分離以尿素為氮源的微生物(上課)

1、此實(shí)驗(yàn)課題意義何在？此實(shí)驗(yàn)課題意義何在？怎么怎么分離分離出能分解尿素的微生物呢？出能分解尿素的微生物呢？菌種可能在什么環(huán)境中較多？菌種可能在什么環(huán)境中較多？氮源真的唯一嗎？氮源真的唯一嗎？ 1、瓊脂作為微生物固體培養(yǎng)基不可缺少的組成瓊脂作為微生物固體培養(yǎng)基不可缺少的組成 成分，成分，其其優(yōu)點(diǎn)是：優(yōu)點(diǎn)是： 其主要成分不能被微生物利用；其主要成分不能被微生物利用； 可使培養(yǎng)基可使培養(yǎng)基固化固化； 不影響不影響培養(yǎng)基中其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被培養(yǎng)基中其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被微生物微生物吸收。吸收。2、瓊脂的成分、瓊脂的成分 瓊脂是一種未被純化的混合物，主要成分為瓊脂是一種未被純化的混合物，主要成分為瓊瓊脂糖脂糖和和瓊脂

2、果膠，瓊脂果膠，還含有少量的還含有少量的含氮化合物含氮化合物，及其，及其它有機(jī)雜質(zhì)和不溶性雜質(zhì)。它有機(jī)雜質(zhì)和不溶性雜質(zhì)。用用瓊脂糖瓊脂糖代替瓊脂作為微生物培養(yǎng)基的固化劑代替瓊脂作為微生物培養(yǎng)基的固化劑. . 盡可能使培養(yǎng)基中只含盡可能使培養(yǎng)基中只含尿素尿素一種含氮化合一種含氮化合物，以防止瓊脂中的物，以防止瓊脂中的含氮化合物含氮化合物被以尿素為氮被以尿素為氮源的細(xì)菌利用，有利于對(duì)這類(lèi)細(xì)菌的篩選。源的細(xì)菌利用，有利于對(duì)這類(lèi)細(xì)菌的篩選。對(duì)培養(yǎng)基的滅菌方法？對(duì)培養(yǎng)基的滅菌方法？G6玻璃砂漏斗過(guò)濾玻璃砂漏斗過(guò)濾以尿素為以尿素為唯一氮源唯一氮源的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)基 是是分

3、離分離尿素尿素細(xì)菌細(xì)菌判斷該判斷該培養(yǎng)基培養(yǎng)基有無(wú)選有無(wú)選擇性擇性實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)組 對(duì)照組對(duì)照組培養(yǎng)基類(lèi)型培養(yǎng)基類(lèi)型是否是否接種接種 目的目的 結(jié)果結(jié)果只生長(zhǎng)尿只生長(zhǎng)尿素細(xì)菌素細(xì)菌生長(zhǎng)多種生長(zhǎng)多種微生物微生物是是選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基平板劃線法平板劃線法 稀釋涂布法稀釋涂布法 從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中取樣。先鏟去表層從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中取樣。先鏟去表層土土3cm3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先左右，再取樣，將樣品裝入事先滅菌滅菌好的好的信封中。信封中。取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。前都要滅菌。制備以尿素為唯一氮源的制備以尿素為唯一氮源的選擇性培

4、養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基。制備基礎(chǔ)培養(yǎng)基。制備基礎(chǔ)培養(yǎng)基。移液槍（微量可調(diào)移液管）移液槍（微量可調(diào)移液管）稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)目的目的細(xì)菌細(xì)菌10104 4、10105 5、10106 6放線菌放線菌10103 3、10104 4、10105 5真菌真菌10102 2、10103 3、10104 4 實(shí)驗(yàn)中提供的選擇培養(yǎng)基的配方實(shí)驗(yàn)中提供的選擇培養(yǎng)基的配方中，尿素是培養(yǎng)基中的中，尿素是培養(yǎng)基中的惟一氮源惟一氮源，因此，因此，原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)。但實(shí)際上，微生物的培養(yǎng)是一個(gè)非生長(zhǎng)。但實(shí)際上，微生物的培養(yǎng)是一個(gè)非常復(fù)雜的問(wèn)題，有些微生物可以利用其他常復(fù)

5、雜的問(wèn)題，有些微生物可以利用其他微生物的代謝產(chǎn)物生長(zhǎng)繁殖，因此能夠在微生物的代謝產(chǎn)物生長(zhǎng)繁殖，因此能夠在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物不一定是所需選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物不一定是所需要的微生物，還需要進(jìn)一步的驗(yàn)證。要的微生物，還需要進(jìn)一步的驗(yàn)證。 在在實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)中，酚紅酚紅作為酸堿指示劑被添加到作為酸堿指示劑被添加到了培養(yǎng)基中，其變色范圍是了培養(yǎng)基中，其變色范圍是pH6.4pH6.48.28.2，在酸，在酸性情況下呈性情況下呈黃黃色，堿性情況下呈色，堿性情況下呈紅紅色，色，這種添這種添加了酸堿指示劑的培養(yǎng)既可以加了酸堿指示劑的培養(yǎng)既可以鑒鑒別和分離別和分離出能出能夠產(chǎn)生脲酶分解尿素的微生物，稱為夠

