(完整版)微生物思考題及參考答案

1、微生物思考題及參考答案1. 用油鏡觀察時應注意哪些問題？在載玻片和鏡頭之間加滴什么油？起什么作用？答：應該先用擦鏡紙將鏡頭擦干凈，以防上次實驗的污染操作時，先低倍再高倍用完要 擦掉油.加香柏油，作用是增加折光率，也就是增加了顯微鏡的分辨率 油的折光率和分 辨率成反比（有公式）,同時與波長成正比2什么是物鏡的同焦現(xiàn)象？它在顯微鏡觀察中有什么意義？答：在一般情況下，當物像在一種物鏡中已清晰聚焦后，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn) 到工作位置進行觀察時，物像將保持基本準焦的狀態(tài)，這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦。利用 這種同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時僅用 細調(diào)節(jié)器即可對物像清

2、晰聚焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時可能的誤操作而損壞鏡頭 或載玻片。3. 影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？答：物鏡的NA值（物鏡的數(shù)值孔徑）與照明光源的波長.4. 美藍染色液作用時間的不同，對酵母菌死細胞數(shù)量有何影響，試分析原因答：會造成更多的死細胞，在顯微鏡下觀察，活的是透明無色，衰老的是淡藍色，死亡 的是藍色，如果美藍染色液作用時間過長，會造成細胞脫水死亡并滲透染液，影響實驗 結(jié)果。5. 鏡檢時如何區(qū)分放線菌基內(nèi)菌絲，氣生菌絲以及抱子絲一般氣生菌絲顏色較深，直生或分枝絲狀，比基內(nèi)菌絲粗；而基內(nèi)菌絲色淺、發(fā)亮，可 看到橫隔膜，繼而斷裂成球狀或桿狀小體。6. 在進行細菌涂片時應注意哪些環(huán)節(jié)1、載

3、玻片應該冷卻后再涂片。2、如果是涂布液體，可以用毛細管或接種環(huán)滴一小滴，然后輕輕抹開，一圈足夠。3、如果是涂布菌落或菌苔，應該在載玻片上先滴一滴水，再將菌落或菌苔涂布上去，接種環(huán)的尖蘸一點點即可。4、為了節(jié)省時間，可以將干燥和熱固定合并成一步。但是應該避免高溫，因為溫度一高，細菌會變形。5、染色時間視染色液種類而定。如結(jié)晶紫只需幾十秒，亞甲基藍則需一到兩分鐘。6、沖洗時，水流不能太大，而且盡量避免水流直接沖在涂片上。7、沖洗后干燥，可以用酒精燈加熱以節(jié)省時間，同樣的，應該避免高溫，因為溫度一高，細菌會變形。7. 進行細菌制片時為什么要進行加熱固定？在加熱固定時應注意什么？固定的目的有三個：1）

4、殺死微生物，固定細胞結(jié)構(gòu)。2）保證菌體能更牢的粘附在載玻片上，防止標本被水沖洗掉。3）改變?nèi)玖蠈毎耐ㄍ感?，因為死的原生質(zhì)比活的原生質(zhì)易于染色。固定時應注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火過3次（手指觸摸玻片反面，不燙手為宜）： 固定時應盡可能維持細胞原有形態(tài)，防止細胞膨脹或收縮。8. 為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察1. 因為用油鏡觀察時 ,鏡頭離玻片會很近 . 如果未完全干燥 ,載玻片上的液體會污染油鏡 鏡頭.鏡頭非常精密 ,被污染后不利于下次觀察 .2 、若未完全干燥，水滴會影響油與玻璃 之間折光率，造成視野不夠清晰。9. 哪些環(huán)節(jié)會影響革蘭色染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么

5、？ 答：涂片環(huán)節(jié)、加熱固定環(huán)節(jié)、脫色環(huán)節(jié)；其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是脫色環(huán)節(jié)。10. 進行革蘭氏染色時，為什么特別強調(diào)菌齡不能太老，用老齡細菌染色會出現(xiàn)什么問 題?答：菌齡太老，細胞壁通透性改變。著色不均，染色效果不好。陰性陽性不明顯分不太 清楚 ,問題是：不便于顯微鏡下觀察是陽性菌還是陰性菌。11. 革蘭氏染色中那一步是關(guān)鍵 ?為什么？你是如何操作的？ 革蘭氏染色的關(guān)鍵步驟是：乙醇脫色（是脫色時間）。如果脫色過度，革蘭氏陽性菌也 可被脫色而被誤認為是革蘭氏陰性菌； 如脫色時間過短， 革蘭氏陰性菌也可被脫色而被 誤認為是革蘭氏陽性菌。 脫色時間的長短還受涂片的厚薄，脫色是玻片晃動的快慢及乙 醇用量的多

