食品中山梨酸含量的測(cè)定論文

1、食品中山梨酸含量的測(cè)定一、 前言31、 山梨酸簡(jiǎn)介32、使用范圍43、用量介紹54、應(yīng)用實(shí)例55、 主要測(cè)定方法9二、 實(shí)驗(yàn)部分121、 試驗(yàn)原理122、 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 123、 實(shí)驗(yàn)方法13三、 方法研究131、 吸收光譜和測(cè)量波長的選擇 132、 氧化反應(yīng)溫度 143、 顯色酸度154、顯色劑用量165、 工作曲線17四、 樣品測(cè)定181、 樣品溶液的制備和測(cè)定方法 182、 精密度實(shí)驗(yàn)183、 樣品分析19五、 結(jié)論20參考文獻(xiàn)20致謝21食品中山梨酸含量的測(cè)定摘 要食品中添加的山梨酸超標(biāo)嚴(yán)重，消費(fèi)者長期服用，在一定程度上會(huì)抑制骨骼生長，危害腎、肝臟的健康，因此食品中山梨酸含量是一項(xiàng)極

2、其重要的指標(biāo)。本文采用分光光度1-2法測(cè)定食品中山梨酸的含量。以雙氧水-硫酸溶液為山梨酸氧化體系，氧化產(chǎn)物丙二醛進(jìn)一步與硫代巴比妥酸進(jìn)行顯色反應(yīng)。在吸收波長530nm處，氧化反應(yīng)溫度 60C，顯色劑用量 4.0mL,0.15mol/LH 2SQ溶液用量1.4mL測(cè)定效果最佳。山梨酸濃度在01.066 g/mL范圍內(nèi)呈線性相關(guān)，線性范圍內(nèi)吸光度與山梨酸濃度（g/mL）間的關(guān)系為： A=0.3715c+0.0047 , R2=0.9998，回收率 為 99.0%101.1%。關(guān)鍵詞分光光度法；山梨酸；過氧化氫 -硫酸；硫代巴比妥酸一、前言1、山梨酸簡(jiǎn)介山梨酸及山梨酸鉀3-4（以下簡(jiǎn)稱山梨酸及鉀鹽）

3、是一種良好的食品防腐劑，在西方發(fā)達(dá)國家的應(yīng)用量很大，但在中國國內(nèi)的應(yīng)用范圍還不廣。作為 一種公認(rèn)安全、高效防腐的食品添加劑，山梨酸在我國食品行業(yè)的應(yīng)用必將 會(huì)越來越廣泛。為白色或微黃白色結(jié)晶性粉末；有特臭。本品在乙醇中易溶，在乙醚中溶解，在水中極微溶解。我們?cè)谶x購包裝（或罐裝）食品時(shí)，配料一項(xiàng)中常?？吹健吧嚼嫠帷钡淖謽?，人們往往會(huì)誤認(rèn)為可能是水果“梨”的成 份。其實(shí)他們是常用的食品添加劑！不管他們對(duì)人體有沒有危害，明明白白 的消費(fèi)確是非常必要的，以下是有關(guān)山梨酸的有關(guān)資料僅供參考：山梨酸 （化學(xué)名稱：2，4己二烯酸 分子式：QfQ山梨酸是國際糧農(nóng)組織和衛(wèi)生組織推薦的高效安全的防腐保鮮劑，廣泛

4、應(yīng)用于食品、飲料、煙草、農(nóng)藥、化妝品等行業(yè)，作為不飽和酸，也可用于樹脂、香料和橡膠工業(yè)。2、安全性由于山梨酸（鉀）是一種不飽和脂肪酸（鹽）它可以被人體的代謝系統(tǒng) 吸收而迅速分解為二氧化碳和水，在體內(nèi)無殘留。ADI 0-25mg/kg （以山梨酸計(jì)，F(xiàn)AO/WHO994），LD50 4920mg/kg （大鼠、經(jīng)口）， GRAS（ FDA 182.3640 1994），其毒性僅為食鹽的 1/2，是苯 甲酸鈉的1/40。但是如果食品中添加的山梨酸超標(biāo)嚴(yán)重，消費(fèi)者長期服用， 在一定程度上會(huì)抑制骨骼生長，危害腎、肝臟的健康。3、穩(wěn)定性山梨酸（鉀）在密封狀態(tài)下穩(wěn)定，暴露在潮濕的空氣中易吸水，氧化而 變色

