BJS201705食品中香蘭素、甲基香蘭素和乙基香蘭素的測定.doc

1、附件1食品中香蘭素、甲基香蘭素和乙基香蘭素的測定BJS 202105i 范圍本方法規(guī)定了食品中香蘭素、甲基香蘭素和乙基香蘭素的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的測定方法.本方法適用于液體乳、稀奶油、嬰幼兒配方乳粉不包括特殊醫(yī)學(xué)用途的嬰幼兒配方乳 粉、嬰幼兒谷類輔助食品、谷物碾磨加工品、植物油脂等食品中香蘭素、甲基香蘭素和乙基 香蘭素的測定.2 原理樣品經(jīng)乙睛提取后,再以正己烷除脂凈化,高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測,外標(biāo)法士旦7EMo3 試劑和材料除另有規(guī)定外,所有試劑均為分析純,水為 GB/T6682規(guī)定的一級水.3.1 試劑3.1.1 甲醇CH4O:色譜純.3.1.2 乙睛C2H3N:色譜純.3.

2、1.3 甲酸CH2O2：色譜純.3.1.4 正己烷C6H14：色譜純.3.1.5 氯化鈉NaCl:在550c灼燒4h后備用.3.1.6 0.1%甲酸水溶液：量取10mL甲酸并參加水定容至 1000mL.3.2 標(biāo)準(zhǔn)品香蘭素、甲基香蘭素和乙基香蘭素標(biāo)準(zhǔn)品純度?98.0%,中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)式等信息詳見附錄A表A.1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲藏液1.00mg/mL：分別稱取香蘭素、甲基香蘭素和乙基香蘭素0.1g精確至0.0001g標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于100mL容量瓶中,用甲醇溶解,并定容至刻度.避光于-18C下保存,保存期為6個月.3.3.2 混合標(biāo)準(zhǔn)

3、儲藏溶液：分別吸取上述三種標(biāo)準(zhǔn)儲藏液1.00mL于同一 100mL容量瓶中,用乙睛稀釋到刻度配制成濃度為 10g/mM混合標(biāo)準(zhǔn)儲藏溶液,避光于-18 C保存,保存期為1個月.3.3.3 空白基質(zhì)溶液：根據(jù)6.1規(guī)定的前處理方法操作制備空白基質(zhì)溶液.3.3.4 基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：分別準(zhǔn)確吸取香蘭素、甲基香蘭素和乙基香蘭素混合標(biāo)準(zhǔn) 儲藏液適量3.3.2,用空白基質(zhì)提取液 3.3.3將其稀釋為5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、 80ng/mL、160ng/mL標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液,臨用時配制.4 儀器和設(shè)備4.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源.4.2 渦旋混合

4、器.4.3 超聲波清洗器.4.4 離心機：轉(zhuǎn)速著000r/min.4.5 分析天平：感量0.1mg和0.01g.5 試樣制備嬰幼兒谷類輔助食品、谷物碾磨加工品需粉碎混勻,使其全部可以通過425 dm的標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)篩；其它樣品無需特殊制備.6 分析步驟6.1 樣品的制備與提取6.1.1 嬰幼兒配方乳粉、嬰幼兒谷類輔助食品：稱取 1g樣品精確至0.01g,置于50mL聚丙烯離 心管中,參加 3mL水,渦旋振蕩 30s,參加7mL乙睛3.1.2,渦旋振蕩30s,超聲處理25min , 10000r/min離心5min后,取上層清液 2mL于10mL玻璃離心管中,參加 1mL正己烷3.1.4, 渦旋混合30

5、s, 5000r/min離心3min后,取下層清液,過濾膜 0.22有機相,待分析.6.1.2 液體乳巴氏殺菌乳、滅菌乳、發(fā)酵乳等 、稀奶油：稱取2g樣品精確至0.01g, 置于50mL聚丙烯離心管中,參加 20mL乙睛3.1.2,渦旋振蕩30s,超聲處理25min,參加 1g氯化鈉3.1.5, 10000r/min離心5min后,取上層清液 2mL于10mL玻璃離心管中,參加 1mL正己烷3.1.4,渦旋混合30s, 5000r/min離心3min后,取下層清液,過濾膜0.22科卬 有機相,待分析.6.1.3 谷物碾磨加工品大米等：稱取1g樣品精確至0.01g,置于50mL聚丙烯離心管 中,

6、參加3mL水,渦旋振蕩 30s,參加7mL乙睛3.1.2,渦旋振蕩30s,超聲處理25min , 10000r/min離心5min后,取上層清液過 0.22科屣膜4.6,待分析.6.1.4 植物油脂：稱取1g樣品精確至0.01g,置于50mL聚丙烯離心管中,參加 1mL水和10mL乙睛3.1.2,渦旋振蕩 30s,超聲處理25min ,參加1g氯化鈉3.1.5, 10000r/min 離心5min后,取上層清液2mL于10mL玻璃離心管中,參加 1mL正己烷3.1.4,渦旋混合 30s, 5000r/min離心3min后,取下層清液,過濾膜0.22科卬有機相,待分析.6.2 儀器參考條件6.2

