乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)課件

1、乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)乙肝病毒檢測 方法學(xué)評(píng)價(jià) 乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)乙肝病毒結(jié)構(gòu)乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)（一） 乙型肝炎病毒結(jié)構(gòu)特點(diǎn)HBsAg：是HBV感染的主要標(biāo)志HBsAb：保護(hù)性抗體HBcAg：僅存于感染的肝細(xì)胞核內(nèi)，一般不存在于血循環(huán)中HBcAb: 非保護(hù)性抗體，HBcAb-IgM提示HBV處于復(fù)制狀態(tài)HBeAg：HBV復(fù)制及強(qiáng)感染性的指標(biāo)HBeAb：有一定的保護(hù)作用，預(yù)后良好乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)患者血清中存在三種基本形態(tài)患者血清中存在三種基本形態(tài) 大球型顆粒，又稱大球型顆粒，又稱Dane顆粒；小球型顆顆粒；小球型顆粒；管型顆粒粒；管型顆粒 小球型顆粒；管型顆粒小球型顆粒；管

2、型顆粒 管型顆粒管型顆粒乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)乙型肝炎病毒的實(shí)驗(yàn)室診斷 （一）血清學(xué)檢查（一）血清學(xué)檢查 （二）生化學(xué)檢查（二）生化學(xué)檢查 （三）（三）HBV DNA、基因型和變異檢查、基因型和變異檢查 乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)血清學(xué)檢查 項(xiàng)目：項(xiàng)目：HBsAg、抗、抗-HBs、HBeAg、抗、抗-HBe、抗、抗-HBc以及抗以及抗-HBc IgM 方法方法 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay，最常用，定性，最常用，定性)乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià) HBsAg 感染的標(biāo)志感染的標(biāo)志 Anti-HBs 既往感染既往感染/接種疫苗接種疫苗 Anti-HB

3、c IgM 急性感染標(biāo)志急性感染標(biāo)志 Anti-HBc IgG 既往或慢性感染既往或慢性感染 HBeAg 急性病毒復(fù)制，有傳染性急性病毒復(fù)制，有傳染性 Anti-HBe 病毒不再復(fù)制病毒不再復(fù)制 HBV-DNA 急性病毒復(fù)制，比急性病毒復(fù)制，比HBeAg更準(zhǔn)確；更準(zhǔn)確；主要用于監(jiān)測治療反應(yīng)主要用于監(jiān)測治療反應(yīng)乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)HBV血清學(xué)標(biāo)志物的臨床意義感染模式感染模式HBsAgHBeAgHBc(IgM)抗抗HBc(IgG)抗抗HBe抗抗HBs臨床意義臨床意義1+-急性乙肝潛伏期后期，攜帶者。2+-急性乙肝早期或潛伏期3+-急性乙肝早期4+-+-急性乙肝后期5+-+-急性或慢性乙肝，有H

4、BV復(fù)制6+-+-+-急性或慢性乙肝。急性期或無癥狀攜帶者7+-+-+-陰性慢性乙肝8+-+-慢性乙肝，無或低度HBV復(fù)制，乙肝恢復(fù)期，既往感染，隱匿性9-+-+乙肝恢復(fù)期，既往感染，隱匿性10-+慢性乙肝，接種過乙肝疫苗。乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)兩對(duì)半的意義兩對(duì)半的意義 乙型肝炎的診斷乙型肝炎的診斷 判斷傳染性判斷傳染性 判斷預(yù)后判斷預(yù)后 篩查獻(xiàn)血員篩查獻(xiàn)血員 流行病學(xué)調(diào)查流行病學(xué)調(diào)查乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià) 乙肝三系定性檢查是用來判斷是否感染乙肝或粗略估計(jì)病毒復(fù)制水平的初步檢查，對(duì)患者病情程度的評(píng)估參考性不大，所以乙肝患者在做乙肝三系定性檢查的時(shí)候，應(yīng)結(jié)合肝功能檢查、乙肝病毒DNA檢查、B

5、超檢查等來判定病情的輕重，乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)ELISAELISA檢測靈敏低的原因及局限檢測靈敏低的原因及局限 ELISAELISA法受其自身敏感性和特異性的限制法受其自身敏感性和特異性的限制; ; HBV SHBV S和前和前C C基因區(qū)出現(xiàn)位點(diǎn)突變導(dǎo)致基因區(qū)出現(xiàn)位點(diǎn)突變導(dǎo)致HBsAgHBsAg和和HBeAgHBeAg表達(dá)缺陷。表達(dá)缺陷。 影響因素多影響因素多, ,如加樣時(shí)間如加樣時(shí)間, ,試劑平衡時(shí)間試劑平衡時(shí)間, ,樣本樣本溶血程度等等。特別是低濃度樣本易導(dǎo)致假陰溶血程度等等。特別是低濃度樣本易導(dǎo)致假陰性結(jié)果性結(jié)果, ,使弱陽性樣本漏檢。使弱陽性樣本漏檢。 急性感染的窗口期急性感染的