5、。山梨酸鉀對(duì)熱穩(wěn)定性較好，分解溫度高達(dá)270 C。4、使用范圍目前已廣泛地用于食品、飲料、醬菜、煙草、醫(yī)藥、化妝品、農(nóng)產(chǎn)品、飼料等行業(yè)中，從發(fā)展趨勢(shì)看，其應(yīng)用范圍還在不斷擴(kuò)大。山梨酸（鉀）屬酸性防腐劑，在接近中性（pH= 6.06.5）的食品中仍有較好的防腐作用，而苯甲酸 （鈉）的防腐效果在pH>4時(shí)，效果已明顯下降， 且有不良味道。5、主要特點(diǎn)（1）防霉效果良好。山梨酸及鉀鹽的防霉能力明顯高于苯甲酸及鹽類，山梨酸鉀的防霉效果是苯甲酸鈉的510倍。山梨酸的用量一般在0.21.0g/kg 之間。（2）產(chǎn)品毒性低、安全性高。山梨酸鹽的毒副作用只是苯甲酸鹽的1/4、食鹽的1/2。山梨酸及鉀鹽在

6、人體內(nèi)的安全使用范圍為：每天每千克體重的 使用量不超過25毫克。（3）不改變食品特性。山梨酸是一種不飽和脂肪酸，進(jìn)入人體后，參與 人體的新陳代謝過程，代謝產(chǎn)物為二氧化碳和水。所以，山梨酸可以看作是 食品的一部分，在食品中應(yīng)用，不會(huì)破壞食品的色、香、味和營養(yǎng)成分。（4）應(yīng)用范圍寬廣。山梨酸及鉀鹽可以用于飲料、酒、調(diào)味品、肉制品、水產(chǎn)制品、醬腌菜等多種食品的防腐之中，且對(duì)水果保鮮也有效果。（5）使用方便。在使用山梨酸及鉀鹽時(shí)，可以直接添加，也可以噴灑或 者浸漬。正是由于其具有使用靈活的特點(diǎn)，所以，聯(lián)合國糧農(nóng)組織、世界衛(wèi)生組織、美國、英國、日本以及中國、東南亞國家，都推薦山梨酸及鉀鹽作為多種食品的防

7、腐保鮮劑。6、主要指標(biāo)山梨酸的質(zhì)量指標(biāo)：應(yīng)符合GB1905-2000技術(shù)要求。(1 )色澤及外形：白色結(jié)晶粉末。(2) 熔點(diǎn)：132 135C。(3) 含量(以干基計(jì))：99.0%101.0%。(4) 灼燒殘?jiān)簑 0.2%。(5) 重金屬(以 Pb計(jì))：w 0.001%。(6) 砷牖以 As計(jì)牘：w 0.0002%。(7) 水分：w 0.5%。(8) 貯存：存放在陰涼干燥處，避光，禁止與有毒有害物品共同存放。7、用量介紹山梨酸類有山梨酸、山梨酸鉀和山梨酸鈣三類品種。山梨酸不溶于水使用時(shí)須先將其溶于乙醇或硫酸氫鉀中，使用時(shí)不方便且有刺激性，故一般不 常用；山梨酸鈣 FAO/WHOfi定其使用范

8、圍小，所以也不常使用；山梨酸鉀則 沒有它們的缺點(diǎn)，易溶于水、使用范圍廣，我們經(jīng)?？梢栽谝恍╋嬃?、果脯、 罐頭等食品看到它的身影；在這里我重點(diǎn)介紹一下山梨酸鉀：它為不飽和六 碳酸；一般市場(chǎng)上出售的山梨酸鉀呈白色或淺黃色顆粒，含量在98%102%無臭味、或微有臭味，易吸潮、易氧化而變褐色，對(duì)光、熱穩(wěn)定，相對(duì)密度 1.363，熔點(diǎn)在270T分解，其1%溶液的pH=7&山梨酸鉀為酸性防腐劑， 具有較高的抗菌性能，抑制霉菌的生長繁殖；其主要是通過抑制微生物體內(nèi) 的脫氫酶系統(tǒng)，從而達(dá)到抑制微生物的生長和起防腐作用，對(duì)細(xì)菌、霉菌、 酵母菌均有抑制作用；其效果隨pH的升高而減弱，pH達(dá)到3時(shí)抑菌達(dá)到頂

