檢驗(yàn)員培訓(xùn)教程系列

1、第三部分儀器分析法第一章紫外分光光度法一、原理可見光、紫外線照射某些物質(zhì)，主要是由于物質(zhì)分子中價(jià)電子能級(jí)躍遷對(duì)輻射的吸收，而產(chǎn)生化合物的可見紫 外吸收光譜?；谖镔|(zhì)對(duì)光的選擇性吸收的特性而建立分光光度法或稱吸收光譜法的分析方法。它是以朗伯比 耳定律為基礎(chǔ)。1朗伯一比耳定律 A = lg - = ECL T式中A為吸收度；T為透光率；E為吸收系數(shù)，采用的表示方法是（E；）,其物理意義為當(dāng)溶液濃度為1%（g/ml）,液層厚度為1cm時(shí)的吸收度數(shù)值；C為100ml溶液中所含被測(cè)物質(zhì)的重量（按干燥品或無(wú)水物計(jì)算） ，g；L為液層厚度，cmo二、使用范圍凡具有芳香環(huán)或共軻雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物，根據(jù)在特定

2、吸收波長(zhǎng)處所測(cè)得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純 度檢查及含量測(cè)定。三、儀器可見-紫外分光光度計(jì)。其應(yīng)用波長(zhǎng)范圍為 200400nm的紫外光區(qū)、400850nm的可見光區(qū)。主要由輻射源（光 源）、色散系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、吸收池、數(shù)據(jù)處理機(jī)、自動(dòng)記錄器及顯示器等部件組成。本儀器是根據(jù)相對(duì)測(cè)量的原理工作的，即先選定某一溶劑（或空氣、試樣）作為標(biāo)準(zhǔn)（空白或稱參比）溶液，并認(rèn)為它的透光率為 100% （或吸收度為0）,而被測(cè)的試樣透光率（或吸收度）是相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)溶液而言，實(shí)際上就 是由出射狹縫射出的單色光，分別通過(guò)被測(cè)試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液，這兩個(gè)光能量之比值，就是在一定波長(zhǎng)下對(duì)于被測(cè)試 樣的透光率（或吸收度）。本儀

3、器可精密測(cè)定具有芳香環(huán)或共軻雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物、有色物質(zhì)或在適當(dāng)條件下能與某些試劑作用生成有色物的物質(zhì)。使用前應(yīng)校正測(cè)定波長(zhǎng)并按儀器說(shuō)明書進(jìn)行操作。四、儀器的校正1 .波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度試驗(yàn)以儀器顯示的波長(zhǎng)數(shù)值與單色光的實(shí)際波長(zhǎng)值之間誤差表示，應(yīng)在土1.0nm范圍內(nèi)。可用儀器中笊燈的 486.02nm與656.10nm譜線進(jìn)行校正。2 .吸收度的準(zhǔn)確度試驗(yàn)3 .雜散光的試驗(yàn)4 .波長(zhǎng)重現(xiàn)性試驗(yàn)5 . 分辨率試驗(yàn)五、測(cè)定方法1 .對(duì)照品比較法（1）按各品種項(xiàng)下的方法，分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分標(biāo)示量的100± 10%所用溶劑也應(yīng)完全

4、一致， 在規(guī)定的波長(zhǎng)測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸收度后，按下式計(jì)算含量，即得。(2)計(jì)算式A樣x G對(duì)/稀釋倍數(shù)x 100X 1含量( = - X 100%A對(duì)x G樣/稀釋倍數(shù)x 100X 12 .吸收系數(shù)法(1)按各品種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收 系數(shù)計(jì)算含量。用本法測(cè)定時(shí)，應(yīng)注意儀器的校正和檢定。(2)計(jì)算式A樣含量(%) = - X 100%G木豐/稀釋倍數(shù)x (E；)對(duì)x 100X13 .計(jì)算分光光度法采用計(jì)算分光光度法應(yīng)慎重。本法有多種，使用時(shí)均應(yīng)按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸收度處在吸收曲線 的陡然上升或下降的部位測(cè)定時(shí)

5、，波長(zhǎng)的微小變化可能對(duì)測(cè)定結(jié)果造成顯著影響，故對(duì)照品和供試品測(cè)試條件應(yīng)盡 可能一致。若測(cè)定時(shí)不用對(duì)照品，如維生素 A測(cè)定法，則應(yīng)在測(cè)定時(shí)對(duì)儀器作仔細(xì)的校正和檢定。六、注意事項(xiàng)1 .空白溶液與供試品溶液必須澄清，不得有渾濁。如有渾濁，應(yīng)預(yù)先過(guò)濾，并棄去初濾液。2 .測(cè)定時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同瓶溶劑為空白對(duì)照，采用1cm的石英吸收池。3 .在規(guī)定的吸收峰波長(zhǎng)土 2nm以內(nèi)測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸收度，以核對(duì)供試品的吸收峰波長(zhǎng)位置是否正確，除另有規(guī) 定外，吸收峰波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)土2nm以內(nèi)；否則應(yīng)考慮該試樣的真?zhèn)巍⒓兌纫约皟x器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度,并以吸收度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。4 .

