多維色譜分析在蛋白質(zhì)檢測(cè)中的應(yīng)用

1、多維色譜分析在蛋白質(zhì)檢測(cè)中的應(yīng)用目標(biāo)蛋白質(zhì)其它特征等電點(diǎn)分子大小帶電狀況疏水性目標(biāo)蛋白的特征相對(duì)分子質(zhì)量 根據(jù)以上信息，首先進(jìn)行第一維分離,然后將第一維餾分再進(jìn)行第二維分離。為了得到最大的分離效率,必須注意以下兩點(diǎn): 1. 理想情況下,各維應(yīng)具有完全不同的分離機(jī)制;2. 高維的分離速度應(yīng)快于低維的分離速度,以避免已分開 的組分在高維分離中重新混合。形狀圖案形狀：第一維圖案：第二維Giddings 理論 多維色譜的總峰容量(P)等于每一維的峰容量(Pi)的乘積。P=P1P2P3 假如兩種分離系統(tǒng)都有100的峰容量,那么良好的二維系統(tǒng)理論上可產(chǎn)生10000的峰容量。 Giddings指出峰容量的提

2、高程度和樣品組分分布的有序程度有著密切的關(guān)系。 與一維分離模式相比,多維分離技術(shù)的最大特點(diǎn)是可極大地提高峰容量。樣品維數(shù)(sample dimen-sionality) 只有當(dāng)這兩個(gè)維數(shù)相等時(shí),才能充分發(fā)揮多維系統(tǒng)的分離能力。樣品維數(shù)大于系統(tǒng)維數(shù)：組分的峰分布是無(wú)序的,會(huì)限制分離的效果。樣品維數(shù)小于系統(tǒng)維數(shù)： 盡管組分的峰分布是有序的,但多維系統(tǒng)的高峰容量的性能并沒(méi)有得到發(fā)揮。無(wú)法識(shí)別?1. 多維高效液相色譜(HPLC)3. 多維高效液相色譜-毛細(xì)管電泳(HPLC-CE)2. 多維毛細(xì)管電泳(CE)常見的多維色譜分析法多維高效液相色譜(HPLC) 即是將分離機(jī)理不同而又相互獨(dú)立的兩支色譜柱串聯(lián)

3、起來(lái)構(gòu)成的分離系統(tǒng)。 樣品經(jīng)過(guò)第一維的色譜柱進(jìn)入接口中,通過(guò)濃縮、捕集或切割后被切換進(jìn)入第二維色譜柱及檢測(cè)器中。 在一維分離系統(tǒng)中不能完全分離的組分,可能在二維系統(tǒng)中得到更好的分離,分離能力、分辨率得到極大的提高。 以二維液相色譜為例：多維高效液相色譜技術(shù)在實(shí)際蛋白質(zhì)檢測(cè)中又分為：整體蛋白質(zhì)混合物的多維色譜分離技術(shù)。多肽混合物的分離技術(shù)。例在研究白血病細(xì)胞系蛋白質(zhì)組時(shí)待檢測(cè)蛋白質(zhì)混合物二維液相色譜分離-多維色譜預(yù)分離色譜聚焦根據(jù)不同蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同進(jìn)行分離非多孔填料的反相柱收集餾分濃縮和酶解基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDITOFMS)預(yù)處理后的餾分蛋白質(zhì)鑒定系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫(kù) 另外,色譜

4、分離還可與其他分離手段相結(jié)合,用于蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究中。離子交換色譜-反相液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)計(jì)算機(jī)檢索(鑒定混合物中的蛋白質(zhì)) 。樣品(細(xì)胞、組織等)Trypsin 酶解多肽混合物陽(yáng)離子色譜柱(第一維色譜:強(qiáng)陽(yáng)離子交換色譜分離,階梯梯度洗脫)進(jìn)樣強(qiáng)陽(yáng)離子交換色譜餾分進(jìn)樣RP-HPLC(第二維色譜: RP-HPLC 分離,線性梯度洗脫)RP-HPLC 分離餾分進(jìn)樣MS ,MS/ MS (多肽序列分析)色譜聚焦-反相液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)。親和色譜-反相液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)。(1)毛細(xì)管電泳的緩沖液通常是高離子強(qiáng)度、低揮發(fā)性,與質(zhì)譜的兼容性較差; 與LC-MS 聯(lián)用相比, CE-MS 聯(lián)

5、用技術(shù)在生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用尚處于起步階段, 其關(guān)鍵問(wèn)題在于CE 與MS 的接口尚不能滿足需要。主要原因是:(2) 二者的工作速度不匹配。多維毛細(xì)管電泳(CE)實(shí)際操作中二維液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用多維高效液相色譜裝置圖多維高效液相色譜裝置圖1999 年年Link 等提出了一種新型的多維蛋白質(zhì)識(shí)別技術(shù)等提出了一種新型的多維蛋白質(zhì)識(shí)別技術(shù)謝謝觀看！Column HPLC 色譜柱色譜柱 MOS制作 2005.12.27多維高效液相色譜技術(shù)在實(shí)際蛋白質(zhì)檢測(cè)中又分為：整體蛋白質(zhì)混合物的多維色譜分離技術(shù)。多肽混合物的分離技術(shù)。例基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDITOFMS)預(yù)處理后的餾分蛋白質(zhì)鑒定系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫(kù) 另外,色譜分離還可與其他分離手段相結(jié)合,用于蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究中。離子交換色譜-反相液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)計(jì)算機(jī)檢索(鑒定混合物中的蛋白質(zhì)) 。樣品(細(xì)胞、組織等)Trypsin 酶解多肽混合物陽(yáng)離子色譜柱(第一維色譜:強(qiáng)陽(yáng)離子交換色譜分離,階梯