基因擴增實驗室常用儀器的使用

1、 基因擴增實驗室常用儀器設(shè)備的使用和維護PCR熱循環(huán)儀（DNA擴增儀）高速( 冷凍)離心機漩渦振蕩混旋器恒溫水浴箱/ /恒溫金屬浴洗板機（PCR-ELISA)PCR-ELISA)酶標(biāo)儀(PCR-ELISA)(PCR-ELISA)加樣器PCR熱循環(huán)儀（DNA擴增儀） PCR擴增儀的原理及發(fā)展?fàn)顩r： PCRPCR擴增儀原理 國內(nèi)常見擴增儀簡介 國內(nèi)常見熒光定量PCR儀簡介 PCR擴增儀的使用與保養(yǎng) 變性:如94C 退火:如55C 延伸:如72C溫溫度度變變化化快快，時時間間準準確確，溫溫度度可可調(diào)調(diào)，合合適適 于于試試驗驗研研究究，省省時時、省省力力效效果果明明顯顯。 （2 2）空氣驅(qū)動循環(huán)恒溫裝

2、置（3）變溫金屬塊作恒溫裝置國內(nèi)常見擴增儀簡介2400型DNA擴增系統(tǒng)( 美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司） 最大樣本數(shù)：可同時擴增3 3* *8 8個0.2ml PCR0.2ml PCR反應(yīng)管。 溫度范圍：4-99.94-99.9 加熱冷卻速度：樣本實際升降溫速度平均為1/1/秒。 靜態(tài)樣本均衡性： 0.50.5，35-10035-100范圍。 溫度精度：35-10035-100間誤差小于0.750.75。 特點：所附加熱蓋保證防止樣品蒸發(fā)，無需加石蠟油操作，滿足最小5 5 l l體積；擴增反應(yīng)的要求；可儲存6868個PCRPCR方法，每個方法包括PCRPCR前處理，保溫，PCRPCR循環(huán)及PCRPCR

3、擴增后保溫條件；斷電后有自動啟動功能。PTC-200 熱循環(huán)儀（MJ公司產(chǎn)品）Eppendorf梯度PCR儀PCR擴增儀的使用與保養(yǎng)PCR擴增儀的使用與保養(yǎng)國內(nèi)常見熒光定量PCR儀簡介LightCycler (Roche)Rotor-Gene (Corbett Research)ABI Prism (Applied Biosystems)GeneAmp 5700GeneAmp 5700型熒光定量PCRPCR儀儀器特點GeneAmp 5700GeneAmp 5700型熒光定量PCRPCR儀 影響測定結(jié)果的因素用用Taqman探探針針進行HBV檢測 (深圳 試劑盒)用用Taqman探探針針進行HC

4、V檢測(深圳試劑盒)Lightcycler 熒光定量PCR系統(tǒng) 原理和特點 可使用外標(biāo)法定量，可加內(nèi)對照，可做熔點曲線分析。 單一光路的三個檢測點對樣本同時進行三個波長的熒光檢測，擴贈與檢測同時進行，提供實時分析和在線監(jiān)測。引入獨特的顏色補償試劑和軟件以消除個檢測通道其它染料熒光的干擾。 一次可做32個樣本。 公用熱室，保證單次PCR個樣本的狀況連續(xù)一致。循環(huán)速度快，20-30分鐘完成30-40個循環(huán)，一次檢測樣本數(shù)32個。Lightcycler 熒光定量PCR系統(tǒng)ABI 7000ABI 7000型熒光定量PCRPCR儀檢測原理和特點檢測原理和特點高速( 冷凍)離心機使用方法注意事項維護和保養(yǎng)

5、使用方法注意事項造成事故。注意事項根據(jù)RCFRCF計算公式，減小離心體積。維護和保養(yǎng)洗板機機理及主要類型選購洗板機的注意事項洗板機使用中注意事項基因擴增實驗室應(yīng)備有4套連續(xù)可調(diào)加樣器，分別用于試劑準備、樣本處理、擴增和產(chǎn)物檢測四個試驗區(qū)。加樣器加樣器的類型加樣器的使用吸液的位置 把按鈕壓至第一停點垂直握持移液器，使吸嘴浸入液樣中，浸入液體深度視型號而定： P2和P10 1mm P20和P100 2-3mm P200和P1000 2-4mm P5000 3-6mm P10ML 5-7mm設(shè)定容量值 設(shè)定容量 容量計讀數(shù)由三位撥號數(shù)字組成（顯示所轉(zhuǎn)移液體容量） ，從上（最大有效數(shù)字）到下（最小有效