6、 一般供試品溶液的吸收度讀數(shù)，以在 0.30.7之間的誤差較小。5 .吸收池應(yīng)選擇配對(duì)，否則要引入測(cè)定誤差。在規(guī)定波長(zhǎng)下兩個(gè)吸收池的透光率相差小于0.5 %的吸收池作配對(duì)，在必要的情況時(shí)，須在最終測(cè)量扣除吸收池間的誤差修正值。6 .由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測(cè)定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計(jì)算含量。7 .儀器的接地必須良好，一切裸露的零件對(duì)地電位不得超過(guò)24伏(測(cè)電筆的就管不得發(fā)亮)。8 .在使用過(guò)程中，如需開啟試樣室蓋時(shí)或暫時(shí)停止測(cè)試時(shí)，必須及時(shí)推入光門鈕桿(使光電管前光門關(guān)閉)，保護(hù)光電管，以防止光電管受強(qiáng)光或長(zhǎng)時(shí)間照射而損壞。9 .在測(cè)定時(shí)或改測(cè)其它檢品時(shí)，應(yīng)用待測(cè)溶

7、液沖洗吸收池34次，用干凈綢布或擦鏡紙擦凈吸收池的透光面至不留斑痕(切忌把透光面磨損)。10 .取吸收池時(shí)，應(yīng)拿毛玻璃兩面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油污。使用完后及時(shí)用測(cè)定溶劑沖凈，再用純化水沖凈，用干凈綢布或擦鏡紙擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防塵保存。11 .若吸收池內(nèi)外壁沾污，兩池差較大的處理。(1)可用綢布纏在扁竹條外或用脫脂棉纏在細(xì)玻璃棒上蘸上乙醇，輕輕摩擦，再用純化水沖凈。(2)如上述方法處理不好，必要時(shí)可用重銘酸鉀-硫酸洗液泡洗12分鐘，用自來(lái)水沖凈，再用純化水沖凈。(3)不得用毛刷刷洗或硬物拭擦，以防止表面光潔度受損影響正常使用。12 .請(qǐng)務(wù)必注意經(jīng)常保持硅膠的干燥，目的是

8、保護(hù)光學(xué)元件和光電放大器系統(tǒng)不致受潮損壞而影響儀器的正常 工作，如發(fā)現(xiàn)有的硅膠由藍(lán)色變?yōu)榉奂t色，應(yīng)立即更換。該儀器干燥劑筒有兩個(gè)：一個(gè)是裝在放大器暗盒上，另一個(gè)裝在單色光器暗盒上。13 .在更換硅膠干燥劑時(shí)，應(yīng)關(guān)閉切斷電源。14 .在停止工作期間，主機(jī)試樣室內(nèi)應(yīng)放入袋裝或筒裝硅膠干燥劑。用防塵罩罩住整個(gè)儀器，并在防塵罩內(nèi)放 數(shù)袋防潮硅膠。15 .儀器在操作中，狹縫的寬度應(yīng)從小逐漸開大。若狹縫過(guò)大，由于進(jìn)入光電管的光能量強(qiáng)度過(guò)大，將會(huì)使放 大器輸出信號(hào)達(dá)到飽和，以至數(shù)字顯示出溢出（即數(shù)字閃爍或示1不變）。這不是儀器有故障。16 .將波長(zhǎng)旋轉(zhuǎn)放在 625nm,鐵縫關(guān)閉在0.02nm附近，選擇按鍵恢

