實驗室常用溶液配制

1、一 . 常用貯液與溶液1mol/L亞精胺（ Spermidine） : 溶解 2.55g 亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml 。分裝成小份貯存于-20 。1mol/L精胺（ Spermine ）：溶解3.48g 精胺于足量的水中，使終體積為10ml 。分裝成小份貯存于-20 。10mol/L乙酸胺（ ammonium acetate ）：將 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L 后，用 0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。10mg/ml 牛血清蛋白 (BSA ）：加 100mg的牛血清蛋白（組分V 或分子生物學試劑級，無DNA酶）于9.5ml 水中（為減少變性，須將蛋白加入水中，而不是

2、將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到 10ml ，然后分裝成小份貯存于-20 。1mol/L二硫蘇糖醇（ DTT ）：在二硫蘇糖醇 5g的原裝瓶中加 32.4ml水，分成小份貯存于-20?；蜣D(zhuǎn)移 100mg 的二硫蘇糖醇至微量離心管，加 0.65ml 的水配制成 1mol/L二硫蘇糖醇溶液。8mol/L乙酸鉀（ potassium acetate）：溶解 78.5g 乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100ml 。1mol/L氯化鉀（ KCl ）：溶解 7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml 。3mol/L乙酸鈉（ sodium ac

3、etate）：溶解40.8g 的三水乙酸鈉于約 90ml 水中，用冰乙酸調(diào)溶液的pH 至 5.2 ，再加水定容到 100ml 。0.5mol/L EDTA: 配制等摩爾的Na2EDTA和 NaOH 溶液（ 0.5mol/L ），混合后形成 EDTA 的三鈉鹽。或稱取 186.1g的 Na2EDTA · 2H2O 和 20g的 NaOH ，并溶于水中，定容至1L 。1mol/L HEPES ：將 23.8gHEPES溶于約 90ml 的水中，用 NaOH 調(diào) pH （ 6.8-8.2），然后用水定容至100ml 。1mol/L HCl ：加 8.6ml 的濃鹽酸至91.4ml 的水中。

4、25mg/ml IPGT ：溶解 250mg 的 IPGT （異丙基硫代 - -D- 半乳糖苷）于 10ml 水中，分成小份貯存于 -20 。1mol/LMgCl2: 溶解 20.3g MgCl2· 6H2O于足量的水中，定容到100ml 。100mmol/L PMSF ：溶解 174mg的 PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml 。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于 -20 。20mg/ml 蛋白酶 K（ proteinase K）：將 200mg的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中，輕輕搖動， 直至蛋白酶 K 完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml ，

5、然后分裝成小份貯存于 -20。10mg/mlRnase （無 DNase ）（DNase free RNase ）：溶解 10mg 的胰蛋白RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L的乙酸鈉水溶液中 （ pH 5.0 ）。溶解后于水浴中煮沸15min ，使 DNA 酶失活。 用 1mol/L 的 Tris HCl 調(diào) pH 至 7.5 ，于 -20貯存。（配制過程中要戴手套）5mol/L 氯化鈉（ NaCl ）：溶解10N 氫氧化鈉（ NaOH ）：溶解用水定容至1L。29.2g400g氯化鈉于足量的水中，定容至100ml 。氫氧化鈉顆粒于約0.9L 水的燒杯中 （磁力攪拌器攪拌） ，氫氧化鈉

6、完全溶解后10 SDS （十二烷基硫酸鈉） ：稱取 100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L 的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L 。2mol/L 山梨（糖）醇（Sorbitol ）：溶解 36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml 。100 三氯乙酸（TCA ） :在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml 水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應在臨用前配制）2.5 X gal （ 5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚 -半乳糖苷）：溶解 25mg 的 X gal 于 1ml 的二甲基甲酰胺（ DMF ） ,用鋁箔包裹裝液管，貯存于 -20 。100 &#

7、215; Denhardt試劑（ Denhardts regent）成分及終濃度配制 100ml 溶液各成分的用量2% 聚蔗糖（Ficoll ， 400 型）2% 聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（組分V ）水2g2g2g加水至總體積為100ml , 依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于-20 貯存。10 ×標準 DNA 連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端連接）成分及終濃度配制 10ml 溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl:5ml1mol/L貯 液,100mmol/L MgCl2:1ml

