氯霉素ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書模板

1、資料內(nèi)容僅供您學(xué)習(xí)參考，如有不當(dāng)或者侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系改正或者刪除。氯霉素(Chloramphenicol) ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書一、概要氯霉素(chloramphenicol, CAP) 是應(yīng)用廣泛的抗菌素，曾對(duì)畜禽疾 病控制和治療起到了重要作用。但 由于氯霉素存在嚴(yán)重的副作用，能 引起人的再生障礙性貧血，粒細(xì)胞 缺乏癥等疾病，歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家已 相繼禁止或嚴(yán)格禁止使用。本試劑盒是應(yīng)用 ELISA技術(shù)研 發(fā)的新一代藥物殘留檢測(cè)產(chǎn)品，能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng) 度。操作時(shí)間僅需1.5小時(shí)。二、試驗(yàn)原理本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被偶 聯(lián)抗原，樣本中殘留的氯霉

2、素和微 孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗氯 霉素抗體，加入酶標(biāo)二抗后，用 TMB底物顯色，樣本吸光值與其殘 留物氯霉素的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo) 準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍 數(shù)，即可得出樣品中氯霉素的含量。三、適用范圍可定性、定量檢測(cè)動(dòng)物組織(肌肉、肝臟等)、尿液、血清、 腸衣、牛奶、奶粉等樣本中氯霉 素的殘留量。四、交叉反應(yīng)率氯霉素100%;琥 珀 氯 霉素92%;氯霉素-葡萄糖甘酸57%。五、使用單位需自備的設(shè)備及試劑設(shè)備：微孔板酶標(biāo)儀450nm/630nm-旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/氮?dú)獯蹈裳b置均質(zhì)器振蕩器渦旋儀離心機(jī)天平：感量0.01g-刻度移液管：10ml-洗耳球容量瓶：100ml、500ml玻璃試管：

3、10ml聚苯乙烯離心管：10ml、15ml、50ml-微量移液器：?jiǎn)蔚?0ml200ml、100ml 1000ml多道250ml試齊：-乙酸乙酯（分析純）-乙睛（分析純）-正己烷（分析純）-二水合亞硝基鐵富化鈉（分析純）（供奶樣用）b水合硫酸鋅（分析純）（供奶樣用）- 葡萄糖甘酸酶（Merck,Art.No.4114）（供尿樣本用）醋酸鈉（分析純）（供尿樣本用）肝素鈉（分析純）（供血樣本用）-醋酸（分析純）（供尿樣本用）-去離子水六、提供的材料與試劑1、96孔酶標(biāo)板X1塊（包被有偶聯(lián) 抗原）2、標(biāo)準(zhǔn)液><6并瓦:（2ml/瓶）0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225

4、ppb,0.675ppb,2.025ppb3 、 局濃度標(biāo)準(zhǔn)品：（2ml/瓶）100ppb4 酶 標(biāo) 二抗7ml5 抗 體 工 作液7 ml6 、底物液A液7ml7 、底物液B液 7ml8 終止液7ml9 、20X濃縮洗滌液40ml10 、2 X濃縮復(fù)溶液 50ml七、溶液的配制配液1: C液（供奶樣專用） 0.36M二水合亞硝基鐵富化鈉（Na2Fe（CN）5 NONH2O）溶液稱取10.7g二水合亞硝基 鐵富化鈉加去離子水溶解定容 至 100ml。配液2: 口液（供奶樣專用）1M 七水合硫酸鋅（ZnSO4 7H2O）溶液稱取28.8g七水合硫酸鋅加 去離子水溶解定容至100ml。配液3: p

5、H4.8 100mM醋酸鈉溶液（供尿樣本用）稱取2.4g醋酸鈉，加入1.2ml醋酸，再加去離子水溶解定容至500ml配液4:乙睛-水溶液量取84ml無(wú)水乙睛加入配液5:復(fù)溶工作液用去離子水將2 X濃縮復(fù)溶液按1:1體積比進(jìn)行稀釋（1份2X 濃縮復(fù)溶液+1份去離子水）用 于提取樣本的復(fù)溶，復(fù)溶工作 液在4 C環(huán)境可保存一個(gè)月。配液6:洗滌工作液用去離子水將20X濃縮洗滌液按1: 19體積比進(jìn)行稀釋（1份20禰縮洗滌液+19份去 離子水）用于酶標(biāo)板的洗滌，洗滌工作液在 4C環(huán)境可保存 一個(gè)月。八、樣本前處理步驟樣本處理前須知處理任何樣本時(shí),都必須注意：（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭， 在吸取不同的