9、復(fù)在停止工作部位（即三個(gè)鍵均彈出）17 .搬動(dòng)儀器時(shí)應(yīng)搬在主體端，不要搬在試樣室和光電管盒端以及光源燈室部位，以防止儀器狹縫或光路部件 受力而發(fā)生變形。并在搬動(dòng)或運(yùn)輸時(shí)，應(yīng)將可動(dòng)部分固定，如各旋鈕可用膠布貼住，狹縫位置開大些，然后固定， 不要關(guān)小狹縫，以免運(yùn)輸時(shí)振動(dòng)使狹縫刀口受損壞。18 .儀器的光柵、反射鏡絕對(duì)不能擦拭，否則將損壞儀器光學(xué)表面，增加雜散光。19 .儀器經(jīng)過(guò)搬動(dòng)請(qǐng)及時(shí)檢查并糾正波長(zhǎng)精度，為保證測(cè)定的準(zhǔn)確性請(qǐng)經(jīng)常校準(zhǔn)波長(zhǎng)精度。如有異常，應(yīng)立即 報(bào)告質(zhì)量保證部，但不得擅自調(diào)整，并及時(shí)做好記錄。七、結(jié)果計(jì)算AE；: （供試品）=CLE：m （供試品）含量（% = X 100%E;（標(biāo)

10、準(zhǔn)值或?qū)φ掌罚┌?、允許差儀器分析方法的誤差限度，除另有規(guī)定外，其相對(duì)偏差應(yīng)在土 （2.03.0）%。第二章比色法一、原理及適用范圍在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收，但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使 其顯色后，根據(jù)顏色深淺與濃度成正比關(guān)系，則可用比色法測(cè)定含量。二、儀器可見分光光度計(jì)（或比色計(jì)）其應(yīng)用波長(zhǎng)范圍為 400850nm的可見光區(qū)。主要由輻射源（光源）、色散系統(tǒng)（或 濾光片）、檢測(cè)器系統(tǒng)、顯示系統(tǒng)、記錄器及吸收池等部件組成。使用前應(yīng)校正測(cè)定波長(zhǎng)并按儀器說(shuō)明書進(jìn)行操作。三、儀器的校正按照紫外分光光度法項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定及按儀器說(shuō)明書要求進(jìn)行校正。波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度應(yīng)在&

11、#177;3nm范圍內(nèi)。四、測(cè)定方法1 .用比色法測(cè)定時(shí)，應(yīng)取對(duì)照品同時(shí)操作。除另有規(guī)定外，比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替對(duì)照品 或供試品溶液，然后依次加入等量的相應(yīng)試劑，并用同樣方法處理。在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定對(duì)照品和供試品溶液的吸 收度后，按紫外分光光度法項(xiàng)下“對(duì)照品比較法”的計(jì)算式計(jì)算含量。2 .當(dāng)吸收度和濃度關(guān)系不呈線性時(shí)，應(yīng)取數(shù)份梯度量的對(duì)照品溶液，用溶劑補(bǔ)充至同一體積，顯色后測(cè)定各份 溶液的吸收度，然后以吸收度與相應(yīng)的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)供試品的吸收度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出其含量。、注意事項(xiàng)測(cè)定時(shí)，應(yīng)取對(duì)照品平行操作，使所用試劑用量、反應(yīng)溫度、酸堿度、反應(yīng)時(shí)間等完全一致，對(duì)隨時(shí)間

12、變化影 響顯色的品種應(yīng)準(zhǔn)確控制讀數(shù)時(shí)間，操作時(shí)應(yīng)注意避光。第三章高效液相色譜法一、原理高效液相色譜法是用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相，壓入裝 有固定相的色譜柱，經(jīng)進(jìn)樣閥注入供試品，由流動(dòng)相帶入柱內(nèi)，在柱內(nèi)各成分被分離后，依次進(jìn)入檢測(cè)器，色譜信 號(hào)由記錄儀或積分儀記錄。二、適用范圍高效液相色譜法是一種分離分析方法，適用于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物以及離子型化 合物等的定性、定量分析。中國(guó)藥典主要用于藥品的含量測(cè)定、有關(guān)物質(zhì)檢查、雜質(zhì)限度檢查和鑒別等。三、儀器高效液相色譜儀主要由輸液泵系統(tǒng)、進(jìn)樣器系統(tǒng)、色譜柱、檢測(cè)器、記錄器、顯示器及數(shù)據(jù)

