血液成分的制備

1、血液成分的制備邱艷北京市紅十字血液中心一、血液成分的制備（一）血液成分的制備原理人體血液經(jīng)過抗凝處理后 稱為全血，全血離心后主要分為三層，自上而下依次為血漿層、白膜層和紅細 胞層。血漿層主要包含血漿、水、蛋白質(zhì)、鹽類和各種離子等；白膜層主要包括 富含血小板區(qū)、富含淋巴細胞區(qū)、富含單核細胞區(qū)和富含粒細胞區(qū)，這些有形 細胞比重接近，因此聚集在白膜層；紅細胞層可簡單分為年輕紅細胞和正常紅 細胞，由于二者處于紅細胞的不同生長時期，因此比重略有差別。根據(jù)全血離心后分層的原理，可以將各層中不同的血液成分分離、制備成 成分血，這樣就可以合理利用血液資源，滿足患者對不同成分血的需求，提高 治療效果。（二）血液

2、成分的分離策略目前血液成分的分離策略主要有離機血液成分 分離和聯(lián)機血液成分分離。離機分離策略在血液成分的制備過程中不需要獻血者同步參與，先將從獻 血者身上采集到的全血放入無菌袋，然后再進一步離心、分離為成分血；而聯(lián) 機分離策略要求獻血者必須配合醫(yī)務(wù)工作者，同步參與血液成分制備，即一邊 采集獻血者的全血，一邊分離成分血。三）血液成分的分離方法1、離機血液成分分離有兩種方法，一種是將采集到的全血放入無菌多連袋中，離心后用手工方法將其分為不同的成分血。其優(yōu)點是比較經(jīng)濟，操作簡單。7/ 7（ 1）重復(fù)性較差；（PRP和濃縮血小板（但也有下列缺點：（2）去血小板血漿（PPP、富含血小板的血漿 PC制品中

3、易污染其他細胞；（3）必須配備血袋封口 機；( 4)對血液成分的重量無法設(shè)立對照和記錄；( 5)制備濃縮血小板較為 困難；( 6)無法進行標(biāo)準(zhǔn)化和條行碼識別處理。另一種方法是將采集到的血液放入無菌多連袋，離心后用自動血液分離機 將其分離并裝入別的無菌袋中。其優(yōu)點如下：( 1)可以進行條形碼識別、數(shù)據(jù)記錄和血液分離過程中的信息傳遞，對整 個分離過程進行控制；( 2)可以自動封閉血袋；( 3)高性能的光學(xué)傳感器保 證了分離的重復(fù)性；(4)離心后確保高純度成分制備；(5)PPP PRP和PC 中細胞污染少；( 6)制備快速。但其需要預(yù)先的資金投入，而且在制備過程中，要根據(jù)不同機構(gòu)使用的血 袋和采血量

4、，制定離心曲線，以保證符合自動血液分離機在血液分離過程中的 需要。2、聯(lián)機血液成分分離也有兩種方法，一種是在血液分離過程中，獻血者與 單采血漿機始終相連，機器將收集到的獻血者的血液離心并抽提出需要的血液 成分，把它裝入其他無菌血袋，同時將不需要的血液成分回輸給獻血者。其優(yōu)點為：(1)可以收集到血漿、PC和紅細胞(RBC (特別是存在同種異體免疫風(fēng) 險時)，而且血液成分質(zhì)量較高；( 2)如果有額外的液體回輸作為補償，每個 獻血者一次最多可以提供 600ml 血漿；( 3)一位獻血者可以為一位患者輸入足 夠的血小板。其缺點為：( 1 )需要專門耗材的復(fù)雜儀器和專業(yè)人員進行操作；( 2)血液收集過程

5、 需要 30分鐘到 2 小時(制備濃縮血小板)；( 3)大量帶有抗凝劑的血液回輸 給獻血者，使獻血者存在休克危險；( 4)耗材成本高；( 5)單采血漿機不能 排除對供血者的副作用和危險，由于處理過程長(長達 2 小時)，獻血者會感 覺寒冷和神經(jīng)緊張，長時間存在體外循環(huán)，獻血者會出現(xiàn)皮膚潮紅、口干、對抗凝劑反應(yīng)的危險以及塑料消耗品引起輸血反應(yīng)的危險；（6）招募獻血者更困難。另一種方法是利用細胞分離機將采集的血液離心、分離為不同的血液成分 并裝入其他無菌血袋。四）血液成分的制備策略血液成分制備有四種不同的策略。FFP）。第一種策略是先將采集到的全血過濾，29004000g重度離心1020分 鐘，分