6、試劑時(shí)要更換 吸頭。到16ml去離子水中混勻?qū)嶒?yàn)結(jié)果（b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器 具是否潔凈，必須使用潔凈 實(shí)驗(yàn)器具，以避免污染干擾(c)處理樣本的同時(shí)，做空白試 劑對(duì)照，樣本的測(cè)定結(jié)果減 去空白試劑的測(cè)定結(jié)果為樣 本中氯霉素的實(shí)際殘留量。組織樣本空白對(duì)照試劑的制備4ml乙酸乙酯在 氮?dú)饬飨峦耆稍?；?ml正己烷充分溶解；-加入1ml復(fù)溶液工作液(見配液 5),強(qiáng)烈振蕩 1min,靜置分層后去除上 層正己烷相；取100ml水相用于 分析。(d)未處理的樣本冷凍保存。(e)處理后的樣本可在 2-8 C避 光保存24h。未加正己烷之 前，吹干的樣本保存效果 更好。(f)處理后的樣本，如出現(xiàn)乳化

7、 現(xiàn)象，可在去除部分上層有機(jī)相，60 c水浴5 10min消除乳化后，再重復(fù) 離心步驟。(一)組織(雞肉/肝、 豬肉/肝、 蝦、魚等)前處理方法-用均質(zhì)器均質(zhì)組織樣本；稱取3.0 =0.05g均質(zhì)物至 50ml聚苯乙烯離心管中，加入6ml 乙酸乙酯，用振蕩器振蕩 10min, 3000g 以上，室溫 (20-25 C )離心 10min;-移取4ml上層有機(jī)相(約相當(dāng) 于2g的樣本)至10ml干凈的 玻璃試管中，于5060c水浴 氮?dú)饬飨麓蹈?；加?ml正己烷，用渦旋儀渦 動(dòng)30s,再加1ml復(fù)溶工作液 (見配液5),用渦旋儀渦動(dòng)1min, 3000g 以上，室溫 (20-25 C )離心 1

8、5min;-除去上層有機(jī)相，取下層 100ull用于分析。注：在檢測(cè)動(dòng)物肝臟樣品時(shí)，加入1ml正己烷溶解干燥的殘留物 ， 再加1ml復(fù)溶工作液后，只需振 蕩10s,離心后取下層即可分析； 在檢測(cè)高脂肪樣本時(shí)正己烷用量可加大2ml 3ml。（二）雞血前處理方法用加有肝素鈉（20-30單位/ml 血）的離心管采集雞血樣本 （建議采血注射器也用肝素鈉 潤(rùn)洗），血樣本室溫靜置1h,待析出血漿后，3000g以上, 15 c 離心 10min;取1ml血漿至10ml聚苯乙烯離 心管中，加2ml乙酸乙酯振蕩 1min;-室溫（20-25 C ）下靜置待水相 與有機(jī)相完全分層或 3000g以 上，室溫（20-25 C）離心5min;移取上層的有機(jī)相至15ml干 凈的玻璃試管中，于5060c 氮?dú)饬飨麓蹈?；干燥的殘留物加?1ml復(fù)溶工 作液（見配液5）,用渦旋儀渦動(dòng)2min溶解干燥的殘留物；取100ml用于分析。（三）尿液前處理方法將尿液于3000g以上，室溫（20-25 C ）離心 5min,直至尿 液樣本清亮；移取2ml清亮尿液樣本至 50ml 聚苯乙烯離心管中，力口 0.5ml pH4.8 100mM 醋酸鈉緩沖液 （見配液3）混合；-加40ml葡萄糖甘酸酶 （Merck,Art.No.4114）至稀釋 的 尿液樣本中，置37c水解至少 2h（或過(guò)夜