6、窗口期; HBsAg; HBsAg檢測方法靈敏度不檢測方法靈敏度不足足; ;血清亞型的漏檢等。血清亞型的漏檢等。 標(biāo)本中病毒顆粒少標(biāo)本中病毒顆粒少; ;乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)血清學(xué)檢測的局限性 HBV具有具有“檢測窗口期檢測窗口期 假陰性結(jié)果假陰性結(jié)果 無法檢測突變株及抗體無法檢測突變株及抗體乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)乙肝病毒的定量檢測 1、乙肝表面抗原（HBsAg）定量檢測： 1）參考值：0-0.05IU/mL 2）臨床意義： （1）可作為HBV攜帶者乙肝病毒復(fù)制的參考指標(biāo) （2）評(píng)價(jià)拉美呋定的治療效果 （3）監(jiān)測應(yīng)用alpha-干擾素治療病人的乙肝病毒復(fù)制 （4）確定肝移植病人免疫球蛋白的

7、使用劑量乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)2.乙肝表面抗體（抗-HBs）定量測定： 是HBsAg刺激機(jī)體產(chǎn)生的特異性抗體，是一種保護(hù)性抗體，能中和HBV。 （1）抗-HBs含量在0-10mIU/ml，表示不具有保護(hù)性，需要注射乙肝疫苗（3針：0-1-6方案）。 （2）抗-HBs含量在10-100mIU/ml，表示具有保護(hù)性，但較弱，需要乙肝疫苗強(qiáng)化注射（1針）。 （3）抗-HBs含量大于100mIU/ml，表示具有很強(qiáng)的保護(hù)性，不需要注射乙肝疫苗。乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià) 3、乙肝病毒e抗原（HBeAg） HBeAg增高說明病毒復(fù)制，具有很強(qiáng)的傳染性。 4、乙肝病毒e抗體（抗-HBe） 抗-HBe陽性說

8、明病毒復(fù)制減少，傳染性弱，但并非沒有傳染性?？笻Be不是保護(hù)性抗體 。乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià) 5、乙肝病毒核心抗體（抗-HBc） 抗-HBc：不是中和抗體，有IgG和IgM兩種形式。IgM在早期出現(xiàn)，而IgG在恢復(fù)期出現(xiàn)，可持續(xù)多年或終身存在。乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)乙肝五項(xiàng)定量檢測的優(yōu)點(diǎn) 由于乙肝病毒容易發(fā)生變異，再加上乙肝定性檢測方法的局限性，會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果，導(dǎo)致不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)乙肝的感染，也就不能得到及時(shí)的治療，對(duì)醫(yī)護(hù)人員和其他患者也存在著被感染的威脅。 乙肝五項(xiàng)定量應(yīng)用目前最先進(jìn)的化學(xué)發(fā)光法檢測，避免了假陰性和漏檢的問題，而且準(zhǔn)確，尤其對(duì)乙肝病人的療效觀察提供了依據(jù)，這是檢驗(yàn)發(fā)展的趨勢(shì)

9、。乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)兩對(duì)半定量檢測極大地提高了檢測的靈敏度，LiCa技術(shù)檢測HBsAg靈敏度可達(dá)05ng/ml，而ELISA檢測HBsAg達(dá)到2ng/ml時(shí)才會(huì)陽性。急性乙肝早期定量能及早檢出HBsAg，確證HBV感染，幾乎能與PreSi同時(shí)檢測，在病程觀察中大大縮短了“窗口期”，而酶標(biāo)檢測在乙肝早期往往HBsAg呈陰性。慢性乙肝一些患者由于機(jī)體常缺乏對(duì)HBV包膜蛋白的免疫應(yīng)答，HBsAg表達(dá)較低，酶標(biāo)檢測可出現(xiàn)HBsAg和HBsAb均陰性的情況，而定量檢測則可避免這些情況的出現(xiàn)，為正確判斷病情提供依據(jù)。靈敏度如病毒發(fā)生變異后，表達(dá)量較低，常規(guī)ELISA測不出抗原，而定量檢測具有極高的靈