8、1mol/L貯 液 ,100mmol/L DTT:1ml 1mol/L貯液 ,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L貯液 ,5mmol/L鹽酸亞精胺（可選）:50ul 1 mmol/L 貯液 ,0.5mg/ml BSA（組分V）（可選） :0.5ml 10 mg/mL貯液,水 : 2.25ml將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（ dNTP solutions ）可以購買到 100mmol/L純 dNTPs 貯液， -80 可貯存至少 6個月。10mmol/L dNTP 混合液成分及終濃度 配制 20ul溶液各成分的用量10mmo

9、l/L dATP10mmol/L dCTP10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水 2ul 100 mmol/L dATP貯液2ul 100 mmol/L dCTP貯液2ul 100 mmol/L dGTP貯液2ul 100 mmol/L dTTP貯液12ul20 PEG 8000/2.5M NaCl成分及終濃度 配制 10ml溶液各成分的用量質(zhì)量濃度為 20聚乙二醇2.5mol/L 氯化鈉水 20g50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g固體氯化鈉補足 100ml加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml ，用磁力攪拌器攪拌溶解。20×SSC成分及

10、終濃度 配制 1L 溶液各成分的用量300mmol/L 檸檬酸三鈉（二水）3mol/L 氯化鈉水 88.2g175.3g補足 1L溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L 水中，加幾滴 10N NaOH溶液調(diào) pH 為 7.0 ，用水補足體積至1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）處理水加 100ul DEPC 于 100ml水中，使 DEPC 的體積分數(shù)為 0.1 。在 37 溫浴至少 12h ，然后在 15 psi 條件下高壓滅菌 20min ，以使殘余的DEPC 失活。 DEPC 會與胺起反應，不可用DEPC 處理 Tris 緩沖液。甲酰胺（ deionized formamide）直接購買

11、或加 Dowex XG8混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng) Whatman 1號濾紙過濾除去樹脂后分成小份，充氮氣于-80 貯存（防止氧化） 。磷酸緩沖液（ phosphate buffer）按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需pH 的磷酸緩沖液。 配制 1 mol/L的磷酸二氫鈉 （ NaH2PO4·H2O ）貯液：溶解 138g 于足量水中， 使終體積為 1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（ Na2HPO4）貯液 :溶解 142g 于足量水中使終體積為1L 。1m

12、ol/L 磷酸二氫鈉（ml） 1mol/L 磷酸氫二鈉（ ml ） 最終 pH 值877850815775735685625565510450390330280 123150185225265315375435490550610670720 6.06.16.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE （用于懸浮和貯存DNA ）成分及終濃度配制 100ml 溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCl （ pH7.4-8.0 ， 25 ）200ul 0.5 mol/L EDTA（ pH 8.0 ）98

13、.8mlTris 緩沖液（ Tris-HCl buffer）將 121g 的 Tris 堿溶解于約0.9L 水中，再根據(jù)所要求的pH（ 25下）加一定量的濃鹽酸（11.6N ），用水調(diào)整終體積至 1L。濃鹽酸的體積（ml ） pH8.6142128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2二 .電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液電泳緩沖液50 ×Tris- 乙酸（ TAE ）緩沖液成分及終濃度配制 1L 溶液各成分的用量2mol/L Tris 堿1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml 的冰乙酸（ 17.

14、4 mol/L ）200ml 的 0.5 mol/L EDTA （ pH 8.0 ）補足 1L5×Tris- 硼酸（ TBE ）緩沖液成分及終濃度配制 1L 溶液各成分的用量445 mmol/L Tris堿445 mmol/L硼酸鹽10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0 ）補足 1L染料1溴酚藍（ bromophenol blue）加 1g 水溶性鈉型溴酚藍于100ml 水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。1二甲苯青FF （ xylene cyanole FF）溶解 1g 二甲苯青FF 于足量水中，定容到100m

15、l 。10mg/ml 的溴化乙錠（ethidium bromide）小心稱取 1g 溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml4貯存。水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于凝膠上樣液（ gel loading solutions6×堿性凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制 10ml 溶液各成分用量0.3 N 氫氧化鈉6 mmol/L EDTA18 聚蔗糖（ 400 型）0.15 溴甲酚綠0.25 二甲苯青FF水 300ul 10N 氫氧化鈉120ul 0.5mol/L EDTA（ pH8.0 ）1.8g15mg25mg補足到 10ml6×聚蔗糖凝膠上樣液（室溫