13、處理機(jī)（或兼有組 分收集系統(tǒng)）等組成。使用時(shí)應(yīng)按儀器的說(shuō)明書進(jìn)行操作。四、儀器的校正1 .高效液相色譜儀的柱箱控溫精度、基線噪聲、基線漂移、靈敏度或檢測(cè)限、線性范圍的檢定均按儀器說(shuō)明書 的技術(shù)要求進(jìn)行校驗(yàn)，應(yīng)符合規(guī)定。2 .以紫外-可見光檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、差示折光檢測(cè)器為檢測(cè)器的實(shí)驗(yàn)室通用液相色譜儀的檢定，所用各種 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)使用經(jīng)國(guó)家技術(shù)監(jiān)督部門批準(zhǔn)頒發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。具體校正方法和主要技術(shù)指標(biāo)見“高效液相色譜儀檢測(cè) 器的校驗(yàn)”。3 . 泵的耐壓試驗(yàn)4 .泵流量設(shè)定值誤差、流量穩(wěn)定性誤差的試驗(yàn)5 .柱恒溫箱溫度設(shè)定值誤差和控溫穩(wěn)定性誤差的試驗(yàn)6 .梯度準(zhǔn)確度的試驗(yàn)7 . 定性定量重現(xiàn)性的試驗(yàn)五

14、、對(duì)儀器的一般要求1 .色譜柱的填充劑和流動(dòng)相的組分應(yīng)按各品種項(xiàng)下的規(guī)定。常用的色譜柱填充劑有硅膠（正相色譜）和化學(xué)鍵 合硅膠，后者以十八烷基硅烷鍵合硅膠（反相色譜）最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠次之，鼠基或氨基鍵合硅膠也有 使用。離子交換填充劑用于離子交換色譜；凝膠或玻璃微球等填充劑用于分子排阻色譜等。除另有規(guī)定外，柱溫為 室溫，檢測(cè)器為紫外吸收檢測(cè)器。2 .藥典正文中各品種項(xiàng)下規(guī)定的條件除固定相種類、流動(dòng)相組分、檢測(cè)器類型不得任意改變外，其余如色譜柱 內(nèi)徑、長(zhǎng)度、固定相牌號(hào)、載體粒度、流動(dòng)相流速、混合流動(dòng)相各組分的比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器的靈敏度等, 均可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體品種并達(dá)到系統(tǒng)適

15、用性試驗(yàn)的要求。3 . 一般色譜圖約于20分鐘內(nèi)記錄完畢。六、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)按各品種項(xiàng)下要求對(duì)儀器進(jìn)行適用性試驗(yàn)，即用規(guī)定的對(duì)照品對(duì)儀器進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整，應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求，或 規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子。1 .色譜柱的理論板數(shù)（n）.2n = 5.54（tr/Wv2）2式中t R為保留時(shí)間（以分鐘或長(zhǎng)度計(jì)，下同，但應(yīng)取相同單位）；W h/2為半峰高寬。2 .分離度（R）除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5。2（tR2一 t R1）R ="W1 + W2式中t R2為相鄰兩峰中后一峰的保留時(shí)間；tR1為相鄰兩峰中前一峰的保留時(shí)間；W i及W2為此相鄰兩峰的峰

16、寬。3 . 重復(fù)性取各品種項(xiàng)下的對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣 5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。也可按各品種校正因子測(cè)定項(xiàng)下，配制相當(dāng)于 80% 100崎口 120%勺對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成 3種不 同濃度的溶液，分別進(jìn)樣 3次，計(jì)算平均校正因子，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差也應(yīng)不大于2.0%。4 . 拖尾因子（T）除另有規(guī)定外，T應(yīng)在0.951.05之間。W 0.05hT -2d 1式中W0.05h為0.05峰高處的峰寬；d1為峰極大至峰前沿之間的距離。七、測(cè)定法定量測(cè)定時(shí)，可根據(jù)供試品的具體情況采用峰面積法或峰高法。測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí)，須采用峰面積法。（一）內(nèi)標(biāo)法加校正

17、因子測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量1 .按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子 測(cè)定用的對(duì)照溶液。取一定量注入液相色譜儀，記錄色譜圖。測(cè)量對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算 校正因子：As/Cs校正因子（f ）=Ar/Cr式中A s為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；A R為對(duì)照品的峰面積或峰高；C S為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；C r為對(duì)照品的濃度。再取各品種項(xiàng)下含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)量供試品中待測(cè)成分（或其雜 質(zhì)）和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算含量：Ax含量（3 = f"As/CsCXX稀釋倍數(shù)

18、含量（%） = X100%GxX （1干燥失重）式中Ax為供試品（或其雜質(zhì)）的峰面積或峰高;G x為供試品的稱樣量。則配制內(nèi)標(biāo)物質(zhì)當(dāng)配制校正因子測(cè)定用的對(duì)照溶液和含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液使用同一份內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液時(shí), 溶液不必精密稱（量）取。2 .內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的選擇（1）內(nèi)標(biāo)物質(zhì)應(yīng)是樣品中不含有的組分，否則會(huì)使峰重疊而無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量?jī)?nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積。（2）內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的保留時(shí)間應(yīng)與待測(cè)成分相近，并達(dá)到完全分離，分離度R> 1.5。（3）內(nèi)標(biāo)物質(zhì)必須是純度符合要求的化合物，若非純品無(wú)干擾峰也可采用。已知含量的較純物質(zhì)也可用，但 需扣除內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的重量。（二）外標(biāo)法 測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量1.按各