6、少等因素的影響， 難以嚴格規(guī)定 （脫色是應當控制速度， 脫色時間一般為 20 30s）。12. 革蘭氏染色中 ,哪個步驟可以省略 ?在什么情況下采用 媒染目的是在所有的細胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復合物。 脫色后使革蘭 氏陰性菌變?yōu)闊o色。 復染使革蘭氏陰性菌染成紅色。 所以鑒別細菌的革蘭氏陰陽性只 須媒染，復染的目的是為了看清革蘭氏陰性菌。13. 你主要根據(jù)哪些形態(tài)特征來區(qū)分四種不同的霉菌曲霉:具有分隔； 氣生菌絲的一部分形成長而粗糙的分生孢子梗，頂端膨大成球狀頂囊， 表面輻射出一層或兩層小梗，小梗上著生成串的球形分生孢子。 分生孢子梗生于足細胞 上，并通過足細胞與營養(yǎng)菌絲相連。根霉

7、:菌絲無隔、多核、分枝狀，有匍匐菌絲和假根。在假根的上方直立地生長出一至 數(shù)根孢囊梗， 其頂端膨大成球形孢子囊。 囊的基部有囊托， 中間有球形或半球形囊軸。 毛霉 :菌絲無隔、多核、分枝狀，無假根或匍匐菌絲。菌絲體上直接生出單生、總狀分 枝或假軸狀分枝的孢囊梗。各分枝頂端著生球形孢子囊，無囊托。青霉 : 菌絲有橫隔，分生孢子梗亦有橫隔，光滑或粗糙?；繜o足細胞，頂端不形成膨 大的頂囊，其分生孢子梗經(jīng)過多次分枝，產(chǎn)生幾輪對稱或不對稱的小梗，形如掃帚，稱 為帚狀體。孢子顏色：黑曲霉是黑色，青霉是青色，根霉是白菌絲黑孢子，毛霉則是淡黃色。以上 為實驗室觀察1）菌絲特征：青菌與曲霉菌絲與膈；毛霉與根霉

8、則無；2）菌絲的特化結(jié)構(gòu)： 曲霉有足細胞， 其它霉菌無； 根霉有假根與匍匐枝， 其它霉菌無；3）孢子頭特征：青霉的孢子頭為掃帚狀；根霉與毛霉的孢子頭為囊狀；曲霉為菊花狀 孢子頭。14. 為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進 行校正 ?目鏡測微尺中每小格代表的實際長度是不固定的， 它是隨所使用目鏡和物鏡的放大率的 不同而改變的， 故在測量前必須先用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正，以得出在 顯微鏡的特定放大倍率下，目鏡測微尺每小格所代表的相對長度。15. 在不改變目鏡和目鏡測微尺， 而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來測定同一細菌的大小時， 其測定結(jié)果是否相同？為什么

9、？答: 相同 ;目鏡測微尺是一塊圓形玻片，其中央刻有精確等分的刻度，有把毫米刻成為50 等分或把 10 毫米長度刻成 100 等分。測量時，將其放在接目鏡中的隔板上來測量 經(jīng)顯微 鏡放大后的細胞物象。由于在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍數(shù) 的物鏡來測定 同一細菌的大小時，物象的放大倍數(shù)與每小格目鏡測微尺所代表的長度 在變化比例上是同步的，故而測定結(jié)果相同。16. 哪些因素會造成血細胞計數(shù)板的計數(shù)誤差，應如何避免 ? 操作時沒有先蓋蓋玻片再滴加懸液，導致體積不準確。避免：先蓋蓋玻片再滴加懸液。 細胞密度太高。避免：稀釋溶液。溶液不均勻。避免：滴加溶液前混勻懸液。 1、儀器誤差：所用器材