6、數(shù)字）讀取。利用底部刻度可將容量調(diào)節(jié)到更精確的分度。根據(jù)型號不同，數(shù)字可能是黑色或紅色的。 P2 P10 P20 P100 P200 1 0 1 0 1 2 7 2 7 2 5 5 5 5 5 1.25l7.5l 12.5l 75l 125lP型移液器的應(yīng)用范圍P型移液器技術(shù)指標(biāo)(1)(GILSON)型號 容量 準確度（標(biāo)準誤差） 精度（重復(fù)性）2 (L) 絕對誤差(L) 相對誤差(%) 標(biāo)準誤差(L) 相對離差(%)P2 最小 0.2 0.024 12 0.012 6 0.5 0.025 5 0.012 2.50 最大 2 0.030 1.5 0.014 0.70P10最小 1 0.025

7、2.5 0.012 1.25 5 0.075 1.5 0.030 0.60 最大 10 0.10 1 0.040 0.40P20 最小 2 0.1 5.0 0.03 1.50 5 0.1 2.0 0.04 0.80 10 0.1 1.0 0.05 0.50 最大 20 0.2 1.0 0.06 0.30P型移液器技術(shù)指標(biāo)(2) (GILSON)型號 容量 準確度（標(biāo)準誤差） 精度（重復(fù)性）2 (L) 絕對誤差(L) 相對誤差(%) 標(biāo)準誤差(L) 相對離差(%)P100 最小 20 0.35 1.8 0.10 0.5 50 0.4 0.8 0.12 0.24 最大 100 0.8 0.8 0.

8、15 0.15P200最小 50 0.5 1 0.2 0.40 100 0.8 0.8 0.25 0.25 最大 200 1.6 0.8 0.30 0.15P1000 最小 200 3.0 1.5 0.6 0.3 500 4.0 0.8 1.0 0.2 最大 1000 8.0 0.8 1.5 0.15P型移液器技術(shù)指標(biāo)(3) (eppendorf)型號 容量 (L) 不準確度(%) 不精密度(%)P10 最小 0.5 5.0 2.8 1 2.5 1.8 最大 10 1.0 0.4P20最小 2 5.0 1.5 最大 20 1.0 0.3P100 最小 10 3.0 1.0 最大 100 0.8

9、 0.2 P200 最小 20 2.5 0.7 最大 200 0.6 0.2P1000 最小 100 3.0 0.6 最大 1000 0.6 0.2 加樣器的校準 校準環(huán)境和用具要求： 室 溫：2025，測定中波動范圍不大于0.50.5。 電子天平：放置于無塵和震動影響的臺面上，房間盡可能有空調(diào)。稱量時，為保證天平內(nèi)的濕度（相對濕度60-60-90%90%），天平內(nèi)應(yīng)放置一裝有10 ml10 ml蒸餾水的小燒杯。 小燒杯： 5 510 ml10 ml體積。 測定液體：溫度為2025的去氣雙蒸水。 選定校準體積：（擬校準體積；（加樣器標(biāo)定體積的中間體積；（最小可調(diào)體積（不小于擬校準體積的10%）

10、。 如為固定體積加樣器，則只有一種校準體積。 校準步驟： 將加樣器調(diào)至擬校準體積，選擇合適的吸頭； 調(diào)節(jié)好天平； 來回吸吹蒸餾水3次，以使吸頭濕潤，用紗布拭干吸頭 垂直握住加樣器，將吸頭浸入液面23 mm處，緩慢（13秒）一致地吸取蒸餾水； 將吸頭離開液面，靠在管壁，去掉吸頭外部的液體；將加樣器以30角放入稱量燒杯中，緩慢一致地將加樣器壓至第一 檔，等待13秒，再壓至第二檔，使吸頭里的液體完全排出； 記錄稱量值； 擦干吸頭外面； 按上述步驟稱量10次； 取10次測定值的均值作為最后加樣器吸取的蒸餾水重量，按附表所列蒸餾水Z因子計算體積。按校準結(jié)果調(diào)節(jié)加樣器。注意事項 根據(jù)所需取液量選擇相應(yīng)的移

