《植物組織培養(yǎng)》復習題.doc

1、植物組織培養(yǎng)復習題名詞解釋：1、外植體：由活植物體上切取下來以進行培養(yǎng)的那部分組織或器官。2、愈傷組織：指在人工培養(yǎng)基上由外植體長出來的一團無序生長的薄壁 細胞。3、脫分化：已分化的細胞在一定因素作用下重新恢復分裂機能并改變原來 的發(fā)展方向而沿著一條新的途徑發(fā)育的過程。4、再分化：脫分化的細胞團或組織經重新分化而產生出新的具有特定結構 和功能的組織或器官的一種現(xiàn)象。5、胚狀體：指在組織培養(yǎng)過程中，由植物體細胞所形成的類似于合子胚的 結構。它具有根、莖結構，能夠一次性形成再生植株。6、N6培養(yǎng)基：是1974年朱至清等為水稻等單子葉植物的花藥培養(yǎng)而設 計的。其特點是成分較簡單，KNO3和(NH4)

2、2SO4含量高。7、母液：為了避免每次配制培養(yǎng)基都要對兒十種化學藥品進行稱量，將培 養(yǎng)基中的各種成分，按原量10倍、100倍或1000倍稱量，配成濃縮 液，這種濃縮液叫做母液。這樣，每次配制培養(yǎng)基時，取其總量的 1/10、1/100. 1/1000,加以稀釋，成培養(yǎng)液。8、器官發(fā)生途徑：從器官外植體誘導愈傷組織，經愈傷組織細胞的分化 再生成植株的方式。上，然后將砧木、接穗一起在培養(yǎng)基上培養(yǎng)。10、 初代培養(yǎng)：是指接種后外植體最初的幾代培養(yǎng)，獲得外植體的無性 系。11、 繼代培養(yǎng)：是指初代培養(yǎng)獲得的無根芽苗、愈傷組織、胚狀體、原球 莖等轉移到新的培養(yǎng)基上，進行擴大繁殖的過程。12、 種質:指親代

3、通過生殖細胞或體細胞傳遞給子代的遺傳物質。13、 消毒：是指殺死病原微生物，但并不一定殺死細胞芽飽的方法。方法。填空題：1、根據所培養(yǎng)的植物材料的不同，把組織培養(yǎng)分為5種類型：愈傷組織培 養(yǎng)、懸浮細胞培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、莖尖分生組織培養(yǎng)和原生質體培養(yǎng)。2、初代培養(yǎng)建立的無性繁殖系包括：莖梢、芽叢、胚狀體和原球莖等。3、莖尖培養(yǎng)的一般方法是固體培養(yǎng)法和紙橋培養(yǎng)法。4、不定芽產生的途徑有外植體上直接產生和由外植體誘導的愈傷組織上 產生。5、生物脫毒的方法有莖尖分生組織脫毒法、愈傷組織脫毒法和微體嫁接離 體培養(yǎng)脫毒法。6、植物基因轉化的方法有農桿萌介導法、基因槍轉化法和聚乙二醇介導法。7、種質保存的方法

4、有原地保存和異地保存。8、常用培養(yǎng)基有MS培養(yǎng)基、N6培養(yǎng)基和懷特培養(yǎng)基等。9、植物組織再生的途徑有胚狀體途徑和細胞途徑。10、 葉培養(yǎng)時葉片腹面向上放置利于芽的分化。問答題：1、MS培養(yǎng)基的基本成分。答:糖的作用：提供碳源(能源)；%1活性炭作用：吸附有害物質、不易褐化、有利生根等；%1 PH 值 5.6-5.8 左右；%1激素種類及其作用：a.生長素類：誘導細胞的分裂和根的分化；b.細胞分裂素類：促進植物細胞的分裂和不定芽形成打破頂端優(yōu)勢形成叢 生芽，有利于芽的增值，常用于繼代培養(yǎng)和增值培養(yǎng)；c. 2,4.D、NAA:誘導愈傷組織；d.IBA:誘導生根；e.細胞分裂素和生長素的比例高時，產