10、均應清潔干凈，并且計數(shù)板計數(shù)區(qū)不應該有擦痕。2、計數(shù)室內(nèi)可能有氣泡。因為酵母細胞并沒有染色，看起來是透明的，有氣泡很容易 被計入，使數(shù)值偏高；并且，氣泡會影響菌懸液的隨機分布。改進：若產(chǎn)生氣泡，則用吸水紙吸出。3、菌體在計數(shù)板上分布不均，當用選取5 格計數(shù)時，會造成很大誤差。改進：應使菌液自然流入并混勻，進行觀察時盡可能多數(shù)幾個格子。4、配制稀釋液時吸取的濃度過高或過低，導致稀釋液濃度和原液不成正確比例，計算 時產(chǎn)生誤差。應將原液搖晃均勻后取中部的液體進行稀釋。5、由于數(shù)菌體數(shù)目時視覺疲勞而導致的視覺誤差。應多人觀察，取記錄平均數(shù)。6、計數(shù)時可能將格四周的菌都計算在內(nèi)了，使數(shù)值偏高。改進：謹遵

11、一個規(guī)則，計上不計下，計左不計右，不可以重復計數(shù)。7、可能出現(xiàn)有出芽的酵母菌，將出芽的酵母菌按兩個計數(shù)了，使數(shù)值偏高。改進：計數(shù)時，只有當芽體于母細胞一樣大的時候，才能計為兩個。17. 培養(yǎng)基配好后， 為什么必須立即滅菌 ?如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是否無菌？為什么要 倒置培養(yǎng)？答：由于配制培養(yǎng)基的各類營養(yǎng)物質(zhì)和容器等含有各種微生物，因此，已配制好的培養(yǎng) 基必須立即滅菌，如果來不及滅菌，應暫存冰箱內(nèi)，以防止其中的微生物生長系列而消 耗養(yǎng)分和改變培養(yǎng)基的酸堿度所帶來的不利影響。將滅菌的培養(yǎng)基放入 37C溫箱中培養(yǎng) 2448h,無菌生長即可證明滅菌后的培養(yǎng)基無 菌。倒置培養(yǎng)的主要目的： 1）由于重力的

12、作用使培養(yǎng)基表面及次層能富集微生物生長所需 的營養(yǎng)物質(zhì)，利于微生物生長； 2）防止空氣中微生物的污染培養(yǎng)基及培養(yǎng)物：倒置時 平板內(nèi)的空氣是不流動的 ,雜菌不會沉降到培養(yǎng)基表面 ,如果不倒置 , 很快平板周邊會長 起雜菌。 3）倒置培養(yǎng)使瓊脂里水分不易蒸發(fā)出去，而充分的保持瓊脂的彈性與細菌容 易繁殖和生存的環(huán)境。 如果不倒置，大概 3天左右培養(yǎng)基就會出現(xiàn)龜裂等水分散失的情況。而一些落菌等試驗，需驗證培養(yǎng)基無菌，就要先倒置培養(yǎng) 48 小時才可作為模板做 落菌，水分散失是很重要的。19. 在配制培養(yǎng)基的操作過程中應注意些什么問題？為什么？ 答：一般而言，培養(yǎng)基的配置要注意如下幾點原則：1） 營養(yǎng)成分

13、的配比：碳源和氮源的比例（C/N）要適當；2）適宜的酸堿度（pH值）：配制培養(yǎng)基時pH的調(diào)節(jié)；3）滲透壓：營養(yǎng)物質(zhì)要有適合的濃度；4）培養(yǎng)基不能反復高溫滅菌。5）稱不溶性固形物時，應單獨稱，若量少的可以與無機鹽一起稱，但一定要混勻再分 裝；6）一般情況下培養(yǎng)基用自來水配制。 操作細節(jié)上則要注意：1 ）稱藥品用的牛角匙不要混用，稱完藥品應及時蓋緊瓶蓋2）調(diào) pH 值不要調(diào)過頭， 以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度3）分裝時注意不要污染棉塞、試管口，以免染菌。4）及時滅菌，以免培養(yǎng)基及容器里的微生物生長繁殖消耗養(yǎng)分、改變酸堿度。1 、當然是注意濃度配比不要搞錯2、很多培養(yǎng)基的加料順序有講究 , 否