6、產(chǎn)生脲酶分解尿素的微生物，稱為鑒別培鑒別培養(yǎng)基養(yǎng)基。 尿素在被脲酶催化分解前是尿素在被脲酶催化分解前是中性中性的，由于尿素在的，由于尿素在脲酶的催化下分解產(chǎn)生了脲酶的催化下分解產(chǎn)生了NH3NH3，溶液會(huì)呈，溶液會(huì)呈堿堿性。性。 鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基 酚紅酚紅選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基六、例題解析六、例題解析 例例1 1對(duì)細(xì)菌群體生長(zhǎng)規(guī)律測(cè)定的正確的表述是對(duì)細(xì)菌群體生長(zhǎng)規(guī)律測(cè)定的正確的表述是A A在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行 B B至少接種一種細(xì)菌至少接種一種細(xì)菌 C C接種一個(gè)細(xì)菌接種一個(gè)細(xì)菌 DD及時(shí)補(bǔ)充消耗的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及時(shí)補(bǔ)充消耗的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 解析：細(xì)菌群體解析：細(xì)菌群體

7、生長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定生長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定是人們?cè)谝欢l件下進(jìn)行的。是人們?cè)谝欢l件下進(jìn)行的。這些條件是：一這些條件是：一種細(xì)菌、恒定容積的培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基、定種細(xì)菌、恒定容積的培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基、定時(shí)測(cè)定細(xì)菌總數(shù)時(shí)測(cè)定細(xì)菌總數(shù)。在這些條件下，才能測(cè)定出細(xì)菌的生長(zhǎng)規(guī)律。在這些條件下，才能測(cè)定出細(xì)菌的生長(zhǎng)規(guī)律。測(cè)定時(shí)只能用一種細(xì)菌的子細(xì)胞群體的變化規(guī)律表達(dá)微生物的測(cè)定時(shí)只能用一種細(xì)菌的子細(xì)胞群體的變化規(guī)律表達(dá)微生物的生長(zhǎng)；恒定容積是給微生物提供一定的生存環(huán)境；液體培養(yǎng)基生長(zhǎng)；恒定容積是給微生物提供一定的生存環(huán)境；液體培養(yǎng)基才能通過(guò)樣品推測(cè)細(xì)菌總數(shù)。若接種多種細(xì)菌，則會(huì)發(fā)生種間才能通過(guò)樣品推測(cè)細(xì)菌總數(shù)。若接種

8、多種細(xì)菌，則會(huì)發(fā)生種間斗爭(zhēng)而不能測(cè)定一種微生物的生長(zhǎng)規(guī)律。在接種時(shí)，要保證一斗爭(zhēng)而不能測(cè)定一種微生物的生長(zhǎng)規(guī)律。在接種時(shí)，要保證一定的接種量。定的接種量。答案：答案：A A例例2 2在微生物群體生長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定中，種內(nèi)在微生物群體生長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定中，種內(nèi)斗爭(zhēng)最顯著最激烈的時(shí)期是斗爭(zhēng)最顯著最激烈的時(shí)期是A A調(diào)整期調(diào)整期 B B對(duì)數(shù)期對(duì)數(shù)期 C C穩(wěn)定期穩(wěn)定期 DD衰亡期衰亡期解析：種內(nèi)斗爭(zhēng)是一種生態(tài)因素。種內(nèi)斗爭(zhēng)反應(yīng)了種內(nèi)生物解析：種內(nèi)斗爭(zhēng)是一種生態(tài)因素。種內(nèi)斗爭(zhēng)反應(yīng)了種內(nèi)生物對(duì)生存空間和生活資源的爭(zhēng)奪。在生活空間充裕，營(yíng)養(yǎng)充足的時(shí)對(duì)生存空間和生活資源的爭(zhēng)奪。在生活空間充裕，營(yíng)養(yǎng)充足的時(shí)候，種內(nèi)斗

