包括三、標(biāo)準(zhǔn)曲線法（包括K K因數(shù)法）因數(shù)法） 最常用的定量分析方法最常用的定量分析方法。即在一定波長（。即在一定波長（maxmax）

10、下測定某下測定某物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度作校正曲線，然后測定樣品溶物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度作校正曲線，然后測定樣品溶液的吸光度值，由校正曲線求得液的吸光度值，由校正曲線求得樣品溶液的濃度或含量。樣品溶液的濃度或含量。 所配置的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度應(yīng)在所配置的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度應(yīng)在0.10.1 1.51.5A Absbs范圍內(nèi)，范圍內(nèi)，吸收測定的精密度可達(dá)吸收測定的精密度可達(dá)0.5%0.5%。 注意：注意：UV/VisUV/Vis的最低檢測濃度與吸收系數(shù)、儀器噪聲、的最低檢測濃度與吸收系數(shù)、儀器噪聲、基線平直度、光譜帶寬有關(guān)。而最高檢測濃度則與吸收系數(shù)、基線平直度、光譜帶寬有關(guān)。而最高檢測

11、濃度則與吸收系數(shù)、儀器的雜散光、光譜帶寬等有關(guān)，吸收系數(shù)與光譜帶寬有關(guān)。儀器的雜散光、光譜帶寬等有關(guān)，吸收系數(shù)與光譜帶寬有關(guān)。雜散光越小，檢測上限越高。雜散光越小，檢測上限越高。四、雙波長法四、雙波長法 標(biāo)準(zhǔn)溶液澄清透明，待測樣品渾濁或含有一種與吸收峰臨近的干擾成分，對標(biāo)準(zhǔn)溶液澄清透明，待測樣品渾濁或含有一種與吸收峰臨近的干擾成分，對待測成分主吸收波長的吸光度有疊加影響，干擾成分隨待測成分濃度變化或無法待測成分主吸收波長的吸光度有疊加影響，干擾成分隨待測成分濃度變化或無法將干擾成分加入標(biāo)準(zhǔn)溶液中，則必須用雙波長法扣除這種干擾成分對待測成分吸將干擾成分加入標(biāo)準(zhǔn)溶液中，則必須用雙波長法扣除這種干擾

12、成分對待測成分吸光度讀數(shù)的影響。光度讀數(shù)的影響。 雙波長法是以樣品溶液本身作參比，用兩束單色光雙波長法是以樣品溶液本身作參比，用兩束單色光1 1和和2 2交替照射到同一交替照射到同一樣品溶液上，儀器自動求得吸光度差值樣品溶液上，儀器自動求得吸光度差值A(chǔ) A，在一定范圍內(nèi)在一定范圍內(nèi)A A與溶液濃度成正比，與溶液濃度成正比，待測樣品與標(biāo)準(zhǔn)溶液在同樣條件下測定即可定量。待測樣品與標(biāo)準(zhǔn)溶液在同樣條件下測定即可定量。雙波長法可消除樣品溶液的渾雙波長法可消除樣品溶液的渾濁背景、色度背景，排除臨近吸收峰的干擾濁背景、色度背景，排除臨近吸收峰的干擾（包括二波長法、等吸收點法和系數(shù)（包括二波長法、等吸收點法和

13、系數(shù)倍率法）。倍率法）。 1 2 1 2 如：核酸（如：核酸（DNADNA、RNARNA）的測定的測定(260(260nm,280nmnm,280nm或或230230nm,260nm, 280nm)nm,260nm, 280nm)也也是雙波長或三波長測定法是雙波長或三波長測定法。五、多波長法五、多波長法六、多波長多組分定量法六、多波長多組分定量法七、導(dǎo)數(shù)光譜法七、導(dǎo)數(shù)光譜法 導(dǎo)數(shù)光譜法由于能提高方法的靈敏度，改善方法選擇性，有效的消除基導(dǎo)數(shù)光譜法由于能提高方法的靈敏度，改善方法選擇性，有效的消除基體干擾，尤其適合渾濁試樣和進(jìn)行多組分同時測定。體干擾，尤其適合渾濁試樣和進(jìn)行多組分同時測定。八、八