16、貯存）成分及終濃度配制 10ml 溶液各成分用量0.15 溴酚藍0.15 二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15 聚蔗糖（ 400 型）水 1.5ml 1 溴酚藍1.5ml 1 二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（ pH8.0 ）1.5g補足到 10ml6×溴酚藍 /二甲苯青 /聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制 10ml 溶液各成分用量0.25 溴酚藍0.25 二甲苯青FF15 聚蔗糖（ 400 型）水 2.5ml 1 溴酚藍2.5ml 1 二甲苯青FF1.5g補足到 10ml6×甘油凝膠上樣液（4貯存）成分及終濃度配制 10ml 溶液各成分

17、用量0.15 溴酚藍0.15 二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50 甘油水 1.5ml 1 溴酚藍1.5ml 1 二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（ pH8.0 ）3ml3.9ml6×蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制 10ml 溶液各成分用量0.15 溴酚藍0.15 二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40 聚蔗糖水 1.5ml 1 溴酚藍1.5ml 1 二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（ pH8.0 ）4g補足到 10ml10 ×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制 10ml 溶液各成分用量0.2

18、 溴酚藍0.2 二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1 SDS50 甘油水 20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 SDS5ml補足到 10ml三 .常用培養(yǎng)基LB 培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L 水中：蛋白胨 10g酵母提取物5g氯化鈉 10g如果需要用1N NaOH （ 1ml ）調(diào)整 pH 至 7.0 ，再補足水至1L 。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L, 上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L 。SOB 培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L 水中：蛋白胨 20g酵母提取物5g氯化鈉 0.5g1 mol/L 氯化鉀 2.5ml用水補足體積到1L 。

19、分成 100ml 的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml 的小份中加1ml 滅過菌的 1mol/L 氯化鎂。SOC 培養(yǎng)基成分、方法同 SOB 培養(yǎng)基的配制， 只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml 的小份中加氯化鎂外，再加2ml 滅菌的 1mol/L 葡萄糖（ 18g 葡萄糖溶于足夠水中，再用水補足到100ml1ml 滅過菌的，用 0.22um1mol/L 的濾膜過濾除菌）。TB 培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L 水中：蛋白胨 12g酵母提取物 24g甘油 4ml各組分溶解后高壓滅菌。 冷卻到 60 ，再加 100ml 滅菌的 170mmol/L KH2PO4/0.72

20、mol/L K2HPO4的溶液（ 2.31g的 KH2PO4 和 12.54gK2HPO4 溶在足量的水中，使終體積為100ml 。高壓滅菌或用 0.22um的濾膜過濾除菌） 。2× YT 培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L 水中：蛋白胨 16g酵母提取物 10g氯化鈉 4ml如果需要用 1N NaOH （ 1ml ）調(diào)整 pH 至 7.0 ，再補足水至 1L 。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L, 上層瓊脂平板添加瓊脂粉 7g/L 。YPD 培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L 水中：蛋白胨 20g酵母提取物 10g葡萄糖 20g用水補足體積為 1L后，高壓滅菌。 建議在高壓滅菌之前，對色氨

21、酸營養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加1.6g色氨酸，因為YPD 培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入20g 瓊脂粉。四 .常用抗生素氨芐青霉素（ ampicillin ）（ 100mg/ml ）溶解 1g 氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml 。分裝成小份于 -20 貯存。常以 25ug/ml 50ug/ml 的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。羧芐青霉素（ carbenicillin ）（ 50mg/ml ）溶解 0.5g 羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml 。分裝成小份于 -20 貯存。常以25ug/ml 50ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。甲氧西林（ m

22、ethicillin ）（ 100mg/ml ）溶解 1g 甲氧西林鈉于足量的水中， 最后定容至 10ml 。分裝成小份于 -20 貯存。常以 37.5ug/ml終濃度與 100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長培養(yǎng)基。卡那霉素（ kanamycin ）（ 10mg/ml ）溶解 100mg 卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml 。分裝成小份于 -20 貯存。 常以 10ug/ml 50ug/ml 的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。氯霉素（ chloramphenicol）（25mg/ml ）溶解 250mg氯霉素足量的無水乙醇中，最后定容至10ml 。分裝成小份于-20 貯存。常以12.5ug/