9、峰，pH達(dá)到6時(shí)仍有抑菌能力，但最底濃度(MIC)不能底于0.2%，實(shí)驗(yàn)證明pH=3.2比pH=2.4的山梨酸鉀溶液浸漬， 未經(jīng)殺菌處理的食品的保存期短 24倍。山梨酸、山梨酸鉀和山梨酸鈣它們?nèi)N的作用機(jī)理相同，毒性比苯甲酸類和尼泊金酯要小，日允許量為25mg/Kg，苯甲酸5倍，尼泊金酯的2.5倍 是一種相對(duì)安全的食品防腐劑；在我國可用于醬油、醋、面醬類、果醬類、 醬菜類、罐頭類和一些酒類等等食品。&應(yīng)用實(shí)例(1) 山梨酸在酒類和飲料中的應(yīng)用。 蘇打類飲料：按照 0.03%0.04%的比例添加山梨酸。 鮮橘汁、山楂汁等飲料：按照0.02%的比例添加山梨酸，可以將保存期延長到6月。 其他

10、類非酒精飲料：按照0.04%0.05%的比例添加山梨酸。(2) 山梨酸在醬油、醬制品和腌菜中的應(yīng)用。 醬油：按照0.01%的比例添加山梨酸，在高溫季節(jié)放置70天，可以使醬油不發(fā)生長霉變質(zhì)的問題。 醬類制品：由于類品比較黏稠，山梨酸在其中不易均勻分散。可以在 產(chǎn)品灌裝之前，在加熱的情況下，加入相應(yīng)濃度的山梨酸溶液。 醬油腌菜：可將山梨酸溶解于冰醋酸之中，然后加入腌菜內(nèi)，添加量在1.0g/kg 之內(nèi)，并將 pH值控制在4.04.5之間。 酒糟腌菜：可以先將山梨酸溶解于乙醇、燒酒或者料酒中，然后加入腌菜內(nèi)，添加量為 0.751.00g/kg。 醋腌菜：將山梨酸直接加入到物料之中，添加量為0.5g/k

11、g 。 腌小黃瓜、甜菜根及其他腌菜：可以在含有食鹽的醋中加入適量的山 梨酸鉀(按照食鹽的 0.1%的量添加)。為了防止腌菜鹽水發(fā)生混濁現(xiàn)象，可 以先將食鹽、香料和山梨酸鉀溶解于水中，然后添加醋。(3) 山梨酸及鉀鹽在水產(chǎn)制品中的應(yīng)用 魚糕食品：魚糕類制品的pH值在6.87.2之間。如果降低 pH值，則會(huì)影響魚糕的彈性。而山梨酸又是一種酸性防腐劑，所以，山梨酸的用量不宜超過1.0g/kg為了解決pH值和魚糕彈性相矛盾的問題，可以使用山梨 酸和山梨酸鉀的混合物，也可以單獨(dú)使用山梨酸鉀。 魚肉香腸：按照0.1%0.2%的用量向魚肉香腸中添加山梨酸和山梨酸 鉀的混合物，在30 C的情況下貯藏兩個(gè)星期，

12、這種香腸不會(huì)變質(zhì)；而對(duì)照樣品在一個(gè)星期后就會(huì)變質(zhì)。當(dāng)將魚肉香腸的pH值調(diào)節(jié)到小于6時(shí)，在1015C的溫度下，這種魚肉香腸可以保存7個(gè)星期而不變質(zhì)。 魚干制品：這類食品的干燥程度很高，水分含量在30%以下的魚干制品，一般不會(huì)發(fā)生細(xì)菌腐敗問題，但會(huì)產(chǎn)生霉變現(xiàn)象。添加山梨酸，可以有 效防止魚干制品中霉變問題的發(fā)生，山梨酸的用量為1.0g/kg。 熏魚制品：在熏魚制品上噴灑濃度為5%10%的山梨酸鉀溶液，噴灑過程可以在熏制前進(jìn)行，也可以在熏制中或者熏制后實(shí)施。 醬油烹煮的魚蝦：按照0.1%用量添加山梨酸的此類食品，在1015C的溫度下，可以貯存兩個(gè)月而不變質(zhì)。 鮮魚、鮮蝦及其他水產(chǎn)品：將鮮魚等水產(chǎn)品洗