7、.1 色譜條件a 色譜柱：XDBC18柱,4.6mm x 50mm, 1.8Nm,或性能相當(dāng)者.b流動相：A: 0.1%甲酸水溶液,B：甲醇,梯度洗脫條件見表 1.c流速：0.3mL/min .d柱溫：30oCoe） 進(jìn)樣量：2比.表1梯度洗脫條件時間minA 相B 相075250.57525250506505071090910901275256.2.2質(zhì)譜條件f） 離子源：電噴霧離子源.g） 掃描方式：正離子掃描ESI+.h） 檢測方式：多反響監(jiān)測MRM.i） 離子化電壓、霧化氣、輔助氣、氣簾氣壓力、霧化溫度應(yīng)優(yōu)化至最正確靈敏度,監(jiān)測離子對和定量離子對及其他質(zhì)譜參數(shù)見附錄B中表B.1.6.3

8、測定6.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作用混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液3.3.4分別按儀器參考條件 6.2進(jìn)行測定,得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶 液的色譜峰面積,以混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo),以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo) 準(zhǔn)曲線.6.3.2 定性測定在相同試驗條件下測定樣品和基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,記錄樣品和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中目標(biāo)物的保存時間.假設(shè)樣品中檢出與基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液3.3.4中待測物保存時間一致的色譜峰,2規(guī)定且其定性離子與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)的定性離子的相對豐度相比偏差不超過表 的范圍,那么可以確定樣品中檢出相應(yīng)的待測物.表2定性確定時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度/%>5020 501020

9、<10允許的相對偏差/%劃上5±30/06.3.3 定量測定將樣品溶液6.1按儀器參考條件6.2進(jìn)行測定,得到相應(yīng)的樣品溶液的色譜峰面積, 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查得待測液中各組分的濃度.樣品中各待測組分的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性 響應(yīng)范圍內(nèi),如果含量超出線性范圍,那么重新取樣分析,用乙睛稀釋到適當(dāng)濃度后測定.混 合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜MRM色譜圖參見圖C.1.7 結(jié)果計算按下式1計算樣品中單種目標(biāo)化合物的含量：V c V 1000(1)X.二m 1000式中:X樣品中待測組分的含量,單位為微克每千克 科g/kg；c從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出的測定液中各待測組分的濃度,單位為微克每

10、升 pg/Q； m樣品稱取的質(zhì)量,單位為克g;V樣品溶液定容體積,單位為毫升 mL.計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保存至小數(shù) 點后一位.8 檢測方法的靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度8.1 靈敏度當(dāng)液體乳稱樣量為2g ,植物油脂、稀奶油、谷物碾磨加工品、嬰幼兒配方乳粉、嬰幼兒 谷類輔助食品稱樣量1g時,香蘭素、甲基香蘭素和乙基香蘭素的檢出限為30.0pg/kg定量限為 100.0pg/kg8.2 準(zhǔn)確度本方法嬰幼兒配方乳粉、液體乳、植物油脂、稀奶油、谷物碾磨加工品、嬰幼兒谷類輔 助食品在100.01000.0聞/kg添加濃度范圍內(nèi)回收率為78.6%118.4%.10%

11、.8.3 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差不得超過算數(shù)平均值的附錄A香蘭素、甲基香蘭素和乙基香蘭素三種化合物相關(guān)信息表A.1中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)式名稱英文名CAS分子式相對分子質(zhì)里結(jié)構(gòu)式香蘭素Vanillin121-33-5C8H8.3152.14OH,H jyO甲基香蘭素Methylvanillin120-14-9C9H 10O3166.17HT OO1乙基香蘭素Ethylvanillin121-32-4C9H10O3166.17OHH h0 OCH 3附錄B參考質(zhì)譜條件質(zhì)譜參數(shù)：a離子源：電噴霧離子源；b掃描方式：正離子掃描 ESI

12、+;c檢測方式：多反響監(jiān)測MRM;d離子化電壓IS: 5500V;e霧化氣Gas1:50psif輔助氣Gas2:50psig氣簾氣壓力CUR : 35psi;h霧化溫度TEM : 500 c ；i定性離子對、定量離子對及其他質(zhì)譜參數(shù)見表B.1.表B.1三種化合物的定性離子對、定量離子對和質(zhì)譜分析參數(shù)序號分析物離子對m/z去簇電壓V碰撞能量eV入口電壓V出口電壓V1香蘭素153.1/93.1*90191013153.1/125.0901410132甲基香蘭素167.2/139.0*100171013167.2/124.01002510133乙基香蘭素167.2/111.0*90171013167

13、.2/93.090231013*：定量離子注：附錄B所列參考質(zhì)譜條件僅供參考,當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時,儀器參數(shù)可能存在差異,測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最正確.附錄C香蘭素、甲基香蘭素和乙基香蘭素的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖5.98香蘭素定量離子對153.1/93.110024685.98香蘭素定性離子對153.1/125.01024681012Time (min)1012Time (min)6.甲基香蘭素定量離子對167.2/139.1-90100 ,%246810006.甲基香蘭素定性離子對167.2/124.190%0247.411012Time (min)681012Time (min)100 -7.41100乙基香蘭素定量離子對167.2/