23、ml 25ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。鏈霉素（ streptomycin ）（ 50mg/ml ）溶解 0.5g 鏈霉素硫酸鹽于足量的無水乙醇中，最后定容至10ml 。分裝成小份于-20 貯存。 常以 10ug/ml 50ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。萘啶酮酸（ nalidixic acid ）（ 5mg/ml ）溶解 50mg 萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml 。分裝成小份于-20貯存。 常以 15ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。四環(huán)素（ tetracyyline ）（ 10mg/ml ）溶解 100mg 四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中，或者將無堿的四環(huán)素溶于無水乙醇

24、，定容至10ml 。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光，于-20 貯存。常以10ug/ml 50ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。幾種溶液的配制方法1、 PBS:取 ZLI-9061PBS溶于 1000ml 的蒸餾水中，混勻，測pH 值應在7.27.4之間，若偏離此范圍，請用0.1N 的 HCL或 NaOH調(diào)整。2、 TBS：2.1 Tris緩沖液配方： （ 0.5 M pH7.6）Tris（三羥甲基氨基甲烷）60.57g1N HCL約 420ml雙蒸水加至 1000mlTris緩沖液配制方法：先以少量雙蒸水（ 300500ml ）溶解 Tris ，加入 HCl 后，用 HCl（ 1N）

25、或 NaOH（ 1N）將 pH 調(diào)至 7.6 ， 最后雙蒸水加至 1000ml 。此液為儲備液， 4冰箱中保存。2.2 TBS配方：Tris-HCI 緩沖液（ 0.5MpH7.6 ）100mlNaCI8.59g (0.15mol/L)雙蒸水加至 1000mlTBS配制方法：先以少量雙蒸水溶解NaCl ，再加入 Tris-HCl緩沖液，最后加雙蒸水至1000ml ，充分搖勻。3、枸櫞酸鹽緩沖液（ Citrate buffer）：3.1儲存液：A. 0.1M枸櫞酸溶液：稱取21.01g 枸櫞酸（ C H O·H0）溶于 1000ml 蒸餾水中。6872B. 0.1M枸櫞酸鈉溶液：稱取29

26、.41g 枸櫞酸鈉（ C6H5Na3O7·2H20）溶于 1000ml 蒸餾水中。3.2工作液：取 9ml A 液和 41ml B 液加入 450ml 蒸餾水中，溶液pH 值應為 6.0 0.14、胰酶（ Trypsin）：4.1 ZLI-9011胰蛋白酶消化液：常用濃度為0.125% ，即使用前將一滴試劑1 胰酶溶液和三滴試劑2 胰酶稀釋液均勻混合（1:3 稀釋），則可直接滴加使用。胰酶的最終濃度可以根據(jù)使用者的要求進行調(diào)整，濃度范圍可以從0.05%（ 1:10稀釋）至0.25%（ 1:1 稀釋）。4.2 ZLI-9010胰蛋白酶：取 0.05g 或 0.1g 胰蛋白酶加入到 10

27、0ml 0.05% 或 0.1% pH7.8 的無水氯化鈣水溶液中，溶解即可。5、胃酶（ Pepsin4%胃蛋白酶，用）：0.1mol/L HCL配制。（我公司備有ZLI-9013胃蛋白酶消化工作液，不需稀釋直接滴加使用，歡迎選購）6DAB6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit：使用前只需將試劑盒提供的A、 B、C 三種試劑各一滴加至1ml雙蒸水中，即可獲得1ml DAB工作液，簡單易用。6.1 ZLI-9030 DAB：6mgDAB溶于10mlTBS（ 0.05M pH7.6），再加入濃度為3的H2O2，過濾掉沉淀物，即可。7、 AEC：4mg AEC 溶于1ml二甲基甲酰胺中，

28、加入14ml濃度為0.1M的醋酸緩沖液（pH5.2 ），然后加入0.15ml 3%H2O2，過濾掉沉淀物。8、 RIPA：1× PBS， 1%NP 40， 0.5 sodium deoxycholate， 0.1% SDS （此液體可長期保存）。以下抑制劑以儲存液方式保存，臨用前加入RIPA 中。8.1 10mg/ml PMSF異丙醇溶液（用量為8.2 Aprotinin（ Sigma 產(chǎn)品，用量為10l/ml30l/ml）8.3 1000mM sodium orthovanadate冷凍液（用量為10l/ml）9、 Blotto A：常規(guī)使用1 × PBS， 5% mil