13、凈后，浸入含有山梨酸 的保鮮溶液中20s，然后排去溶液，將魚冷藏。保鮮溶液的配方為：山梨酸1.0%5.0%、甘油1.0%20% 聚乙烯醇 0.3%3.0%，其余皆為水。(4) 山梨酸在肉制品及香腸中的應(yīng)用 干肉、干香腸、熏火腿和其他類似的干肉制品可以浸泡在濃度為5%15%的山梨酸鉀溶液中，保持30秒鐘。 一般肉料：先按照 0.05%0.1%的用量向肉料中添加山梨酸或者山梨酸鉀，接著按照0.01%0.5%的用量加入 C10或者C12脂肪酸甘油酸酯。另 外，在肉料中加入亞硝酸鉀(用量為20ppm30ppm)和六偏磷酸鈉。 肉餡：按照 0.08%0.1%的用量添加山梨酸，或者使用山梨酸和山梨 酸鉀的

14、混合物。 熟雞肉：將熟雞肉放在山梨酸鉀保鮮溶液中浸泡30秒鐘，然后在4°C的條件下貯存，可以保鮮 20天。山梨酸鉀保鮮溶液的配方為： 10%的檸檬 酸、6%的山梨酸鉀、34%的改性玉米淀粉、50%的水、保鮮溶液的 pH值為 3.2。 生鮮禽肉：將含有山梨酸的保鮮液噴灑到生鮮禽肉表面，在7 C的條件下儲(chǔ)存，18天后，產(chǎn)品沒有發(fā)生變質(zhì)現(xiàn)象；而對(duì)照樣品在5天后就發(fā)生變質(zhì)現(xiàn)象。保鮮液的配方為：含有 7.5%山梨酸的丙二醇70份，水20份，甘油 10份。 生鮮雞腿、雞胸：用濃度為10%勺山梨酸溶液浸泡雞腿、雞胸30秒，在4°C的情況下，可以存放 20天，保鮮時(shí)間是對(duì)照樣的兩倍。(5

15、)山梨酸在蔬菜和水果保鮮中的應(yīng)用。 蔬菜、水果：將蔬菜、水果與山梨酸保鮮劑一同放入聚乙烯袋中、密 封，在30C的情況下保存一個(gè)月以上，可以保持蔬菜、水果的綠色度不變。山梨酸保鮮劑的配方為：80份過氧化鈣，3份山梨酸，70份沸石，保鮮劑和 水果的重量比為1 : 20。 蘋果：將濃度為 0.05%的保鮮液噴灑在蘋果的表面，在常溫下貯存4個(gè)月，僅有3.2%6.0%的蘋果發(fā)生變質(zhì)。保鮮液的配方為：山梨酸 1份，滑 石粉4份，水95份。 蔬菜罐頭：按照 0.1%的比例添加山梨酸，可以防止馬口鐵生銹。 番茄沙司：打開瓶蓋后，可按照0.025%的比例添加山梨酸。先將山梨酸溶解于醋酸中，然后加入到番茄沙司中。

16、 干果：用濃度為 2%5%的山梨酸鉀溶液浸泡或者噴灑干果。 煮制豆類食品：將山梨酸的添加量控制在千分之一以下。要注意調(diào)整 物料的pH值，當(dāng)pH值在7.0以上時(shí)，需要在物料中加入少量的食用酸(多 為檸檬酸，將pH值控制在6.36.5之間。(6 )山梨酸在干酪保鮮中的應(yīng)用。 硬干酪：用濃度為 20%40%的山梨酸鉀溶液噴灑物料，或者將物料浸 泡在山梨酸鉀溶液之中。 干酪粉：可以直接添加粉末狀山梨酸或者山梨酸鈣。 食鹽鹽化干酪：使用山梨酸鉀的方法有3種，一是在鹽溶液中加入山梨酸鉀，用量為0.2%1.0%，然后用這種鹽溶液來制作干酪；二是在干酪成 品出售之前，用濃度為10%的山梨酸鉀溶液浸泡或噴灑。三

17、是用含有一定量酒精的山梨酸溶液浸泡或者噴灑干酪。9、注意事項(xiàng)(1) 山梨酸只有透過細(xì)胞壁進(jìn)入微生物體內(nèi)才能起作用，分子態(tài)的抑菌活 性比離子態(tài)強(qiáng)。當(dāng)溶液pH小于4時(shí)，抑菌活性強(qiáng)，而pH大于6時(shí)，抑菌活性降 低。（2）山梨酸與過氧化氫溶液混合使用時(shí)，抗微生物活性會(huì)顯著增強(qiáng)。（3）山梨酸主要對(duì)霉菌、酵母和好氣性腐敗菌有效，而對(duì)厭氣性細(xì)菌 和乳酸菌幾乎無作用。山梨酸在微生物數(shù)量過高的情況下發(fā)揮不了作用，因 此它只適用于具有良好的衛(wèi)生條件和微生物數(shù)量較低的食品的防腐。（4） 山梨酸為酸型防腐劑，其作用受pH值影響。但它的酸性較苯甲酸 弱，適宜pH范圍較苯甲酸廣。配制山梨酸溶液時(shí)，可先將山梨酸溶解在乙 醇