5、生芽；比例低時，產生根。2、培養(yǎng)基的配置過程？答：(1)母液的量取及培養(yǎng)基的配制：根據需要配置的營養(yǎng)基體積，計 算所需藥品及水的用量，稱取所需的蔗糖、瓊脂放于燒杯中；量取一定 量的去離子水或者是自來水，一般是培養(yǎng)基量的80%-90%,加入到搪瓷鍋或 不銹鋼鍋內并加熱，然后吸取母液；母液的吸取量應根據母液擴大倍數 和每次配置營養(yǎng)基的量，計算出每次吸取母液的量；按照大量元素、微 量元素、鐵鹽、有機物、生長調節(jié)物質母液的順序編號置于操作臺上，按 順序量取各種母液放于另一燒杯中；水開后，加入蔗糖和瓊脂，不斷 攪 拌，防止粘鍋底，直至瓊脂全部溶解位置。；將量取好的各種母液倒入 上述已加熱的鍋中，不斷攪拌

6、，使其均勻溶解；為了精確定容，可先 在 標準溫度下定容，然后在培養(yǎng)基熬煮好的溫度下找到對應的刻度，并以此 刻度進行定容。(2)調整培養(yǎng)基的pH值：用酸度計測試，準確度高，X寸精密實驗等研 究工作有利；用精密pH試紙，可用于育苗和生產工作。(3)培養(yǎng)基的分裝：要趁熱分裝，一般每瓶40mL或100mL左右；用棉 塞或封口膜等封口，用線繩或橡皮筋捆扎，及時做好標記。(4)培養(yǎng)基的滅菌和保存：用高壓滅菌鍋在Ll1.2kg/cn?條件下維持15 20min即可滅菌；讓培養(yǎng)基自然冷卻至凝固后置于10。(2以下保存，含生 長調節(jié)物質的培養(yǎng)基在45。(2黑暗處保存更為理想。應注意培養(yǎng)基應在2 周內用完。3、常

7、用滅菌技術。答：物理滅菌：(1)熱力滅菌：最常用的方法包括干熱滅菌和濕熱滅菌法。 干熱滅菌的對象是不含水、耐高溫、新器皿工具、污染器皿和用具等。 濕熱滅菌的穿透力強、滅菌時間短，也是最常用的一利方法。常采用間 歇滅菌和加壓滅菌法。a.間歇滅菌的對象是不耐高溫(100度)物品或有機溶 劑;b.高壓滅菌時溫度121。o維持20mino(2)輻射滅菌：常用紫外線/紫外燈滅菌，應注意避免直接在燈下操作。(3)過濾滅菌：濾膜孔徑為0.45或0.20微米。0.45微米濾膜可過濾酶系或小量液體培養(yǎng)基；0.20毫米濾膜除去病毒以外的所有微生物?；瘜W滅菌：常用的化學滅菌劑有含氯化合物：常用的為漂白粉、0.1 %

8、氯 化汞、次氯酸鈉，用于物體或外植體滅菌；過氧化物：36%雙氧水，0.2%過氧乙酸；醇類：7o %乙醇，用于外植體、皮膚、器皿等；季胺 鹽類：0.10.5%新潔爾溶液，用于污染物表面；酚類：35%石炭峻或 煤 酚皂，用于噴灑房間或處理污染物表面；醛類：常用甲醛、戊二醛熏 蒸房間。4、花粉培養(yǎng)的意義？答：自交作物育種中，加速純化和提高選擇效率;%1在異交作物中快速獲得純系；%1提高突變育種的效率；%1獲得異緣附加系、代換系和易位系。5、花藥培養(yǎng)取材的時間及預處理與滅菌？答：取材的關鍵在于選取花粉處于合適的發(fā)育期的花藥，花粉發(fā)育時期觀 察，從一個花蕾中，取下一枚花約，觀察其發(fā)育期，其余花弱可供接種

9、用;材料的預處理，選取花粉處于合適發(fā)育期的花蕾，將花蕾在低溫下處理310天；花蕾滅菌，將經過冷處理的花蕾在70%酒精浸漬兒秒，然后用10%漂白粉20min或0.1 %升汞lOmin,最后用無菌水沖洗干凈即可。6、外植體的表面消毒方法？答：一般消毒方法：取材后將老的組織去掉，自來水沖洗，洗衣粉水洗（簡 單殺菌），自來水沖洗，70%酒精處理（10-30秒），消毒劑處理（升汞5 一 12分鐘），滅菌蒸餡水沖洗3-5遍。材料內部所帶雜菌的處理：二次滅菌；加入抗生素，注意抗生素的用 量，高濃度容易造成培養(yǎng)物的死亡；取生長期旺盛的生長點部位作為起 始培養(yǎng)的外植體；取被內生菌污染的培養(yǎng)物的莖尖不停的轉接。7