11、液器及吸頭，基因擴增實驗要求使用帶濾芯的吸頭，防止交叉污染。吸取液體時應(yīng)緩慢勻速吸取，避免液體濺到移液器頭上；打出液體后拇指不應(yīng)松開按鈕，將吸液嘴壓掉后再將拇指松開，避免液體回吸。在調(diào)整取液量的旋鈕時，不要用力過猛，并應(yīng)注意計數(shù)器顯示的數(shù)值不要超過其可調(diào)范圍。連續(xù)可調(diào)式移液器不可在無吸頭時使用，吸頭有液體時不可平放或倒置。注意事項 操作時要慢和穩(wěn)，吸嘴浸入液體深度要合適，吸液過程盡量保持不變；改吸不同液體、樣品或試劑前要換新吸嘴；發(fā)現(xiàn)吸嘴內(nèi)有殘液時必須更換；新吸嘴使用前應(yīng)先預(yù)測。 為防止液體進入移液器套筒內(nèi)，注意以下幾點：壓放按鈕時保持平穩(wěn)；移液器不得倒轉(zhuǎn)；吸嘴中有液體時不可將移液器平放；P5

12、000及P10ML移液器一定要加過濾芯。 切勿用油脂等潤滑活塞或密封圈。 使用了酸或有腐蝕蒸氣的溶液后，最好拆下套筒，用蒸餾水清洗活塞及密封圈。注意事項連續(xù)可調(diào)式移液器在取樣加樣過程中應(yīng)注意移液嘴不能觸及其他物品，以免被污染；移液嘴盒（架子）、廢液瓶、所取試劑及加樣的樣品管應(yīng)擺放合理，以方便操作過程、避免污染為原則。連續(xù)可調(diào)式移液器在使用完畢后應(yīng)置于以液器架上，遠離潮濕及腐蝕性物質(zhì)。在取液之前，所取液體應(yīng)在室溫（15-25 C）平衡；液體溫度與室溫有異時，將吸嘴預(yù)洗多次再用；移液溫度不得超過70。不可把容量計數(shù)調(diào)超其適用范圍。維護 加樣器應(yīng)根據(jù)使用頻率進行維護，但至少應(yīng)每3個月進行一次，具體方

13、法如下：1一般維護可用中性洗滌劑（如洗餐具用的洗滌靈）清潔，或者用60%的異丙醇，然后用蒸餾水反復(fù)洗滌，去除洗滌劑或異丙醇，晾干。清潔后活塞處可使用一定量的潤滑劑。2如果有液體進入加樣器內(nèi)的嚴重污染，可以將加樣器拆開后進行清潔，具體拆開步驟參照加樣器說明書（不同的加樣器的拆開方式有所不同）。3高壓消毒，有的加樣器的吸管部分可高壓消毒（121及1巴壓力下消毒20分鐘），如Eppendor的Research單道可調(diào)加樣器。但消毒時不可超溫超時，也不能擠壓放置，以免造成變型。4各區(qū)（試劑準備、樣本提取、擴增和產(chǎn)物檢測）的加樣器應(yīng)有各自的標(biāo)識，清潔和消毒 時，應(yīng)分別處理。PCR擴增儀的使用與保養(yǎng)PCR

14、擴增儀的使用與保養(yǎng)維護和保養(yǎng)洗板機加樣器的類型加樣器的類型加樣器的校準 校準環(huán)境和用具要求： 室 溫：2025，測定中波動范圍不大于0.50.5。 電子天平：放置于無塵和震動影響的臺面上，房間盡可能有空調(diào)。稱量時，為保證天平內(nèi)的濕度（相對濕度60-60-90%90%），天平內(nèi)應(yīng)放置一裝有10 ml10 ml蒸餾水的小燒杯。 小燒杯： 5 510 ml10 ml體積。 測定液體：溫度為2025的去氣雙蒸水。 選定校準體積：（擬校準體積；（加樣器標(biāo)定體積的中間體積；（最小可調(diào)體積（不小于擬校準體積的10%）。 如為固定體積加樣器，則只有一種校準體積。維護 加樣器應(yīng)根據(jù)使用頻率進行維護，但至少應(yīng)每3個月進行一次，具體方法如下：1一般維護可用中性洗滌劑（如洗餐具用的洗滌靈）清潔，或者用60%的異丙醇，然后用蒸餾水反復(fù)洗滌，去除洗滌劑或異丙醇