14、、 化學(xué)計量學(xué)光度法化學(xué)計量學(xué)光度法 人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)- -分光光度法分光光度法 模糊聚類模糊聚類- -偏最小二乘光度法偏最小二乘光度法 小波變換小波變換- -偏最小二乘法偏最小二乘法九、固相光度法九、固相光度法 固相光度法是將有色絡(luò)合物吸附或萃取在固相（如樹脂，泡沫塑料，結(jié)固相光度法是將有色絡(luò)合物吸附或萃取在固相（如樹脂，泡沫塑料，結(jié)晶萘，石蠟等）離子交換樹脂上，再在固相進(jìn)行光度測定。固相光度法是集晶萘，石蠟等）離子交換樹脂上，再在固相進(jìn)行光度測定。固相光度法是集分離、富集、測試于一體，不僅簡化了試驗過程，也大大提高了靈敏度和選分離、富集、測試于一體，不僅簡化了試驗過程，也大大提高了

15、靈敏度和選擇性。擇性。 另外，還有比吸收系數(shù)法、示差分光光度法等，因常規(guī)測定應(yīng)用較少，另外，還有比吸收系數(shù)法、示差分光光度法等，因常規(guī)測定應(yīng)用較少，這里不作詳細(xì)討論。這里不作詳細(xì)討論。十、動力學(xué)光度法十、動力學(xué)光度法 即時間掃描方式測定。是光度計的吸光度（即時間掃描方式測定。是光度計的吸光度（Abs）、）、透過率（透過率（%T）隨時間變隨時間變化的一種動態(tài)測量方式。化的一種動態(tài)測量方式。 主要用于酶機理研究、酶活性測定、元素分析及化學(xué)反應(yīng)機理的研究等。主要用于酶機理研究、酶活性測定、元素分析及化學(xué)反應(yīng)機理的研究等。動動力學(xué)光度法因其特有的高靈敏度在光度分析中占有重要地位。動力學(xué)光度法可分力學(xué)光

16、度法因其特有的高靈敏度在光度分析中占有重要地位。動力學(xué)光度法可分為三種類型：為三種類型：（1）催化動力學(xué)光度法，）催化動力學(xué)光度法，這是最主要的也是最常用的動力學(xué)光度這是最主要的也是最常用的動力學(xué)光度法，系利用被測離子催化顯色體系的顯色反應(yīng)或褪色反應(yīng)進(jìn)行測定，近年來，利法，系利用被測離子催化顯色體系的顯色反應(yīng)或褪色反應(yīng)進(jìn)行測定，近年來，利用催化反應(yīng)測定的論文呈現(xiàn)非常明顯的上升之勢。其測定范圍已包括許多過渡金用催化反應(yīng)測定的論文呈現(xiàn)非常明顯的上升之勢。其測定范圍已包括許多過渡金屬、貴金屬、非金屬和無機陰離子。涉及的元素有屬、貴金屬、非金屬和無機陰離子。涉及的元素有Ag、Al、AS、Au、Bi、B

17、r、Ca、Cd、Ce、Co、Cr、Cu、Eu、F、Fe、Hg、I、Mn、Mo、Ni、Os、Pb、Pt、Pd、Re、Rh、Ru、S、Sb、Se、Si、Sn、Sr、Te、Ti、Tl、Th、U、V、Zn等。涉及的陰離子有等。涉及的陰離子有SCN-、BrO3-、NO2-、NO3-。（2）誘導(dǎo)動力學(xué)光度法誘導(dǎo)動力學(xué)光度法，系利用某一轉(zhuǎn)化反應(yīng)來誘導(dǎo)另一轉(zhuǎn)化反應(yīng)，借以進(jìn)行光度測定。系利用某一轉(zhuǎn)化反應(yīng)來誘導(dǎo)另一轉(zhuǎn)化反應(yīng)，借以進(jìn)行光度測定。（3）速差動力）速差動力學(xué)光度法學(xué)光度法，是利用性質(zhì)相近的不同離子在同一顯色體系中反應(yīng)速率常數(shù)的差異，是利用性質(zhì)相近的不同離子在同一顯色體系中反應(yīng)速率常數(shù)的差異，對其分別進(jìn)行