18、、碳酸氫鈉或碳酸鈉的溶液中，隨后再加入食品中。溶解時(shí)不要使用銅、鐵容器。（5） 山梨酸為酸型防腐劑，其作用受pH值影響。但它的酸性較苯甲酸 弱，適宜pH范圍較苯甲酸廣。配制山梨酸溶液時(shí)，可先將山梨酸溶解在乙 醇、碳酸氫鈉或碳酸鈉的溶液中，隨后再加入食品中。溶解時(shí)不要使用銅、鐵容器。（6）山梨酸用于需要加熱的產(chǎn)品中，為防止山梨酸受熱揮發(fā)，應(yīng)在加 熱過程的后期添加。10、測(cè)定方法：（1）紫外分光光度法5-6紫外分光光度法為采用紫外分光光度計(jì)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法而實(shí)現(xiàn)食品中山 梨酸鉀含量的測(cè)定。山梨酸為共扼型有機(jī)化合物，在近紫外光區(qū)具有較強(qiáng)的吸收。并通過實(shí)測(cè)證實(shí)，山梨酸在263nm處具有最大吸收。另一方

19、面，山梨酸在水 中具有適當(dāng)?shù)娜芙舛?。山梨酸?20C時(shí)溶解度為0.21g/100mL水，在30C時(shí)為 0.25g/100mL水。因此可將標(biāo)樣和樣品處理成水溶液。采用紫外分光光度計(jì),通 過標(biāo)準(zhǔn)曲線法而實(shí)現(xiàn)山梨酸鉀含量的測(cè)定。該方法具有簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)。（2）氣相色譜法氣相色譜法是在以適當(dāng)?shù)墓潭ㄏ嘧龀傻闹軆?nèi)，利用氣體（載氣）作為移動(dòng)相，使試樣（氣體、液體或固體）在氣體狀態(tài)下展開，在色譜柱內(nèi)分離后，各種 成分先后進(jìn)入檢測(cè)器，用記錄儀記錄色譜譜圖。在對(duì)裝置進(jìn)行調(diào)試后，按各單體的規(guī)定條件調(diào)整柱管、檢測(cè)器、溫度和載氣流量。進(jìn)樣口溫度一般應(yīng)高于柱溫 3050C。色譜上分析成分的峰的位置，以滯留時(shí)間（從注入

20、試樣液到出現(xiàn)成分 最高峰的時(shí)間）和滯留容量（滯留時(shí)間X載氣流量）來表示。這些在一定條件下， 就能反應(yīng)出物質(zhì)所具有特殊值，并據(jù)此確定試樣成分。此方法分離效率高，分析 速度快，樣品用量少和檢測(cè)靈敏度高，選擇性好，應(yīng)用范圍廣，應(yīng)用的主要領(lǐng)域 有石油工業(yè)、環(huán)境保護(hù)、臨床化學(xué)、藥物學(xué)、食品工業(yè)。定量方法可分以下三種： 內(nèi)標(biāo)法：所謂內(nèi)標(biāo)法是將一定量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，加入到準(zhǔn)確稱量的試樣中，根據(jù)被測(cè)物和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量及在色譜圖上相應(yīng)的峰面積比，求出某組分的百分含量。當(dāng)只需測(cè)定試樣中某幾各組分時(shí)，而且試樣中所有組分不能全部出 峰時(shí)，可用此法。此法適合于微量物質(zhì)的分析。該法的計(jì)算公式如下：m s f si A

21、ix j % 二 一 100%m A s其中，fsi是被測(cè)組分相對(duì)于內(nèi)標(biāo)物的相對(duì)校正因子。該法的優(yōu)點(diǎn)是：受操作 條件的影響較小，定量結(jié)果較為準(zhǔn)確，使用上不象歸一化法那樣受到限制。 該法 的缺點(diǎn)是：每次分析必須準(zhǔn)確稱量被測(cè)物和內(nèi)標(biāo)物，不適合于快速分析。內(nèi)標(biāo)物的選擇十分重要。它應(yīng)該是試樣中不存在的物質(zhì)；加入的量應(yīng)接近于 被測(cè)組分色譜；同時(shí)要求內(nèi)標(biāo)物的色譜峰位于被測(cè)組分色譜附近或幾個(gè)被測(cè)組分 色譜峰的中間，并與這些組分完全分離；內(nèi)標(biāo)物必須不與樣品發(fā)生反應(yīng)等。 標(biāo)準(zhǔn)曲線法：取標(biāo)準(zhǔn)被測(cè)成分，按依次增加或減少階段法，各自調(diào)制成標(biāo)準(zhǔn)液，注入一定量后，按色譜圖取標(biāo)準(zhǔn)被測(cè)成分的峰面積或峰高為縱坐標(biāo)，而以標(biāo)準(zhǔn)被測(cè)