6、別得到少白細胞的濃縮紅細胞和新鮮冷凍血漿（濃縮紅細胞經(jīng)過進一步處理，可以制備成懸浮紅細胞、洗滌紅細胞和輻照 紅細胞。新鮮冰凍血漿可以進一步制備成普通液體血漿、冷沉淀凝血因子和缺乏忸因子的血漿。第二種策略是全血不經(jīng)過過濾，直接重度離心后，將分離到的濃縮紅細胞制備成紅細胞添加液、洗滌紅細胞和輻照紅細胞。其他同第一種策略。第三種策略是全血不經(jīng)過過濾，直接重度離心，制備成部分少白細胞的紅 細胞（可進一步制備成懸浮紅細胞、洗滌紅細胞和輻照紅細胞）、缺乏血小板 的血漿（可制備成新鮮冰凍血漿，并進一步制備成普通液體血漿、冷沉淀物、 缺乏因子的血漿和凝固因子）和白膜層。歐洲人的白膜層加入部分血漿，100013

7、00g離心610分鐘或275g離心 35分鐘，可制備部分缺少白細胞的血小板。第四種策略是全血經(jīng)過 1000 1300g 輕度離心 6 10 分鐘，制備成部分少 白細胞的紅細胞和PRP （美國人）。前者可進一步制備成紅細胞添加液、洗滌紅細胞和輻照紅細胞，后者經(jīng) 2900 4000g 重度離心 10 20 分鐘，可制備濃縮血小板，去血小板血漿可進 步制備成普通液體血漿、冷沉淀凝血因子和缺乏 忸因子的血漿。二、血液成分的臨床應(yīng)用(一)血液成分的分類1、美國血庫協(xié)會血液標(biāo)準(zhǔn)成分種類美國血庫協(xié)會( AABB血液標(biāo)準(zhǔn)中的血液成分共有 26 種，分別如下：( 1 )全血( whole blood )( 2)

8、輻照全血( whole blood irradiated )( 3) 紅細胞( red blood cells)( 4)輻照紅細胞( RBCs irradiated)( 5)冰凍解凍去 甘油紅細胞( RBCs frozen and deglycerolized ( 6)少白細胞紅細胞( RBCs leukocytes reduced)( 7)復(fù)壯紅細胞( RBCs rejuvenated)( 8)冰凍解凍去甘 油復(fù)壯紅細胞( RBCs rejuvenated frozen and deglycerolized ( 9)洗滌紅細胞 (RBCs washed ( 10)單采紅細胞( RBCs ph

9、eresis ( 1 1 )單采少白細胞紅細 胞(RBCs leukocytes reduced pheresjs (12)血小板(platelets) (13)輻照血 小板( platelets irradiated )( 15)混合血小板( platelets pools)( 16)單采血小 板( platelets aphaeresis)( 17)輻照單采血小板( platelets aphaeresis irradiated )( 18)單采少白細胞血小板( platelets apheresis leukocytes reduced)( 19)單采粒細胞( Granulocytes

10、apheresis)( 20)輻照粒細胞( Granulocytes irradiated )( 21)冷沉淀凝血因子( antihemophilic factor cryoprecipitated )( 22)新鮮冰凍血漿( fresh frozen plasma)( 23)冷沉淀后冰凍血漿( plasma cryoprecipitated reduced)( 24)冰凍血漿( plasma frozen)( 25)液體血漿( Liquid plasma)( 26)病毒滅活血漿( Solvent/detergent-treated pooled plasma)其中，(1)( 11)主要是紅細

11、胞類制品，(12)( 18)主要是血 小板類制品，( 26)主要是血漿類制品。21)2、我國血液制品種類按照我國全血成分血質(zhì)量要求，我國的血液產(chǎn)品 可分為血液制劑、造血干細胞和血液制品。臨床供應(yīng)的血液制劑主要是全血和成分血，成分血包括紅細胞類成分血、 病原體滅活血漿、濃縮血小板、新鮮冰凍血漿、泠沉淀凝血因子、輻照成分血 和單采成分。其中，紅細胞類成分血包括濃縮紅細胞、懸浮紅細胞、濃縮少白細胞紅細胞、懸浮少白細胞紅細胞、洗滌紅細胞和冰凍解凍去甘油紅細胞。單采成分血包括單采血小板、單采少白細胞血小板、單采粒細胞、單采新 鮮冰凍血漿和單采紅細胞。二）血液成分的臨床應(yīng)用1、洗滌紅細胞不同國家的洗滌紅細

