測(cè)定食品中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素的殘留案例

1、測(cè)定食品中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素的殘留案例 一、案例 四環(huán)素類抗生素(tcs)是一類堿性廣譜抗生素，包括四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素等，在畜禽生產(chǎn)中被廣泛地用作飼料添加劑來防治動(dòng)物疾病和提高飼料利用率。在我國(guó)，因?yàn)樗沫h(huán)素藥的用量很大，有些地方用法不合理及濫用，導(dǎo)致四環(huán)素成為牛乳及乳制品中殘留最多的抗生素。牛乳是人們尤其是嬰幼兒的主要養(yǎng)分食品，牛乳中殘留的抗生素會(huì)危害飲用者身體健康。 二、選用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) gbt 229902008牛乳和乳粉中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素殘留量的測(cè)定。 三、測(cè)定辦法 1試樣的制備與保存 牛乳置于04冰箱中避光保存。用法時(shí)，從冰箱中取出，放置至室溫

2、，搖勻。乳粉常溫避光保存。 2提取與凈化 牛乳試樣稱取10.oog，置于50ml。具塞塑料離心管中，乳粉試樣稱取2.oog，置于50ml具塞塑料離心管中，向試樣中加入20ml o.1moll na2 edta-mcllvaine緩沖溶液(ph=4)，于渦旋振蕩器上混合2min，于10，5000rmin離心10min，上清液過濾至另一離心管中，殘?jiān)性偌尤?0ml緩沖溶液，重復(fù)提取一次，合并上清液，待凈化。 將上清液通過處理好的oasis hlb固相萃取柱，使上清液以不超過3mlmin的流速通過oasis hlb固相萃取柱，待上清液徹低流出后，用5ml甲醇+水(體積比5+95)洗柱，棄去所有流出

3、液。減壓抽干5min，最后用5ml甲醇洗脫，收集洗脫液于10ml樣品管中。 將上述洗脫液通過羧酸型陽離子交換柱，待洗脫液所有流出后，用5ml甲醇洗柱，減壓抽干，用4ml o.01moll草酸一乙腈溶液洗脫，收集洗脫液于10ml樣品管中，45下氮?dú)獯抵?.5ml左右，定容至2ml，供測(cè)定。 3測(cè)定 (1)液相色譜條件 色譜柱：kromasil 1005c18，5 m，150mm×46mm(內(nèi)徑)或相當(dāng)者。 流淌相：o.01moll草酸溶液+乙腈+甲醇(77+18+5)。 流速：1.omlmin。 柱溫：40。 檢測(cè)波長(zhǎng)：350nm。 進(jìn)樣量：60 l。 (2)液相色譜測(cè)定 將混合標(biāo)準(zhǔn)工

4、作溶液分離進(jìn)樣，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品舉行定量，樣品溶液中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)。 (3)平行實(shí)驗(yàn) 按上述步驟，對(duì)同一試樣舉行平行實(shí)驗(yàn)測(cè)定。除不稱取試樣外，均按上述步驟同時(shí)完成空白實(shí)驗(yàn)。 4結(jié)果計(jì)算 x=c*v/m*1000/1000 式中 x試樣中被測(cè)組分殘留量， gkg； c -從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的被測(cè)組分溶液的濃度，ngml； v試樣溶液定容體積，ml； m試樣溶液所代表的質(zhì)量，g。 注：計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值。 5試劑 甲醇：色譜純。 乙腈：色譜純。 磷酸氫二鈉(na2 hpo4·12h2

5、o)。 檸檬酸(c6h8o7·h2o)。 乙二酸四乙酸二鈉(na2edta·2h2o)。 草酸(c2h2o4·2h2o)。 0.2moll磷酸氫二鈉溶液：稱取71.63g磷酸氫二鈉，用水溶解，定容至1000ml。 0.1moll檸檬酸溶液：稱取21.04g檸檬酸，用水溶解，定容至1000ml。 mcllvaine緩沖溶液：將625ml 0.2moll。磷酸氫二鈉溶液與1000ml 0.1moll檸檬酸溶液混合，須要時(shí)用naoh或hcl調(diào)ph=4.00±0.05。 0.1moll na2edtamcllvaine緩沖溶液：稱取60.50g乙二酸四乙酸二鈉放

6、入1625ml。mcllvaine緩沖溶液中，使其溶解，搖均。 0.01moll草酸溶液：稱取1.26g草酸，用水溶解，定容至1000ml。 甲醇+水(1+19)。 0.01moll草酸一乙腈溶液(1+1)：量取50ml草酸溶液與50ml乙腈混均。 土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度96。 0.1mgml土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存溶液：精確稱取適量的土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，分離用甲醇配成0.1mgml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液。儲(chǔ)存液于一20保存。 土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：按照需要用流淌相將土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存溶液，稀釋成所需溶度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。儲(chǔ)存于冰箱中，每周配置。 oasishlb固相萃取柱或相當(dāng)者：500mg，6ml。用法前分離用5ml甲醇和10ml水預(yù)處理，保持柱體潮濕。 羧酸型陽離子交換柱：500mg，6ml。用法前用5ml甲醇預(yù)處理，保持柱體潮濕。 6儀器 液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器。 分析天平：感量0.1mg。 渦旋振蕩器。 冷凍離心機(jī)：轉(zhuǎn)數(shù)大于5000