22、成分的含量為橫坐標(biāo)，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后按單體中所規(guī)定的方法制備 試樣液。取試樣液按制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)相同的條件作出色譜，求出被測(cè)成分的峰面積和峰高，再按標(biāo)準(zhǔn)曲線求出被測(cè)成分的含量。 歸一化法：當(dāng)試樣中各組分都能流出色譜柱且在檢測(cè)器上均有響應(yīng)，各組 分的相對(duì)校正因子已知時(shí)，可用此法定量。組分i在混合物中的百分含量可由下 式計(jì)算：fi Aix j% =- x 100 %i、fiAi其中fi可為質(zhì)量校正因子，也可為摩爾校正因子。若各組分的定量校正因 子相近或相同（如同系物中沸點(diǎn)接近的組分），則上式可簡(jiǎn)化為：Aix i % 二 一100 %i- Ai該法簡(jiǎn)稱為歸一化法。歸一化法的優(yōu)點(diǎn)是：簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，當(dāng)操作條

23、件如進(jìn)樣 量、流速變化時(shí)，對(duì)定量結(jié)果影響很小。缺點(diǎn)是：對(duì)該法的苛刻要求限制了該法 的使用。該法適合于常量物質(zhì)的定量。（3）高效液相色譜法HPLC高效液相色譜法是以液體為流動(dòng)相， 采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的 單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在 柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。高效液相 色譜法有“三高一廣一快”的特點(diǎn)： 高壓：流動(dòng)相為液體，流經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，為了能迅速通過 色譜柱，必須對(duì)載液加高壓。 高效：分離效能高。可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。 高靈敏度：

24、紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01 ng，進(jìn)樣量在uL數(shù)量級(jí)。 應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢(shì)。 分析速度快、載液流速快：較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個(gè) 樣品在1530分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時(shí)。此 外高效液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn)，但也有 缺點(diǎn)，與氣相色譜相比各有所長，相互補(bǔ)充。高效液相色譜的缺點(diǎn)是有“柱外效 應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測(cè)器之間，除了柱子以外的任何死空間（進(jìn)樣器、柱接頭、 連接管和檢測(cè)池等）中，如果流動(dòng)相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何

25、擴(kuò)散和滯 留都會(huì)顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬，柱效率降低。使高效液相色譜檢測(cè)器的靈敏度 不及氣相色譜。（4）薄層色譜法7-8薄層色譜，或稱薄層層析（thin layer chromatography），是以涂布于支持 板上的支持物作為固定相，以合適的溶劑為流動(dòng)相，對(duì)混合樣品進(jìn)行分離、鑒定 和定量的一種層析分離技術(shù)進(jìn)一步說，它就是利用各成分對(duì)同一吸附劑吸附能力 不同，使在移動(dòng)相（溶劑）流過固定相（吸附劑）的過程中，連續(xù)的產(chǎn)生吸附、 解吸附、再吸附、再解吸附，從而達(dá)到各成分的互相分離的目的。這是一種快速 分離諸如脂肪酸、類固醇、氨基酸、核苷酸、生物堿及其他多種物質(zhì)的特別有效 的層析方法，從50年代發(fā)展起

26、來至今，仍被廣泛采用。(5) 高效毛細(xì)管電泳(HPCE)高效毛細(xì)管電泳(HPCE)技術(shù)對(duì)具有電化學(xué)活性的物質(zhì)的分離檢測(cè)具有優(yōu)勢(shì) . 它是以彈性石英毛細(xì)管為分離通道， 以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，依據(jù)樣品中各組 分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的電泳分離分析方法。 他的優(yōu)點(diǎn)是高 靈敏度、高分辨率、高速度。當(dāng)然HPCE還是一種正在發(fā)展中的技術(shù)，有些理論研 究和實(shí)際應(yīng)用正在進(jìn)行與開發(fā)。二、實(shí)驗(yàn)部分1、實(shí)驗(yàn)原理采用雙氧水一硫酸溶液氧化山梨酸，之后進(jìn)一步與硫代巴比妥酸進(jìn)行顯色反 應(yīng)，采用分光光度法測(cè)定食品中山梨酸的含量。2、儀器與試劑 儀器722E型可見分光光度計(jì)水浴裝置25mL比色管容量瓶 試劑山梨