10、、 試管苗的特點？答：葉片角質不發(fā)達，無表皮毛或僅有少量的表皮毛，葉片上出現(xiàn)大量的 水孔，氣孔數量和大小超過普通幼苗。因此，再生植株不能馬上適應外界自然條件，必須有一個移植馴化、煉苗的過程。試管苗的移植馴化主要包 括基質的選擇、煉苗和苗期管理等環(huán)節(jié)。8、 無病毒植株的鑒定方法？答：血清鑒定法：利用抗原與抗體特異性結合的原理來鑒定，這種方法 需要有特定病毒的抗體。%1生物鑒定法（敏感植物鑒定法）：利用對植物病毒特別敏感的品種或品 系，進行接種鑒定。有些植物對病毒極為敏感，一旦感染病毒就會在其葉片乃至全株上表現(xiàn)特有的病斑，每種病毒都有自己的敏感植物。%1電子顯微鏡鑒定法:直接觀察經脫毒培養(yǎng)的葉片,

11、檢查是否有病毒質粒的存在，是一種既準確又科學的方法。9、 玻璃化的產生的原因及如何處理？答：玻璃化是指芽苗的莖、葉腫脹，呈半透明水浸狀態(tài)，葉片反卷，脆而 易斷。產生的原因：培養(yǎng)基中的細胞分裂素含量過高，滲透勢較低；瓶內濕 度過大；透氣性差。解決方法：提高培養(yǎng)基的滲透勢（加蔗糖、瓊脂或干燥劑等）；降低 培養(yǎng)基中細胞分裂素水平和鉉態(tài)氮含量；增加容器的通風、光照，降低 培養(yǎng)溫.度。10、褐化的產生的原因及如何處理？答：褐化是指接種后外植體（尤其是切口處）表面變褐，甚至培養(yǎng)基也變 褐的現(xiàn)象。產生的原因：植物的種類；外植體的年齡；培養(yǎng)基的成分：細胞分 裂素和無機離子濃度過高；培養(yǎng)條件：光照過強、溫度過高

12、、培養(yǎng)時間 過長。解決辦法：選擇合適的外植體，選擇年幼的植株，選擇處于生長旺盛期 的植物材料，調節(jié)合適的培養(yǎng)條件。如降低細胞分裂素含量、無機鹽水 平、降低濕度和光照等；連續(xù)轉移培養(yǎng)。對容易褐變的外植體，接種后, 每隔12.24h轉一次，經7-10d的連續(xù)轉移，可使褐變現(xiàn)象得到控制或大為 減輕；加入抗氧化劑。培養(yǎng)基中加入半胱氨酸、抗壞血酸等可有效的避 免褐化或減輕褐變現(xiàn)象。11、莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒的原理？答：取材大小為0.1 0.2mm。原理：植物細胞分裂和細胞繁殖之間存在相互競爭，在迅速分裂的植物 細胞中試正常核蛋白合成占優(yōu)勢，而在植物細胞伸長期間是病毒核蛋白合 成占優(yōu)勢。%1生長點分生組織是活躍分裂細胞，其分裂速度比病毒DNA復制速度快， 股采用旺盛分裂的生長錐離體培養(yǎng)，就有可能脫除植物病毒。12、 莖尖培養(yǎng)的意義（用途）？答：無性系快速繁殖；培養(yǎng)無病毒苗；%1品種改良；%1理論基礎研究。13、 高壓滅菌的步驟。答：加水：水超過支架1cm；%1裝鍋：將包扎好的試管或三角瓶直立放在內筒中，不要裝得過緊、過滿；%1蓋嚴鍋蓋：先將軟管對好內筒插孔，蓋嚴鍋蓋，對角旋轉旋鈕；%1加熱：插上電爐插頭或推上電閘加熱；%1排放冷空氣：汽鍋內壓力上