18、光度測定。對其分別進(jìn)行光度測定。 ABS ABS ABS ABS (%T) (%T) (%T) (%T) 時間時間 時間時間（二）定性分析（二）定性分析一、利用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定性一、利用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定性 在相同條件下，用光譜掃描法測定未知物的吸收光譜，與所推斷化合物的標(biāo)在相同條件下，用光譜掃描法測定未知物的吸收光譜，與所推斷化合物的標(biāo)準(zhǔn)物的吸收光譜進(jìn)行比較，如果兩吸收光譜的形狀和吸收峰的數(shù)目、位置、拐點準(zhǔn)物的吸收光譜進(jìn)行比較，如果兩吸收光譜的形狀和吸收峰的數(shù)目、位置、拐點等完全一致，就可初步判定未知物與標(biāo)準(zhǔn)物是同一種物質(zhì)。但要注意，物質(zhì)不同等完全一致，就可初步判定未知物與標(biāo)準(zhǔn)物是同一種物質(zhì)。但要注意，物

19、質(zhì)不同但光譜相似的特殊情況。但光譜相似的特殊情況。二、用波長位置判斷有機化合物的生色基團(tuán)二、用波長位置判斷有機化合物的生色基團(tuán) 例如，若發(fā)現(xiàn)在例如，若發(fā)現(xiàn)在210210 250250nmnm有強吸收峰，則可能有雙鍵并處在共扼狀態(tài)。在有強吸收峰，則可能有雙鍵并處在共扼狀態(tài)。在260260nmnm、300nm300nm、330nm330nm有高強度的吸收帶，表示有有高強度的吸收帶，表示有3 3 5 5個共扼單位，如在個共扼單位，如在270270 300300nmnm之間有弱吸收之間有弱吸收( (e e=10=10 100)100)，表示有羥基的存在；在，表示有羥基的存在；在250250 30030

20、0nmnm之間之間有中強度吸收有中強度吸收( (e=1000 e=1000 10000)10000)，表示有笨環(huán)存在等，表示有笨環(huán)存在等。（三）純度檢查（三）純度檢查 主要用于檢查對光沒有特征吸收的化合物中的具有特征吸收的雜質(zhì)。主要用于檢查對光沒有特征吸收的化合物中的具有特征吸收的雜質(zhì)。 如檢查乙醇中醛的量，可用蒸餾水作參比，在如檢查乙醇中醛的量，可用蒸餾水作參比，在270270 290290 nm處測量吸處測量吸光度，如在光度，如在280280nmnm處有吸收，表示有醛。處有吸收，表示有醛。 雙波長或三波長核酸（雙波長或三波長核酸（DNADNA、RNARNA）的測定時，根據(jù)的測定時，根據(jù)A

21、A260260 / A / A280280的比值的比值可確定可確定DNADNA或或RNARNA的純度。對于的純度。對于DNADNA，比值為比值為1.6 1.6 1.81.8之間之間, ,RNARNA比值為比值為1.8 1.8 2.02.0之間之間, ,認(rèn)為純度較高。認(rèn)為純度較高。 又如四氯化碳中，最主要的雜質(zhì)是二硫化碳（又如四氯化碳中，最主要的雜質(zhì)是二硫化碳（CSCS2 2）。）。二硫化碳雜質(zhì)二硫化碳雜質(zhì)的多少，衡量產(chǎn)品質(zhì)量的好壞。二硫化碳在紫外區(qū)的的多少，衡量產(chǎn)品質(zhì)量的好壞。二硫化碳在紫外區(qū)的318318nmnm處有一個很強處有一個很強的吸收峰。因此，只要檢查的吸收峰。因此，只要檢查3183

22、18nmnm處二硫化碳吸收峰的大小，就可知道四處二硫化碳吸收峰的大小，就可知道四氯化碳產(chǎn)品是否合格。氯化碳產(chǎn)品是否合格。（四）固體樣品的分析（四）固體樣品的分析 固體樣品分析的配件主要有：積分球、鏡面反射裝置、固體樣品支架、凝膠固體樣品分析的配件主要有：積分球、鏡面反射裝置、固體樣品支架、凝膠掃描裝置及凝膠薄膜支架等。掃描裝置及凝膠薄膜支架等。 積分球是利用固體樣品的正反射（入射光按以法線為中心的對稱角度反射，積分球是利用固體樣品的正反射（入射光按以法線為中心的對稱角度反射，稱鏡面反射）或漫反射（入射光向各方向反射）的特性進(jìn)行分析的裝置。稱鏡面反射）或漫反射（入射光向各方向反射）的特性進(jìn)行分析