27、酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液(213.2mg/L):準(zhǔn)確稱取山梨酸0.2132g于100mL燒杯中, 用O.lmol/LNaOH溶解后，移入1000mL容量瓶中，用上述NaOH溶液稀釋，定容 至刻度，備用。山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(5.33mg/L):準(zhǔn)確吸取6.25mL 213.2mg/L山梨酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液 于250m容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度。5g/L硫代巴比妥酸溶液：稱取 0.50g硫代巴比妥酸溶于20mL蒸餾水中，加 1.0mol/L NaO溶液10mL使之完全溶解以后，加1.0mol/L HCI溶液1lmL,用蒸餾 水稀釋至100mL搖勻。0.1 % "02溶液：用量筒量取1.3mL密度為1.11

28、g/mL，質(zhì)量百分?jǐn)?shù)含量為30% 的HQ,移入加有100m水的燒杯中，轉(zhuǎn)移至250m試劑瓶中稀釋至250mL ,蓋上瓶塞搖勻0.15mol/L H 2Sd溶液：用量筒量取1.1mL密度為1.84g/mL，質(zhì)量百分?jǐn)?shù)含量為95.6%的濃硫酸，緩緩注入水中，冷卻后稀釋至 250mL貯存于試劑瓶中。0.1mol/L NaOH溶液：稱取1.0g固體氫氧化鈉于250m燒杯中，加入100m水 溶解后移入試劑瓶中，稀釋至250mL蓋上瓶塞，搖勻。1.0mol/L NaOH溶液：稱取10.0g固體氫氧化鈉于250m燒杯中，加入100mL 水溶解后移入試劑瓶中，稀釋至250mL蓋上瓶塞，搖勻。1.0mol/L

29、HCl溶液：用量筒量取20.0mL密度為1.19g/mL，質(zhì)量百分?jǐn)?shù)含量為 37%勺濃鹽酸，移入加有100ml水的燒杯中，轉(zhuǎn)移至250m試劑瓶中稀釋至250mL 蓋上瓶塞，搖勻。0.25mol/L NaHC0溶液：稱取5.25g固體NaHC0于250mL燒杯中，加入100mL 水溶解后移入試劑瓶中，稀釋至 250mL蓋上瓶塞，搖勻。所用試劑均為分析純?cè)噭?，所使用蒸餾水均為二次去離子水3、試驗(yàn)方法準(zhǔn)確吸取5.33mg/L山梨酸標(biāo)準(zhǔn)液4.00mL于25m比色管中，加入0.1%H02溶液 1.0mL和0.15mol/L HSO 1.2mL,搖勻后至60C水浴中加熱40min,冷水流冷卻后 加5g/L

30、硫代巴比妥酸溶液4.0mL，搖勻，置沸水浴中加熱20min，冷卻后用蒸餾水 稀釋至刻度，以試劑空白作參比，采用1cm比色皿，于530nn波長處測(cè)定溶液的吸 光度。三、方法研究1、吸收光譜和測(cè)量波長的選擇取4.00mL 5.33mg/L山梨酸標(biāo)準(zhǔn)液，按實(shí)驗(yàn)步驟方法用試劑空白作參比，采 用lcm比色皿，在500560nm波長范圍內(nèi)每隔10nm波長測(cè)定一次溶液的吸光度， 在最大吸收峰附近每隔2nm波長測(cè)定一次溶液的吸光度，不同波長對(duì)應(yīng)的吸光度 曲線。表1不同波長下的吸光度波長500510520522524526528530/nmA0.1700.1850.2060.2310.2630.2950.313

31、0.321續(xù)表1波長/nm532534536538540550560570A0.3160.3040.2950.2830.2710.1570.0840.033由上表數(shù)據(jù)繪制以波長（nm為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)作吸收曲線 如圖1。圖1吸收曲線測(cè)定結(jié)果表明，最大吸光度對(duì)應(yīng)的吸收波長為 530nm故選此波長為測(cè)定條 件波長。2、氧化反應(yīng)溫度在不同的氧化反應(yīng)溫度時(shí)，氧化反應(yīng)進(jìn)行的程度是不同的，因此測(cè)定體系吸 光度也是不同的。按試驗(yàn)方法，改變氧化反應(yīng)溫度，在 1080C水浴中（溫度間 隔10C）加熱20min。數(shù)據(jù)見表2。表2氧化反應(yīng)溫度對(duì)吸光度的影響溫度/ C01020304050607080A0