9、爭(zhēng)的程度是比較低的。隨著微生物個(gè)體數(shù)目的增加，候，種內(nèi)斗爭(zhēng)的程度是比較低的。隨著微生物個(gè)體數(shù)目的增加，每個(gè)個(gè)體的生存空間越來(lái)越少，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)也越來(lái)越少，每個(gè)個(gè)體每個(gè)個(gè)體的生存空間越來(lái)越少，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)也越來(lái)越少，每個(gè)個(gè)體對(duì)生存空間和資源的爭(zhēng)奪也越來(lái)越激烈，種內(nèi)斗爭(zhēng)就越來(lái)越激烈。對(duì)生存空間和資源的爭(zhēng)奪也越來(lái)越激烈，種內(nèi)斗爭(zhēng)就越來(lái)越激烈。由此可知，在由此可知，在穩(wěn)定期穩(wěn)定期的種內(nèi)斗爭(zhēng)最激烈。在衰亡期，微生物的數(shù)的種內(nèi)斗爭(zhēng)最激烈。在衰亡期，微生物的數(shù)目已經(jīng)開(kāi)始減少，目已經(jīng)開(kāi)始減少，pHpH已經(jīng)極度不適于微生物的生存，次級(jí)代謝產(chǎn)已經(jīng)極度不適于微生物的生存，次級(jí)代謝產(chǎn)物積累到很高的程度，這時(shí)的微生物的生存斗爭(zhēng)

10、主要是與無(wú)機(jī)環(huán)物積累到很高的程度，這時(shí)的微生物的生存斗爭(zhēng)主要是與無(wú)機(jī)環(huán)境的斗爭(zhēng)。境的斗爭(zhēng)。答案：答案：C C1.1.對(duì)細(xì)菌群體生長(zhǎng)規(guī)律測(cè)定的正確的表述是（對(duì)細(xì)菌群體生長(zhǎng)規(guī)律測(cè)定的正確的表述是（ ） A.A.在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行 B.B.至少接種一種細(xì)菌至少接種一種細(xì)菌 C.C.接種一個(gè)細(xì)菌接種一個(gè)細(xì)菌 D.D.及時(shí)補(bǔ)充消耗的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及時(shí)補(bǔ)充消耗的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 2.2.使用選擇培養(yǎng)基的目的是（使用選擇培養(yǎng)基的目的是（ ） A.A.培養(yǎng)細(xì)菌培養(yǎng)細(xì)菌 B.B.培養(yǎng)真菌培養(yǎng)真菌 C.C.使需要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖 D.D.表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別表現(xiàn)某微

11、生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別3.3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是( )( ) A.CO A.CO2 2和和N N2 2 B. B.葡萄糖和葡萄糖和NHNH3 3 C.COC.CO2 2和尿素和尿素 D.D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素A AC CD D4.4.下列說(shuō)法不正確的是（下列說(shuō)法不正確的是（ ） A.A.科學(xué)家從科學(xué)家從70708080度熱泉中分離到耐高溫的度熱泉中分離到耐高溫的TaqDNATaqDNA聚聚合酶合酶 B.B.統(tǒng)計(jì)某一稀釋度的統(tǒng)計(jì)某一稀釋度的5 5個(gè)平板的菌落數(shù)依次為個(gè)平板的菌落數(shù)依次為M1M1、M2M2、M3M3

12、、M4M4、M5M5，以，以M3M3作為該樣品菌落數(shù)的估計(jì)值作為該樣品菌落數(shù)的估計(jì)值 C.C.設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度 D.D.同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數(shù)量最大，同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數(shù)量最大，種類(lèi)最多。種類(lèi)最多。5.5.為培養(yǎng)和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養(yǎng)基中為培養(yǎng)和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養(yǎng)基中加入（）加入（） A.A.較多的氮源物質(zhì)較多的氮源物質(zhì) B.B.較多的碳源物質(zhì)較多的碳源物質(zhì) C.C.青霉素類(lèi)藥物青霉素類(lèi)藥物 D.D.高濃度食鹽高濃度食鹽B BC C例例3 3（20052005年江蘇）抗生素作為治療細(xì)菌感年江蘇）抗生素作為治療細(xì)菌感染的藥物，其高效性和巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值使抗生素工業(yè)染的藥物，其高效性和巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值使抗生素工業(yè)經(jīng)久不衰。其中青霉素的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用具有劃時(shí)代的意經(jīng)久不衰。其中青霉素的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用具有劃時(shí)代的意義。義。青霉素發(fā)酵產(chǎn)生青霉素。青霉菌的新陳代謝類(lèi)型青霉素發(fā)酵產(chǎn)生青霉素。青霉菌的新陳代謝類(lèi)型是是 ， 青霉素是青霉菌的青霉素是青霉菌的 代謝產(chǎn)物。代謝產(chǎn)物。在生產(chǎn)和科研中，常選用處于在生產(chǎn)和科研中，常選用處于 期的青霉菌作期的青霉菌作為菌種或研究材料，因?yàn)榇藭r(shí)的青霉菌代謝旺盛，為