12、胞制備標(biāo)準(zhǔn)也不同，美國的制備標(biāo)準(zhǔn)要求血容量為 250350ml（450ml 全血制備），血細胞比容為0.60 0.80，白細胞V 5X 106單位，強調(diào)洗滌紅細胞的目的是除去血漿部分。我國的制備標(biāo)準(zhǔn)要求血容量為 125ml士 1%（ 200ml全血制備）、 250ml ± m （400ml全血制備），紅細胞回收率 > 7%，白細胞清除率> 8規(guī), 血漿蛋白清除率> 9%。2、輻照血液紅細胞輻照紅細胞的適應(yīng)證包括：（1）消除輸血相關(guān)的移植物抗宿主病患病風(fēng)險；（ 2）適用于先天性免疫 缺陷患者、骨髓和器官移植患者、新生兒患者，強烈放化療患者、輸入直系親 屬血受血者等。美

13、國 AABB 23版標(biāo)準(zhǔn)要求對血液制劑中心點的照射劑量不得少于25Gy（2500cGy,對血液制劑任何點的照射劑量不得少于15Gy（ 1500cGy）,輸送照射劑量要定時進行確認，銫 137每年確認一次，鈷 60 每半年確認一次。3、解凍紅細胞我國的制備標(biāo)準(zhǔn)要求血容量為 200ml± 1%0（200ml 全血制 備）、400ml士 1%（ 400ml全血制備），紅細胞回收率 > 80%解凍紅細胞殘留 白細胞< 1%解凍紅細胞殘留血小板< 1%解凍紅細胞甘油含量< 10g/L解凍紅 細胞游離血紅蛋白含量 < 1g/L解凍紅細胞體外溶血試驗 < 50%

14、美國AABB23版標(biāo)準(zhǔn)要求紅細胞回收率 > 80%4、少白細胞制備工藝的質(zhì)量控制原則為：（ 1 ）制備應(yīng)在血液制劑貯存前盡快進行，以減少輸注副反應(yīng)，這樣可避免白細胞在凋亡或壞死之前在4C儲存時釋放降解物，導(dǎo)致細胞碎片在室溫釋放細 胞因子；（ 2）病床邊用濾器過濾除去白細胞，由于白細胞儲存后會產(chǎn)生緩激肽 等其他血管擴張物，不能用過濾方法除去，會造成嚴重的輸血低血壓反應(yīng)，所 以制備應(yīng)在血液中心進行，血液中心可以提供質(zhì)量控制，監(jiān)控濾過操作和濾器 失控狀態(tài)；（ 3）質(zhì)量管理體系保證制備的文件記錄。5、血小板對血小板質(zhì)量影響較大的因素包括：（1）分離方法，擠白膜（Buffy Coat BQ法和富含

15、血小板血漿（PRP法對 其有不同影響；（ 2）保存狀態(tài)，儲存容器要有充分的通氣性；保存溫度是一個 質(zhì)量管理的重要指標(biāo)，研究表明冷藏保存的血小板雖然凝集能力及止血效果能 保持良好，但輸血后的壽命極短，因為低溫可使血小板的結(jié)構(gòu)之一 微管發(fā) 生解離，導(dǎo)致血小板形態(tài)改變，造成血小板壽命縮短，能引起這種變化的起始 溫度約為15C18C，所以現(xiàn)在通常在20C24C下保存；振蕩方式也會影響 血小板質(zhì)量，顛倒轉(zhuǎn)動型振蕩對血小板的再游離效果較好，也可充分保持 pH 值，對血小板的負擔(dān)較強，容易損傷血小板，往返型水平振蕩對血小板損傷較 少，一般進行5060CPM的水平振蕩即可維持pH在6.5以上。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定振動頻率

16、為60次/min，振幅5cm;（3）保存介質(zhì)，常用的是 ACD-B；（ 4）血漿留量，濃縮血小板在保存期不斷代謝產(chǎn)酸，導(dǎo)致血漿pH 不斷降低，使?jié)饪s血小板的保存環(huán)境處于酸化環(huán)境，因此一定量的血漿可以緩沖濃 縮血小板 pH 不斷降低，以保持血小板活性，因此，濃縮血小板容量對維持血小 板耐受低 pH 值是必要的；（ 5）血小板濃度，血小板濃度越高，其代謝越旺 盛， pH 值降低越明顯， pH 為6.97.4時，血小板形態(tài)無明顯改變，聚集功能大于儲存前的45%，pH 為6.56.8以下時，血小板形態(tài)開始從圓盤狀向球狀變化， pH為6.0 以下時，血小板產(chǎn)生不可逆變化；（ 6）紅、白細胞污染，大量的紅細 胞和白細胞可以使血小板在保存期間 pH 值下降。6、新鮮冰凍血漿在-8C以下可保存1年，大部分凝血因子都保持著與新 鮮時相近的值，而第TO、第K、第刈因子為70%80%,最不穩(wěn)定的第忸因子 則降到 65%左右。輸血時各種凝血因子都有止血作用，因而制備和儲存條件很重要。我國標(biāo)準(zhǔn)要求在全血采集后 6小時（全血保養(yǎng)液為ACD或