19、品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取對(duì)照品和供試品, 記錄色譜圖，測(cè)量對(duì)照品和供試品待測(cè)成分的峰面積（或峰高）Ax配制成溶液，分別精密取一定量， 注入液相色譜儀, ,按下式計(jì)算含量：含量（O） = OrACXX稀釋倍數(shù)含量（ = X100%GxX （1干燥失重）3 .由于微量注射器不易精確控制進(jìn)樣量，當(dāng)采用外標(biāo)法測(cè)定供試品中某雜質(zhì)或主成分含量時(shí)，以定量環(huán)進(jìn)樣為好。（三）加校正因子的主成分自身對(duì)照法（四）不加校正因子的主成分自身對(duì)照法（五）面積歸一化法由于峰面積歸一化法測(cè)定誤差大，因此，本法通常只能用于粗略考察供試品中的雜質(zhì)含量。除另有規(guī)定外，一 般不宜用于微量雜質(zhì)的檢查。方法是測(cè)量各雜質(zhì)峰的面積和色

20、譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積，計(jì)算各峰面積 占總峰面積的百分率，即得。八、注意事項(xiàng)1 . 雖然泵能耐壓 6000PSI的壓力，但不要使泵處于4000PSI以上的壓力為宜。2 .安裝及拆卸色譜柱時(shí)應(yīng)注意柱的連接方向，千萬(wàn)不能接反。否則可能導(dǎo)致柱效降低，甚至損壞色譜柱。3 .嚴(yán)禁開空泵。在無(wú)流動(dòng)相通過(guò)時(shí)不要扳動(dòng)進(jìn)樣閥的操作桿，使用時(shí)要注意盡可能少扳動(dòng)，以免磨損內(nèi)部的密 封墊圈。4 .為了延長(zhǎng)檢測(cè)器燈源的使用壽命，在色譜泵穩(wěn)定后再打開檢測(cè)器電源開關(guān)，分析結(jié)束后立即關(guān)閉檢測(cè)器。5 .應(yīng)使用高純度、高質(zhì)量的溶劑和試劑。6 .避免pH值超PpH值應(yīng)控制在2.27.5之間。pH值偏低或偏高都會(huì)腐蝕液相系

21、統(tǒng)的不銹鋼材料；破壞色 譜柱填料的結(jié)構(gòu)，使填料失活。7 .色譜柱溫不能超過(guò)規(guī)定要求，柱溫過(guò)高會(huì)加速色譜柱填料老化，破壞其結(jié)構(gòu)。8 .使用所有溶劑必須是互溶的。這對(duì)于緩沖流動(dòng)相來(lái)說(shuō)是非常重要的，鹽類的析出會(huì)很快損壞要維護(hù)的部件。9 .流動(dòng)相首選甲醇-水系統(tǒng)，如經(jīng)試用不適合時(shí)，再選用其他溶劑。為保護(hù)儀器，應(yīng)盡可能少用含有緩沖液的 流動(dòng)相。如果流動(dòng)相中含有緩沖劑，每日使用后應(yīng)用不含緩沖劑的流動(dòng)相或新鮮純化水將儀器管路、泵、進(jìn)樣閥、色譜柱及檢測(cè)池等充分沖洗干凈。10 .如果液相系統(tǒng)使用未過(guò)濾的洗脫液、注入未過(guò)濾的樣品、系統(tǒng)中滯留緩沖洗脫液都能堵塞系統(tǒng)或劃傷泵柱塞。所以流動(dòng)相、樣品使用前必須用0.45