32、0.0680.1360.2010.2630.3090.3160.3120.258由上表數(shù)據(jù)繪制以溫度C）為橫坐標(biāo)，吸光度（ A）為縱坐標(biāo)作工作曲線如圖2。溫度(t)氣化反應(yīng)溫度影響曲線圖2氧化反應(yīng)溫度影響曲線測(cè)定結(jié)果表明，在5070C溫度范圍內(nèi)，反應(yīng)體系具有較大吸光度且穩(wěn)定， 選擇氧化反應(yīng)溫度為60C。氧化反應(yīng)溫度高于70T時(shí)，由于丙二醛被進(jìn)一步氧化 生成酸，導(dǎo)致體系吸光度下降。3、顯色酸度顯色反應(yīng)的酸度條件同樣直接影響顯色反應(yīng)程度。在反應(yīng)體系中加入0. 15mol/L HSO溶液分別為0.02.0mL的用量(用量間隔0.2mL)條件下，按試驗(yàn)方法測(cè)定不同酸度對(duì)吸光度的影響。表3顯色酸度對(duì)吸光

33、度的影響HSQ用量/mL0.20.40.60.8A00.0620.1310.2030.284續(xù)表2用量/mL1.01.21.41.61.82.0由上表數(shù)據(jù)繪制以0.15mol/L H 2S0用量（mL）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)作工作曲線如圖3mol/L圖3顯色酸度對(duì)吸光度的影響曲線測(cè)定結(jié)果表明，在0.15mol/LH2SQ溶液用量為1.21.6mL范圍內(nèi)，體系的吸 光度較大且穩(wěn)定，故采用0.15mol/L H 2Sd溶液用量為1.4mL。4、顯色劑用量顯色劑硫代巴比妥酸的用量對(duì)測(cè)定體系吸光度的影響顯著。在體系中分別加入05.0mL 5g/L硫代巴比妥酸溶液（用量間隔0.5mL），按試驗(yàn)方

34、法測(cè)定溶液的吸 光度。表4顯色劑用量對(duì)吸光度的影響顯色劑/mL01.02.03.04.05.0A0.000.1890.2830.3090.3190.315由上表數(shù)據(jù)繪制以顯色劑用量（mL）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)作工作曲線如圖4圖4顯色劑用量對(duì)吸光度的影響曲線結(jié)果表明，當(dāng)顯色劑硫代巴比妥酸的用量在 3.5mL以上時(shí)，測(cè)定體系的吸光 度較大且保持穩(wěn)定，實(shí)際測(cè)定時(shí)選用顯色劑硫代巴比妥酸的用量為4.0mL。5、工作曲線分別取不同量（07mL）的5.33mg/L山梨酸標(biāo)準(zhǔn)液于25m比色管中，以下試 驗(yàn)方法操作，繪制工作曲線如圖5所示。表5工作曲線表濃度1.21.4/ 用/mL0.00.20.40

35、.60.81.0A00.0830.1560.2250.3030.3770.4510.523由上表數(shù)據(jù)繪制以濃度（卩g/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)作工作曲線曲線如圖5工作曲線表圖5工作曲線結(jié)果表明在線性范圍內(nèi)吸光度與山梨酸濃度（舊/mL）間的關(guān)系為：2A=0.3715c+0.0047 , R =0.9998。四、樣品測(cè)定1、樣品溶液的制備和測(cè)定方法精確稱取3.9100g已磨細(xì)的樣品溶入50m水中，轉(zhuǎn)入100m容量瓶中用蒸餾水 定容、搖勻。移取10m此溶液于250m分液漏斗中，滴加0.15mol/L H 2S0溶液調(diào) 整pH至2.0，加入l00mL氯仿振蕩提取山梨酸10min。靜置后將大部分氯仿有機(jī)相 轉(zhuǎn)移至碘量瓶中，加入5.0g無水NqSO振蕩后靜置。移取上述氯仿溶液50m!轉(zhuǎn)移 至盛有25ml0.25mol/L NaHC03溶液的100m分液漏斗中，振蕩提取山梨酸鈉 5min 后，靜置分層，小心分離棄去氯仿層，得25mL羊品水溶液待測(cè)定；以不加樣品的 空