革蘭染色實(shí)驗(yàn)報(bào)告記錄

1、革蘭染色實(shí)驗(yàn)報(bào)告記錄作者:日期:實(shí)驗(yàn)原理:1） G+菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)較致密，肽聚糖層厚，脂質(zhì)含量少，乙醇不易透 入；同時(shí)乙醇使細(xì)胞壁脫水形成一道屏障，阻止結(jié)晶紫一碘復(fù)合物從 胞內(nèi)滲出。G-菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)疏松，肽聚糖層很薄，而外膜、脂蛋白、 脂多糖又均含大量脂質(zhì)，易被乙醇溶解，導(dǎo)致細(xì)胞壁通透性增加，胞 內(nèi)結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被乙醇溶解析出而脫色。2） G+菌等電點(diǎn)（PI23）比G-菌（PI45）低，在相同PH條件下，G+ 菌所帶負(fù)電荷比G-菌多，故與帶電的結(jié)晶紫染料結(jié)合牢固，不易脫 色。實(shí)驗(yàn)步驟：一、標(biāo)本的制備：1、涂片：取玻片在火焰上稍微加溫，以清潔紗布擦凈，放置桌上，左手握菌種管，有搜持接種環(huán)，用無

2、菌接種環(huán)取生理鹽水一滴，置于載玻片 的中央，再用接種環(huán)在火焰上滅菌，待冷卻后，取斜面培養(yǎng)的葡萄球 菌或大腸桿菌少許與鹽水混勻，直接取12環(huán)菌液作涂片即可，涂片 應(yīng)厚薄均勻。接種環(huán)采菌后，要通過火焰滅菌才能放下。2、干燥：目的是是菌體水分慢慢蒸發(fā)，固定菌形。涂片最好在室溫中自然 干燥，必要是將標(biāo)本面向上，小心斷續(xù)在弱火高處略烘，以助水分蒸 發(fā)；但切勿緊靠火焰，以致標(biāo)本烤枯，不堪檢視。3、固定：手執(zhí)玻片一端，標(biāo)本面向上，在火焰外層快速地來回通過三次， 共2-3秒，以玻片反面觸及皮膚不覺過燙為度。冷卻后，染色。目的 是殺死細(xì)菌，是菌體與玻片粘附較牢以及改變對(duì)染料的通透性，因活的細(xì)菌一般不能使許多染料

3、進(jìn)入細(xì)胞。二、染色1、初染：將涂片標(biāo)本夾持于左手，滴加結(jié)晶紫溶液蓋滿涂抹面，染色13分鐘, 用流水緩緩沖洗（即將龍頭打開使水緩慢流出，將玻片傾斜使水在玻 片面上端沿玻片流下沖洗染液）直至無顏色流下為止。2、媒染：加盧戈氏染液45滴作用30秒到一分鐘，再按上法沖洗，并將片上 積水輕輕灑凈。3、脫色：在95%酉精缸中脫色約35秒，拿出玻片使酒精由玻片流下，如此反 復(fù)23次，直至流下酒精略呈淡紫色為止，現(xiàn)按上法以流水沖洗，并 將玻片輕輕灑凈。4、復(fù)染：用稀釋石炭酸-復(fù)紅（或沙黃液）復(fù)染半分鐘后按上法沖洗。5、鏡檢。實(shí)驗(yàn)結(jié)果： G+W萄球菌被染成紫色；G-大腸桿菌被染成紅色。 實(shí)驗(yàn)分析： 實(shí)驗(yàn)中有些組的大腸桿菌被染成了紫色，而實(shí)際卻 應(yīng)該為紅色，這有可能與脫色的時(shí)間過少有關(guān)，因而將其染成紫色,成為假陽性。還有一些組將葡萄球菌染成紅