22、m微孔濾膜過(guò)濾；流動(dòng)相并先經(jīng)脫氣處理后使用。停泵后決不允許緩沖洗脫液滯留在系統(tǒng)中，須用經(jīng)過(guò)濾后的新鮮純化水進(jìn)行清洗，并保證將緩沖劑沖洗干凈。11 .如果泵閉置在2天以上，應(yīng)將甲醇注滿液相系統(tǒng)，以避免水溶劑系統(tǒng)中可能存在微生物的繁殖。12 .色譜柱保存時(shí)應(yīng)使填充劑處在潤(rùn)濕狀態(tài)，兩端密塞。反相柱（如十八烷基硅烷鍵合硅膠柱）可在甲醇中保 存；正相柱（如硅膠柱）可在正己烷中保存等。13 .決不能使用鹽酸溶液。一般來(lái)說(shuō)，任何濃度的鹵化物都會(huì)腐蝕未經(jīng)鈍化的不銹鋼材料。14 .盡量避免使用在電化學(xué)過(guò)程中引起腐蝕的金屬離子。應(yīng)避免的典型金屬離子有鎰、銘、鋅、銅、饃、鋁、 鐵。九、允許差含量測(cè)定的精度，除另有規(guī)

23、定外，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。第四章氣相色譜法一、原理氣相色譜法的流動(dòng)相為氣體，稱為載氣；色譜柱分為填充柱和毛細(xì)管柱兩種。填充柱內(nèi)裝吸附劑、高分子多孔 小球或涂漬固定液的載體；毛細(xì)管柱內(nèi)壁涂漬或交聯(lián)固定液。注入進(jìn)樣口的供試品被加熱氣化，并被載氣帶入色譜 柱，在柱內(nèi)各成分被分離后先后進(jìn)入檢測(cè)器，色譜信號(hào)用記錄儀或數(shù)據(jù)處理器記錄。二、適用范圍氣相色譜法是一種分離分析方法，適用于含揮發(fā)性或經(jīng)裂解、衍生化等能氣化的藥品及多組分混合物的定性、 定量分析。中國(guó)藥典主要用于原料藥中殘留溶劑、揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查，制劑中含有乙醇量的測(cè)定以及具有一定揮發(fā) 性原料藥及其制劑的含量測(cè)定。三、儀器氣相色譜儀主要由

24、氣路系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、色譜柱、檢測(cè)器、記錄器、顯示器及數(shù)據(jù)處理機(jī)（或兼有組分收集系 統(tǒng)）等組成。使用時(shí)應(yīng)按儀器的說(shuō)明書進(jìn)行操作。四、對(duì)儀器的一般要求1 .除另有規(guī)定外，載氣為氮?dú)?；色譜柱為填充柱或毛細(xì)管柱，填充柱的材質(zhì)為不銹鋼或玻璃，載體用直徑為 0.250.18mm 0.180.15mm或0.150.125mm經(jīng)酸洗并硅烷化處理的硅藻土或高分子多孔小球；常用玻璃或彈性石英毛細(xì)管柱的內(nèi)徑為 0.20mm或0.32mm=進(jìn)樣口溫度應(yīng)高于柱溫 3050C；進(jìn)樣量一般不超過(guò)數(shù)微升；柱徑越細(xì) 進(jìn)樣量應(yīng)越少。檢測(cè)器為氫火焰離子化檢測(cè)器，檢測(cè)溫度一般高于柱溫，并不得低于100 C,以免水氣凝結(jié)，通常為 25

25、0 350 C。2 .藥典正文中各品種項(xiàng)下規(guī)定的條件，除檢測(cè)器種類、固定液品種及特殊指定的色譜柱材料不得任意改變外， 其余如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、載體牌號(hào)、粒度、固定液涂布濃度、載氣流速、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器的靈敏度等，均 可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體品種并符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。一般色譜圖約于30分鐘內(nèi)記錄完畢。五、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)同高效液相色譜法項(xiàng)下規(guī)定。六、測(cè)定法1 .同高效液相色譜法項(xiàng)下規(guī)定。用氣相色譜法進(jìn)行定量分析時(shí)，應(yīng)盡量采用內(nèi)標(biāo)法為宜。同時(shí)也要注意進(jìn)樣技術(shù)的熟練，因內(nèi)標(biāo)物質(zhì)與供試品成分的蒸氣壓不同，則蒸氣壓高的進(jìn)樣量也會(huì)較多。故選擇測(cè)定用內(nèi)標(biāo)物質(zhì)時(shí)，除應(yīng)考慮內(nèi)標(biāo)峰的保留時(shí)間應(yīng)與被測(cè)成分相近