14、則會有沉淀產(chǎn)生3、有些培養(yǎng)基會有不溶物質(zhì) , 分裝前應搖勻4、 不要忘了調(diào)節(jié)pH值（一般細菌都需要，酵母可能自然pH就行,不過不一定）5、加熱溶解時盡量不要煮沸 , 會損失營養(yǎng)物質(zhì)20. 高壓蒸氣滅菌開始之前，為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡？滅菌完畢后，為什么待壓力 降低“ 0”時才能打開排氣閥，開蓋取物。答： 1）在使用高壓蒸汽滅菌時，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因為空氣 的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓，所以，當水蒸氣中含有空氣時，在同一壓力下，含空氣 蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。2）壓力未降至“ 0”便開蓋取物的可能后果：壓力鍋內(nèi)壓力驟然降低，引起容器中的溶 液噴出容器口導致污染或?qū)е氯?/p>

15、員的燙傷。21. 干熱滅菌操作過程中應注意哪些問題為什么1 、物品不要擺放太擠 , 以免妨礙空氣流通2、 滅菌物品不要接觸干燥箱內(nèi)壁的鐵板, 以防包裝紙烤焦起火3、滅菌時人不能離開4、滅菌結(jié)束后不能忘記關(guān)掉電源5、待溫度降到 70 度以下再打開 , 否則冷熱空氣交替 , 玻璃器皿容易炸裂或發(fā)生燙傷事故22. 為什么干熱滅菌比濕熱滅菌所需溫度高 時間長？ 在濕熱條件下，有水蒸汽的作用：a 高溫水蒸汽導熱比干空氣要快； b 高溫水蒸汽冷凝變水時有放熱過程； c 高溫水蒸汽能穿透細菌的細胞膜，直接進入細胞內(nèi)破壞細胞； d 高溫水蒸汽能水解一部分細胞結(jié)構(gòu)，加速導熱。（濕熱中細菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易

16、凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低；濕熱的穿透力比干熱大；濕熱的蒸汽有潛熱存在，每1克水在100C時，由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時可放出2 . 26kJ （千焦）的熱量。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度， 從而增加滅菌效力。）23. 設(shè)計實驗方案，比較干熱滅菌和濕熱滅菌的效果。以下試驗方案有關(guān)操作均遵循無菌操作條件和等量原則。（一）實驗材料試管 鑷子 酒精燈 嗜熱脂肪芽孢桿菌 ATCC 7053 菌片 紙片（與菌片同大 小 同材料） 溴甲酚紫蛋白凍水培養(yǎng)基（已滅菌）等實驗材料（材料有余）。（二）對照組取 9 支潔凈試管， 分為 A1 B1 C1 三組（每 3 支一組），將 A1 組中放入菌片，

17、 B1 組 中放入紙片， C1 組中什么也不加；不經(jīng)滅菌，直接加入溴甲酚紫蛋白凍水培養(yǎng)基（等 量）。（三）恒為培養(yǎng)將上述所有試管按分組在 56C恒溫條件下培養(yǎng)48小時。24. 如何確定平板上某單個菌落是否為純培養(yǎng)請寫出實驗的主要步驟 純培養(yǎng)的確定除觀察其菌落特征外，還要結(jié)合顯微鏡檢測個體形態(tài)特征后才能確定，有 些微生物的純培養(yǎng)要經(jīng)過一系列分離與純化過程和多種特征鑒定才能得到。25. 配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，有哪些操作步驟？那幾步易出錯，如何防止？ 稱取藥品加熱溶化分裝加棉塞包扎滅菌擱置斜面 易出錯的步驟有：a 稱取藥品 稱取時鑰匙專用，瓶蓋不要錯蓋，易吸水的藥品要快速稱??；b 加熱溶化 加入藥

18、品后要用玻璃棒不停攪拌，以免糊底（在瓊脂熔化過程中，應控 制火力，以免培養(yǎng)基因沸騰而溢出容器， 同時，需不斷攪拌， 以防瓊脂糊底燒焦。 ）； c 分裝 分裝時培養(yǎng)基不能粘在三角瓶（或試管）口，以免接種時染菌；d 擱置斜面斜面長度約試管長度一半為宜。26. 平板菌落計數(shù)法的原理是什么 ? 它適用于那些微生物的計數(shù)？ 平板菌落計數(shù)法是將等測樣品經(jīng)適當稀釋后， 其中的微生物充分分散為單個細胞， 取一 定量的稀釋液接種到平板上， 經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細胞生長繁殖而形成的肉眼可見的菌 落，即一個單菌落應代表原樣品中的一個單細胞。統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣 接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。 （但是，由

