血清乙型肝炎病毒e抗原檢測作業(yè)指導書

1、血清乙型肝炎病毒e抗原檢測作業(yè)指導書（ELISA）1 .原理在微孔條上預包被被純化乙肝e抗體（HBeAb）,配以酶標記抗原（HBeAb-HRP）及TMB等其它試劑，采用夾心法原理檢測人血清（或血漿）中乙肝e抗原（HBeAg）o2 .標本采集2.1 1采集前病人準備：受檢者應空腹2.2 標本種類：血清或血漿2.3 標本要求：采集病人靜脈血3nli（可用EDTA抗凝），室溫放置不超過4小時，分離血清備用。3 .標本儲存：2-8保存不應超過1周，-20不應超過3個月，-70C長期保存，應避免反復凍融。4 .標本運輸：密封，室溫運輸。5 .標本拒收標準：污染、標本量不足、嚴重溶血或。測檢項此作宜不本標

2、血脂.6 .試劑6.1 試劑名稱：乙型肝炎病毒e抗原診斷試劑盒6.2 試劑生產(chǎn)廠家：英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司。6 .3包裝規(guī)格：96Test/Kit6.4 試劑盒組成：HBeAg微孔板,HBeAg酶標記抗原,HBeAg陽性對照血清,HBeAg陰性對照血清，濃縮洗滌液，底物A,底物B,終止液，封口膜，自封袋。6.5 試劑儲存條件及有效期：2-8C避光保存，有效期9個月。7 .儀器設備7.4 儀器名稱：自動酶標儀7.5 儀器廠家：KHB7.6 儀器型號：ST3608 .操作步驟8.4 平衡：將試劑盒各組分取出，平衡至室溫。存封袋封自以時及者余，后封開板孔，微）2518-（.8.5 配液：濃縮洗

3、滌液配制前充分搖勻（如有晶體應充分溶解），濃縮洗滌液和蒸儲水或去離子水按1：19稀釋后使用。8.6 編號：將微孔條固定于支架，按序編號。8.7 加樣：分別用加樣器在對照孔中加入陰、陽性對照血清各50?1于相應孔中。8.8 加醐：分別在每孔中加入酶標記抗體50?1,輕拍混勻。8.9 溫育：置37溫育60分鐘，室溫平衡5分鐘。8.10 洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌完扣干（每次應保持30-60秒的浸泡時間）。8.11 顯色：每孔加入底物A、B各50。1,輕拍混勻，置37暗處15分鐘。8.12 終止：每孔加終止液50?1,混勻。8.10測定：用酶標儀單波長450nm或雙波長450/630nm測定各

4、孔0D值(用單波長測定時需設空白記并，定測成完內(nèi)鐘分30,孔一照對.錄結果)。9 .結果判斷與分析9.4 臨界值(C.0.)的計算：臨界值二陰性對照孔0D值NX2.1,陰性對照0D均值大于0.1時應重新試驗，小于0.05時以0.05計算。9.5 結果判定：樣品0D值S/C.0二1者為HBeAg陽性樣品0D值S/C.01者為HBeAg陰性10 .質(zhì)量控制:每次試驗用含量為2NCU/ml的HBeAg質(zhì)控血清同步檢測,S/C0值應在控制范圍內(nèi)；如失控，則要檢查試劑效期、儲臧溫度、試驗溫度是否正常、操作步驟是否正確，直至重新試驗使其在控。11 .參考范圍：陰性或陽性12 .臨床意義：HBeAg陽性可作

5、為體內(nèi)HBV處在復制狀態(tài)及血清具有傳染性的一個標志；持續(xù)陽性則揭示轉(zhuǎn)為慢性。o好性異特，高度敏靈：能性作操3.1.14 .方法局限性：樣品顯色深淺與樣品中抗原的含量沒有一定正相關。15 .注意事項15.1 每板建議設陰陽性對照血清各兩孔，設空白對照時，不加樣品及酶標記抗體，其余各步相同。15.2 洗滌時各孔均須加滿，防止孔口內(nèi)有游離酶未能洗凈。15.3 加試劑前應將試劑瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使液體混勻。如果滴加，滴加前應棄去12滴。滴加時瓶身應保持垂直，以使滴量準確。注意勿將試劑滴在孔壁上。15.4 所有樣品都應按傳染源處理。15.5 封口膜使用說明15.5.1 微孔板拆封后，在取出當天所需的微孔條后，其余微孔條可以封口膜封存以避免受潮。在封存時，注意勿把封口膜粘貼到微孔條底部,以免影響其透光性。其免避可，口孔蓋覆膜口封以，時育溫板孔微15.5.2他因素對實驗帶來的非預期的影響。15.6 不同品名、不同批號的試劑不可混用，以免產(chǎn)生錯誤結果。16 .當檢測系統(tǒng)（儀器）不能工作時，所采取的補救措施:應保證所有操作步驟正確無誤；可以比對陰陽對照，肉眼判讀；無法準確判讀者，應留樣待系統(tǒng)正常后復查。17 .參考文獻：中