26、，無(wú)雜質(zhì)峰重疊，尚要考慮其蒸氣壓是否近似。2 .氣相色譜法手工進(jìn)樣量不易精確控制，特別應(yīng)注意留針時(shí)間和室溫的影響。七、允許差含量測(cè)定的精度，除另有規(guī)定外，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。第五章旋光度測(cè)定法一、定義偏振光透過(guò)長(zhǎng)1dm并每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液，在一定波長(zhǎng)與溫度下測(cè)得的旋光度稱為比旋度。測(cè) 定比旋度（或旋光度）可以區(qū)別或檢查某些藥品的純雜程度，亦可用以測(cè)定含量。二、原理當(dāng)一單色光（鈉光譜的 D線即589.3nm）通過(guò)起偏鏡產(chǎn)生直線偏振光向前進(jìn)行，當(dāng)通過(guò)裝有含有某些光學(xué)活性 （即旋光性）的化合物液體的測(cè)定管時(shí)，偏振光的平面（偏振面）就會(huì)向左或向右旋轉(zhuǎn)一定的角度，即該旋光性物

27、 質(zhì)的旋光度。其值可以從自動(dòng)示數(shù)盤上直接讀出。偏振光透過(guò)長(zhǎng)1dm并每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液，在一定波長(zhǎng)與溫度下測(cè)得的旋光度稱為比旋度。a對(duì)液體供試品a ； = - ld100a對(duì)固體供試品 a ；=lc式中a ；為比旋度；D 為鈉光譜的D線；t為測(cè)定時(shí)的溫度；l為測(cè)定管長(zhǎng)度，dm;a為測(cè)得的旋光度；d為液體的相對(duì)密度；c 為每100ml溶液中含有被測(cè)物質(zhì)的重量，g （按干燥品或無(wú)水物計(jì)算）。三、測(cè)定方法1 .打開穩(wěn)壓電源開關(guān)，稍等片刻，俟電壓表指針?lè)€(wěn)定地指示在220V處。2 .打開旋光儀電源開關(guān)，經(jīng) 5分鐘鈉光燈發(fā)光穩(wěn)定后再工作。3 .扳上直流開關(guān)，若直流開關(guān)扳上后，燈熄滅，則再將直

28、流開關(guān)上下重復(fù)扳動(dòng)1到2次，使鈉燈在直流下點(diǎn)亮為正常。4 .將測(cè)定管用供試品所用的溶劑沖洗34遍，緩緩注入適量溶劑。5 .測(cè)定管中若有氣泡，應(yīng)先將氣泡浮在凸頸處，通光面兩端的霧狀液滴，應(yīng)用擦鏡紙揩干。6 .測(cè)定管螺帽不宜旋得過(guò)緊，以免產(chǎn)生應(yīng)力，影響讀數(shù)。7 .將測(cè)定管放入樣品室，測(cè)定管安放時(shí)，應(yīng)注意標(biāo)記的位置和方向，蓋上箱蓋。8 .打開示數(shù)，調(diào)節(jié)零位手輪，使旋光示值為零。9 .取出測(cè)定管，將空白溶液倒出，用供試品溶液沖洗34遍，將供試品溶液緩緩注入測(cè)定管，用擦鏡紙擦凈測(cè)定管，特別要擦凈兩端的通光面，按相同的位置和方向正確地放入樣品室內(nèi)，蓋好箱蓋。10 .示數(shù)盤將轉(zhuǎn)出該樣品的旋光度。示數(shù)盤上紅色

29、示值為左旋（），黑色示值為右旋（+ ）。11 .逐次按下復(fù)測(cè)按鈕，重復(fù)讀取旋光度3次，取3次的平均值作為測(cè)定結(jié)果。12 .如果樣品超過(guò)測(cè)量范圍，儀器在土45處自動(dòng)停止，此時(shí)取出測(cè)定管，按一下復(fù)測(cè)按鈕開關(guān)，儀器即轉(zhuǎn)回零位。13 .鈉燈在直流供電系統(tǒng)出現(xiàn)故障不能使用時(shí)，儀器也可在鈉燈交流供電的情況下測(cè)試。但儀器的性能可能略有降低。14 .測(cè)定完畢后，取出測(cè)定管，將測(cè)定管用純化水洗凈。應(yīng)晾干，防塵保存。15 .關(guān)閉“示數(shù)”開關(guān)，示數(shù)盤復(fù)原。16 .關(guān)閉“直流”及“電源”開關(guān)。17 .關(guān)閉穩(wěn)壓電源開關(guān)，關(guān)閉總電源開關(guān)。18 .罩好防塵罩，填寫操作記錄。四、注意事項(xiàng)1 .中國(guó)藥典2000年版二部規(guī)定，用