23、的裝置。 鏡面反射裝置主要用于半導(dǎo)體、光學(xué)材料的反射率測試。鏡面反射裝置主要用于半導(dǎo)體、光學(xué)材料的反射率測試。 固體樣品支架、凝膠掃描裝置及凝膠薄膜支架用于光學(xué)玻璃、電泳膠條等固體樣品支架、凝膠掃描裝置及凝膠薄膜支架用于光學(xué)玻璃、電泳膠條等的測定。的測定。 積分球、鏡面反射裝置是利用光的反射原理進(jìn)行定性、定量測定。如配備積分球、鏡面反射裝置是利用光的反射原理進(jìn)行定性、定量測定。如配備有透射樣品池架，也可進(jìn)行樣品溶液的透射測定。如配備大內(nèi)徑積分球有透射樣品池架，也可進(jìn)行樣品溶液的透射測定。如配備大內(nèi)徑積分球（150mm150mm）可測定粉狀、紙、布料及溶液等樣品的反射透射光譜，同時最適合可測定粉

24、狀、紙、布料及溶液等樣品的反射透射光譜，同時最適合于色彩分析。于色彩分析。參比光束參比光束 I I0 0 倒置型倒置型 標(biāo)準(zhǔn)白板標(biāo)準(zhǔn)白板 光電倍增管光電倍增管 樣品樣品樣品光束樣品光束 積分球示意圖積分球示意圖（五）結(jié)構(gòu)分析（五）結(jié)構(gòu)分析 紫外紫外/可見分光光度計可用來判別物質(zhì)的異構(gòu)可見分光光度計可用來判別物質(zhì)的異構(gòu)體，如互變異構(gòu)體、順反異構(gòu)體等。體，如互變異構(gòu)體、順反異構(gòu)體等。第三篇影響紫外儀器質(zhì)量的幾個重要指標(biāo)一、光度準(zhǔn)確度與重復(fù)性一、光度準(zhǔn)確度與重復(fù)性定義：定義：多次測量平均值與真值之差為光度準(zhǔn)確度（多次測量平均值與真值之差為光度準(zhǔn)確度（T 、 A）；）；最大值與最小最大值與最小值之差為

25、光度重復(fù)性。偏差越小，準(zhǔn)確度越高。光度準(zhǔn)確度和光度重復(fù)性是值之差為光度重復(fù)性。偏差越小，準(zhǔn)確度越高。光度準(zhǔn)確度和光度重復(fù)性是非常非常重要的技術(shù)指標(biāo)重要的技術(shù)指標(biāo)，直接關(guān)系到測試結(jié)果的準(zhǔn)確性。，直接關(guān)系到測試結(jié)果的準(zhǔn)確性。 光度準(zhǔn)確度在不同的吸光度范圍是不同的，因此光度準(zhǔn)確度的表示一定要指光度準(zhǔn)確度在不同的吸光度范圍是不同的，因此光度準(zhǔn)確度的表示一定要指出在多少吸光度或在多少出在多少吸光度或在多少透射比情況下測試的。透射比情況下測試的。影響影響光度準(zhǔn)確度的主要因素有：光度準(zhǔn)確度的主要因素有： 儀器的雜散光大小。儀器的雜散光大小。 儀器的光譜帶寬儀器的光譜帶寬 儀器的光度噪聲儀器的光度噪聲 試樣的

26、制備試樣的制備 儀器的基線平直度儀器的基線平直度 比色皿的性能比色皿的性能 光度準(zhǔn)確度的檢查光度準(zhǔn)確度的檢查: 一般用標(biāo)準(zhǔn)濾色片或一般用標(biāo)準(zhǔn)濾色片或的的重鉻酸鉀的重鉻酸鉀的0.0050.005mol/L Hmol/L H2 2SOSO4 4溶液。溶液。酸性重鉻酸鉀溶液的標(biāo)準(zhǔn)吸收值如下：酸性重鉻酸鉀溶液的標(biāo)準(zhǔn)吸收值如下： 吸吸 光光 度度 測量波長測量波長( (nm) nm) 溶液溶液A (50mg/L KA (50mg/L K2 2CrCr2 2O O7 7) ) 溶液溶液B (100mg/L KB (100mg/L K2 2CrCr2 2O O7 7) ) 235 235（谷）谷） 0.62