19、于待測樣品往往不易完全分散成單個細 胞，所以，長成的一個單菌落也可能來自樣品中的 23 或更多個細胞。因此平板菌落計 數(shù)的結(jié)果往往偏低?，F(xiàn)在常使用菌落形成單位）。平板計數(shù)法是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個菌落是由一個微生物繁殖而形 成的現(xiàn)象進行的，也就是一個菌落可代表一種微生物（并不絕對 ） 。通常用來測定樣品 中所含細菌、孢子、酵母菌等單細胞微生物的數(shù)量。8、微量移液器的最小量程太大，在加樣時，容易加多，使蓋玻片鼓起，血球計數(shù)板所 技術(shù)的體積變大，最終結(jié)果偏大。 改進：用量程的小的微量移液器并少加一些。27. 如果一項科學研究內(nèi)容需從自然界中篩選到能產(chǎn)生高溫蛋白酶的菌株，你將如何完 成

20、？寫出實驗方案（產(chǎn)蛋白酶菌株在酪素平板上能形成降解酪素透明圈）。以下試驗方案有關(guān)操作均遵循無菌操作條件一 材料準備 1 土壤【有機質(zhì)（特別是蛋白質(zhì)）含量豐富的土壤】2 滅菌生理鹽水（ 0.85%NaCl）3 滅菌移液管4 添加酪素的 B 4（牛肉膏蛋白胨完全培養(yǎng)基）經(jīng)滅菌5 B 4 斜面（經(jīng)滅菌）6 其他材料：接種環(huán) 酒精燈等二 操作方法1 在盛有 10ml 滅菌生理鹽水的燒杯中添加 1g 土壤，配成懸浮液；2稍靜止后，用滅菌移液管移取部分上清液，將其制成10A4 10A6倍的稀釋液；3 用滅菌移液管吸取各稀釋液用稀釋倒平板法（或涂布平板法）將其接入添加酪素的B 4 平板上；4在55 65C下

21、培養(yǎng)1 2天；5挑取形成降解酪素透明圈的菌落（透明圈直徑D與菌落直徑d之比較大者），轉(zhuǎn)接入B4 斜面上培養(yǎng)；（若無特定菌落形成，則需另取土樣從開始重復試驗）6 將 B4 斜面上的菌落再用平板純培養(yǎng)， 依次重復 23 次后即可得到純培養(yǎng) （鏡檢）；7 純培養(yǎng)細菌中蛋白酶的提取及活性鑒定【搖瓶培養(yǎng)（若提取蛋白酶及其活性正常，則 純培養(yǎng)成功，否則，重取土樣重復以上實驗）】。28. 為什么熔化后的培養(yǎng)基要冷卻至 45C左右才能倒平板？低于這個溫度瓊脂會凝固，溫度過高，如果是做傾倒瓊脂做菌落計數(shù)，會殺死一部分細 菌，如果只是只是制備瓊脂平板，那么溫度太高就進行傾倒會導致瓊脂凝固后偏軟，水 汽過多。29.

22、 要使平板菌落計數(shù)準確，需要掌握哪幾個關(guān)鍵？為什么？1 無菌操作 2 稀釋良好，不會太濃或太稀。 3 菌落生長時間控制好，不會長的太大不 便區(qū)分，也不至于太小影響計數(shù)。30. 當你的平板上長出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時，你認為問題出在哪里？1. 太濃 2. 沒涂勻31. 用傾注法和涂布法計數(shù)，其平板上長出的菌落有何不同？為什么要培養(yǎng)較長時間（48h）后觀察結(jié)果？傾注法是在培養(yǎng)皿中接種好樣品之后， 傾注瓊脂并培養(yǎng)； 而涂布法則是在瓊脂表面接種 并使用 L 型棒涂布。因此，傾注法的菌落將出現(xiàn)在瓊脂的各個部位，包括底層和中層，但涂布法培養(yǎng)后形成 的菌落只出現(xiàn)在瓊脂表面。32. 你如何解釋淀粉酶是胞外酶而非胞內(nèi)酶？答：淀粉是大分子物質(zhì)，進入細胞十分困難，甚至需要高耗能的胞吞作用。因而通過 胞外酶的作用，將淀粉水解為葡萄糖后運入細胞，較方便高效。試驗中出現(xiàn)透明圈， 說明培養(yǎng)基內(nèi)淀粉被水解， 可推測是細菌產(chǎn)生的胞外的淀粉酶起 的作用。33.