30、鈉光譜的 D線（ 589.3nm）測(cè)定旋光度，除另有規(guī)定外，測(cè)定管長(zhǎng)度為1dm（如使用其他管長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行換算），測(cè)定溫度為20Co2 .配制溶液及測(cè)定時(shí)，均應(yīng)調(diào)節(jié)溫度至20 ± 0.5 C （或各藥品項(xiàng)下規(guī)定的溫度）。3 .供試的液體或固體物質(zhì)的溶液應(yīng)不顯渾濁或含有混懸的小粒。如有上述情況時(shí)，應(yīng)預(yù)先濾過(guò)，并棄去初濾液。4 .每次測(cè)定前應(yīng)以溶劑作空白校正，測(cè)定后，再校正 1次，以確定在測(cè)定時(shí)零點(diǎn)有無(wú)變動(dòng)，如第2次校正時(shí)發(fā)現(xiàn)零點(diǎn)有變動(dòng)，則應(yīng)重新測(cè)定旋光度。5 .測(cè)定供試品與空白校正，應(yīng)按相同的位置和方向放置測(cè)定管于儀器樣品室，并注意測(cè)定管內(nèi)不應(yīng)有氣泡，否則影響測(cè)定的準(zhǔn)確度。6 .測(cè)定管使用

31、后，尤其在盛放有機(jī)溶劑后，必須立即洗凈，以免橡皮圈受損發(fā)粘。測(cè)定管每次洗滌后，切不可置烘箱中干燥，以免發(fā)生變形，橡皮圈發(fā)粘。7 .測(cè)定管兩端的通光面，使用時(shí)須特別小心， 避免碰撞和觸摸，只能以擦鏡紙揩試， 以防磨損。應(yīng)保護(hù)其光亮、清潔，否則影響測(cè)定結(jié)果。8 .測(cè)定管螺帽不宜旋得過(guò)緊，以免產(chǎn)生應(yīng)力，影響讀數(shù)。9 .鈉燈使用時(shí)間一般勿連續(xù)使用超過(guò)2小時(shí)，并不宜經(jīng)常開關(guān)。當(dāng)關(guān)熄鈉燈后，如果要繼續(xù)使用，應(yīng)等鈉燈冷后再開。10 儀器應(yīng)放置干燥通風(fēng)處，防止潮氣侵蝕，鎮(zhèn)流器應(yīng)注意散熱。搬動(dòng)儀器應(yīng)小心輕放，避免震動(dòng)。11 .光源積灰或損壞，可打開機(jī)殼擦凈或更換。12 .機(jī)械部分摩擦阻力增大，可以打開后門板，在

32、傘形齒輪、蝸輪蝸桿處加稍許鐘油。13 .如果儀器發(fā)現(xiàn)停轉(zhuǎn)或其它元件損壞的故障，應(yīng)按電原理圖詳細(xì)檢查。第六章pH值的測(cè)定法一、原理PHS-2 型酸度計(jì)是用玻璃電極作為測(cè)量電極，甘汞電極作為參考電極，當(dāng)氫離子濃度發(fā)生變化時(shí)，玻璃電極和甘汞電極之間的電動(dòng)勢(shì)也隨著引起變化，而電勢(shì)變化符合能斯特方程式：RTE=E o-2.3026 X pH F式中E 一產(chǎn)生的電極電位T 絕對(duì)溫度E 0一零電位F法拉第常數(shù)R-氣體常數(shù)pH表示被測(cè)溶液pH值和內(nèi)溶液pH值的差值PHS-2 型酸度計(jì)是利用玻璃電極和甘汞電極對(duì)被測(cè)溶液中不同酸度產(chǎn)生的直流電勢(shì)，輸入到一臺(tái)用參量振蕩深度負(fù)反饋的直流放大器，以達(dá)到pH值指示的目的。二、注意事項(xiàng)1 .應(yīng)注意玻璃電極裝到電極夾中時(shí)應(yīng)略高于甘汞電極，以免球膜與試杯相碰。2 .新使用或久放未用的玻璃電極在使用前應(yīng)放在純化水內(nèi)浸泡活化48小時(shí)，平時(shí)也最好浸泡在水中，以便下次使用時(shí)能迅速地工作。3 .將甘汞電極的頸端橡皮塞取下，檢查飽和氯化鉀溶液情況，溶液中應(yīng)有氯化鉀結(jié)晶析出，以確保溶液飽和， 太少應(yīng)予以添加。使用前應(yīng)把電極彎管下端橡皮套除去。4 .按下電源按鍵，接通電源，按下 pH按鍵，指示燈亮后，一般短時(shí)間測(cè)量，只需預(yù)熱數(shù)分鐘即可，但要保持 儀表零點(diǎn)穩(wěn)定，必須預(yù)熱半小時(shí)或一小時(shí)