27、6 0.626 0.09 1.251 0.09 1.251 0.019 0.019 257 257（峰）（峰） 0.727 0.727 0.007 1.454 0.007 1.454 0.015 0.015 313 313（谷）（谷） 0.244 0.244 0.004 0.488 0.004 0.488 0.007 0.007 350 350（峰）（峰） 0.536 0.536 0.005 1.071 0.005 1.071 0.011 0.011圖1 透光度誤差T與吸光度相對誤差A(yù)/A0和吸光度真值A(chǔ)0的關(guān)系圖1 透光度誤差T與吸光度相對誤差A(yù)/A0和吸光度真值A(chǔ)0的關(guān)系0.000.010

28、.020.030.040.050.060.070.080.090.102.42.22.01.81.61.41.21.00.80.60.40.20.0A0A/A0-0.005T-0.004T-0.003T-0.002T-0.001T-0.0005T二、雜散光二、雜散光定義：定義：單色器額定通帶以外的透射輻射能量與總的透射能量之比，也就是光譜通單色器額定通帶以外的透射輻射能量與總的透射能量之比，也就是光譜通帶以外帶以外“不要的不要的”光通量就是雜散光。光通量就是雜散光。 雜散光是一個非常重要的關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)，它是紫外雜散光是一個非常重要的關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)，它是紫外/可見分光光度計分析誤可見分光光度計分析

29、誤差的主要來源，差的主要來源，直接限制被分析測試樣品的上限。直接限制被分析測試樣品的上限。當(dāng)儀器的雜散光一定時，被分當(dāng)儀器的雜散光一定時，被分析樣品的濃度越大，其分析誤差就越大。析樣品的濃度越大，其分析誤差就越大。 雜散光的主要來源：雜散光的主要來源： 1 1、灰塵沾污光學(xué)元件。灰塵沾污光學(xué)元件。 2 2、光學(xué)元件被損傷。、光學(xué)元件被損傷。 3 3、準(zhǔn)直系統(tǒng)內(nèi)部或有關(guān)隔板邊緣的反射。、準(zhǔn)直系統(tǒng)內(nèi)部或有關(guān)隔板邊緣的反射。 4 4、光學(xué)系統(tǒng)屏蔽不好。、光學(xué)系統(tǒng)屏蔽不好。 5 5、熱輻射或熒光引起的二次電子反射。、熱輻射或熒光引起的二次電子反射。 6 6、狹逢的缺陷。、狹逢的缺陷。 7 7、光學(xué)系統(tǒng)

30、的像差。、光學(xué)系統(tǒng)的像差。、 8 8、單色器內(nèi)壁黑化處理不當(dāng)。、單色器內(nèi)壁黑化處理不當(dāng)。 光柵是雜散光的主要來源，占總雜散光的光柵是雜散光的主要來源，占總雜散光的80%80%。測定方法：測定方法：一般采用標(biāo)準(zhǔn)濾光片或一般采用標(biāo)準(zhǔn)濾光片或10g/L的的NaI及及NaNO3水溶液。在紫外區(qū)測定水溶液。在紫外區(qū)測定220nm(NaI)或或340nm(NaNO3)處的透過率處的透過率%T ，在可見光區(qū)用在可見光區(qū)用384mg/L的的KMnO4 ，測定測定525nm處的透過率處的透過率%T 。圖1 雜 散光S 與吸光度 相對誤差A(yù) / A 0 和吸光度真值A(chǔ) 0 的關(guān) 系0.000.010.020.03

31、0.040.053.43.23.02.82.62.42.22.01.81.61.41.21.00.80.60.40.20.0A0A /A00.005S0.004S0.003S0.002S0.001S0.0005S0.0004S0.0003S0.0002S0.00015S0.0001S0.00005S 不同程度雜散光對比爾定律的偏離不同程度雜散光對比爾定律的偏離0.1%T三、噪聲三、噪聲定義：定義： 無樣品時儀器自身的波動。無樣品時儀器自身的波動。 也就是說：噪聲是疊加在待測量的分析信號中不需要的信號，也就是說：噪聲是疊加在待測量的分析信號中不需要的信號，即零信號上下波動的振幅寬度。即零信號上下波動的振幅寬度。重要性：重要性： 光度噪聲影響光度測量的靈敏度（信噪比）、精密度和準(zhǔn)確光度噪聲影響光度測量的靈敏度（信噪比）、精密度和準(zhǔn)確度。度。限制測定濃