29、k， 0.05% Tween 20。10、 Blotto B：與 Phosphotyrosine起背景增高?？贵w共用，1× PBS， 1% milk， 0.05% Tween 20。部分實驗中milk可完全去除，但可能引實驗室常用貯存液的配制參數(shù)一、核酸及蛋白質(zhì)常用數(shù)據(jù)化合物分子量max(pH7.0)1 摩爾溶液（ pH7.0 ）中 max 時的最大吸收值 OD 280/OD260ATP507259154000.15CTP48327190000.97GTP523253137000.66UTP484262100000.38dATP494259152000.15dCTP467271930

30、00.98dGTP507253137000.66dTTP48226796000.712常用核酸的長度與分子量核酸核苷酸數(shù)分子量DNA48502（雙鏈環(huán)狀）3.0×10 7pBR3224363 （雙鏈）2.8×10 628SrRNA48001.6×10 623SrRNA37001.26×1018SrRNA19006.1 ×10 519SrRNA17005.5 ×10 55SrRNA1203.6 ×10 4tRNA（大腸桿菌）752.5 ×10 43常用核酸蛋白換算數(shù)據(jù)（ 1）重量換算1g=10-6g1pg=10-12

31、g1ng=10-9g1fg=10-15g（ 2）分光光度換算：1A260 雙鏈 DNA=50g/ml1A260 單鏈 DNA=30g/ml1A260 單鏈 RNA=40g/ml（ 3） DNA摩爾換算：1g 100bpDNA=1.52pmol=3.03pmol 末端1g pBR322 DNA=0.36pmol1pmol 1000bp DNA=0.66g1pmol pBR322=2.8g1kb 雙鏈 DNA（鈉鹽） =6.6 ×105 道爾頓1kb 單鏈 DNA（鈉鹽） =3.3 ×105 道爾頓1kb 單鏈 RNA（鈉鹽） =3.4 ×105 道爾頓（ 4）蛋白摩

32、爾換算：100pmol 分子量 100， 000 蛋白質(zhì) =10g100pmol 分子量 50， 000 蛋白質(zhì) =5g100pmol 分子量 10， 000 蛋白質(zhì) =1g氨基酸的平均分子量=126.7 道爾頓（ 5）蛋白質(zhì) /DNA換算：1kb DNA=333 個氨基酸編碼容量 =3.7 ×104MW 蛋白質(zhì)10， 000MW蛋白質(zhì) =270bp DNA30， 000MW蛋白質(zhì) =810bp DNA50， 000MW蛋白質(zhì) =1.35kb100， 000MW蛋白質(zhì) =2.7kb DNA4常用蛋白質(zhì)分子量標準參照物（ 1）高分子量標準參照（ 2）中分子量標準參照（ 3）低分子量標準

33、參照肌球蛋白分子量磷酸化酶 B97， 400碳酸酐酶31， 00肌球蛋白212， 000牛血清白蛋白66， 200大豆脻蛋白酶21， 500 - 半乳糖甘酶 B116， 000谷氨酶脫氫酶55， 000抑制劑磷酸化酶 B97，400卵白蛋白42， 700馬心肌球蛋白16， 900牛血清白蛋白66，200醛縮酶40， 000溶菌酶14， 400過氧化氫酶 57，000碳酸酐酶31， 000肌球蛋白（ F1）8， 100醛縮酶40，000大豆脻蛋白酶21， 500肌球蛋白（ F2）6， 200抑制劑肌球蛋白（ F3）2， 500溶菌酶14， 4005常用 DNA分子量標準參照物DNA/HindDN

34、A/EcoR/Hind +EcoRpBR322/Hae23130212262122758712394167421514840510465575804497350489436156434268458802322484335304346420273530202726757564190423451125158421321137519218974184118311247564125續(xù)上表pBR322/Hinf 174/Hinf 174/Hae 174/Tap1631726140135329145177131181078117550655310087240439650082603327344417663

35、1023129841348281141221311422718722024940234541542002419433751511182072二、常用緩沖液1分子克隆常用緩沖液2磷酸緩沖液（ 1）25下 0.1mol/L磷酸鉀緩沖液的配制pH1mol/L K 2HPO4(ml)1mol/L KH 2PO4(ml)5.88.591.56.013.286.86.219.280.86.427.872.26.638.161.96.849.750.37.061.538.57.271.728.37.480.219.87.686.613.47.890.89.28.094.06.2（ 2）25下 0.1mol/