10、敏度，可發(fā)現(xiàn)極有可能同時(shí)檢測出HBsAg和HBsAb，血清中HBsAg含量與病人對(duì)HBsAg細(xì)胞免疫成反比關(guān)系，而肝功能改變則與此種細(xì)胞免疫成正比。定量HBsAg是反映這一關(guān)系的唯一手段?？砂l(fā)現(xiàn)低濃度的HBsAg攜帶者，特別是一些群體如醫(yī)務(wù)工作者及病人家屬等。乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)定量檢測意義l監(jiān)測疾病發(fā)展l評(píng)估藥物療效l指導(dǎo)疫苗接種乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)國內(nèi)疫苗評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)l 無應(yīng)答者無應(yīng)答者: :無抗體產(chǎn)生無抗體產(chǎn)生 (5%) - (5%) - 加強(qiáng)計(jì)量復(fù)種加強(qiáng)計(jì)量復(fù)種l 低應(yīng)答者低應(yīng)答者:10 IU/L (10%) - :100 IU/L (20%) - :100 IU/L (20%)

11、- 無須復(fù)種無須復(fù)種乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)PCR技術(shù)在乙肝方面的應(yīng)用 乙型肝炎病毒屬嗜肝DNA病毒科（hepadnaviridae），基因組長度3.2kb 目前感染人類最小的DNA病毒 部分雙鏈環(huán)狀DNA。乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)定量PCR的特點(diǎn)乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)HBV基基 因因 及及 編編 碼碼 蛋蛋 白白乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)HBV-DNA定量檢測的臨床應(yīng)用 慢性乙肝診斷 治療監(jiān)測和療效評(píng)價(jià) 跟蹤隨訪 預(yù)后判斷乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)（二） HBV-DNA與“兩對(duì)半”乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)3. 血清學(xué)指標(biāo)()不能排除HBV感染。103 copy乙肝病毒檢

12、測的方法學(xué)評(píng)價(jià)HBV-DNA檢測的臨床意義乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià) 一、乙肝病毒DNA檢查可檢查乙肝病毒的復(fù)制狀況。如乙肝病毒DNA測定值1000copies/ml，就提示乙肝病毒有復(fù)制，而且病毒數(shù)量的高低與病毒復(fù)制的程度成正相關(guān)。若結(jié)果陰性，則表明病毒處于不活躍階段，病情比較平穩(wěn)。 二、乙肝病毒DNA檢查還是判斷乙肝病毒傳染性的重要指標(biāo)。如果乙肝病毒DNA測定值1000copies/ml，常提示具有傳染性，且檢測值越高就說明乙肝病毒復(fù)制越活躍，傳染性越強(qiáng)。乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià) 三、乙肝病毒DNA檢查可以作為肝病患者確診病情的主要依據(jù)。乙肝病毒DNA陽性者，即使肝功

13、能正常，必要時(shí)也應(yīng)考慮進(jìn)行抗病毒治療。乙肝抗病毒治療的標(biāo)準(zhǔn)就是乙肝病毒DNA1000copies/ml，且患者轉(zhuǎn)氨酶超過正常值兩倍，此時(shí)是肝病患者抗病毒治療的最佳時(shí)機(jī)。 四、乙肝病毒DNA檢查結(jié)果還可以在一定程度上輔助判斷乙肝病毒是否產(chǎn)生了變異，如在治療過程中乙肝病毒DNA檢測結(jié)果由陰性轉(zhuǎn)為陽性時(shí)，則提示病毒已發(fā)生變異，應(yīng)結(jié)合具體病情重新選擇抗病毒藥物。乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)基因檢測在乙肝診療各階段的應(yīng)用基因檢測在乙肝診療各階段的應(yīng)用藥物治療方案的確定藥物治療方案的確定（用藥：干擾素、拉米夫定、（用藥：干擾素、拉米夫定、阿德福韋、恩替卡韋）阿德福韋、恩替卡韋）藥物治療藥物治療（療效評(píng)價(jià)）（療效評(píng)價(jià)）前前C C區(qū)區(qū)18961896位點(diǎn)突變檢測位點(diǎn)突變檢測跟蹤隨訪跟蹤隨訪乙乙 肝肝 病病 毒毒 定定 量檢測量檢測確確診診病毒學(xué)病毒學(xué)分析分析乙肝病毒分型檢測乙肝病毒分型檢測拉米夫定耐藥檢測拉米夫定耐藥檢測阿德福韋耐藥檢測阿德福韋耐藥檢測共價(jià)閉合環(huán)狀共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)檢測檢測恩替卡韋耐藥檢測恩替卡韋耐藥檢測乙肝病毒檢測的方法學(xué)評(píng)價(jià)FQ-PCR檢測的優(yōu)勢(shì) 靈敏度高可以達(dá)到靈敏度高可以達(dá)到 pg pg 級(jí)而級(jí)而 ELISA ELISA 只能檢測只能檢測 ngng級(jí)，級(jí)，可以檢測包括乳汁的其他低含量的標(biāo)本可以檢測包括乳汁的其他低含量的標(biāo)本; ; 不受病毒變異影響，而前不受