36、L磷酸鈉緩沖液的配制pH1mol/L Na 2HPO4(ml)1mol/L NaH 2PO4(ml)5.87.992.16.012.088.06.217.882.26.425.574.56.635.264.86.846.353.77.057.742.37.268.431.67.477.422.67.684.515.57.889.610.48.093.26.8: 用蒸餾水將混合的兩種1mol/L貯存液稀釋至1000ml，根據(jù)Henderson-Hasselbalch方程計算其pH 值：pH=pK+1g(質(zhì)子受體/質(zhì)子供體)在此， pK=6.86(25 ) 。3電泳緩沖液測序凝膠加樣緩沖液98%去

37、離子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚藍甲酰胺：許多批號的試劑級甲酰胺，其純度符合使用要求，無須再進行處理。不過，一旦略呈黃色，則應用在磁力攪拌器上將甲酰胺與 Dowex XG8混合床樹脂共同攪拌 1 小時進行去離子處理，并用 Whatman 1 號濾紙過濾 2 次，去離子甲酰胺分裝成小份，充氮存于 - 70。常用的電泳緩沖液緩沖液使用液濃貯存液（每升）Tris- 乙酸（ TAE）1×： 0.04mol/L Tris-乙酸50×： 242g Tris堿0.001mol/L EDTA57.1ml 冰乙酸100ml 0.5mol

38、/L EDTA(pH8.0)Tris- 磷酸（ TPE）1×:0.09mol/L Tris- 磷酸10×:10g Tris堿0.002mol/L EDTA15.5ml85%磷酸（ 1.679g/ml）40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris- 硼酸（ TBE） a0.5 ×0.045mol/L Tris- 硼酸5×： 54g Tris堿0.001mol/L EDTA27.5 硼酸20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)堿性緩沖液 b1×:50mmol/L NaOH1×:5ml 10mol/L NaOH1mm

39、ol/L EDTA2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)Tris-甘氨酸c1×:25mmol/L Tris5×:15.1g Tris250mmol/L甘氨酸94g苷氨酸（電泳級）（pH8.3 ）0.1% SDS50ml 10% SDS( 電泳級)說明：TBE溶液長時間存放后會形成沉淀物，為避免這一問題， 可在室溫下用玻璃瓶保存5×溶液， 出現(xiàn)沉淀后則予以廢棄。以片都以 1×TBE 作為使用液（即目前幾乎所有的瓊脂糖膠電泳都以1： 5 稀釋濃貯液）進行瓊脂糖凝膠電泳。但1： 10 稀釋的貯存液作為使用液。0.5 ×的使用液已具備足夠的

40、緩沖容量。進行聚丙烯酰胺凝膠垂直槽的緩沖液槽較小，故通過緩沖液的電流量通常較大，需要使用1×TBE 以提供足夠的緩沖容量。堿性電泳緩沖液應現(xiàn)用現(xiàn)配。Tris - 甘氨酸緩沖液用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。2×SDS凝膠加樣緩沖液：100mmol/L Tris·HCl(6.8)200mmol/L二硫蘇糖醇（DTT）4%SDS（電泳級）0.2%溴酚藍20%甘油不含 DTT的 2×SDS凝膠加樣緩沖液可保存于室溫，應在臨用前取4凝膠加樣緩沖液緩沖液類型6×緩沖液1mol/L貯存液現(xiàn)加于上述緩沖液中。貯存溫度0.25%溴酚藍0.25%二甲苯青FF440%（ W/V）蔗糖水溶液0.25 溴酚藍0.25%二甲苯青FF室溫15%聚蔗糖 (Ficoll400)0.25%溴酚藍0.25%二甲苯青FF430%甘油水溶液0.25%溴酚藍40%(W/V)蔗糖水溶液4堿性加樣緩沖液 :300mmol/L NaOH6mmol/L EDTA18%聚蔗糖 (Ficoll400)0.15%溴甲酚綠40.25%二甲苯青 FF使用以上凝膠加樣緩沖液的目的有三：增大樣品密度；以確保DNA均勻進入樣品孔內(nèi)；使樣品呈現(xiàn)顏色，從