高效液相色譜

1、高效液相色譜 19.2.2.1 適用范圍 適用于牛肉、牛奶、豬肉、雞肉、雞肝、雞蛋、兔肉、兔肝中硫脲嘧啶、甲巰咪唑、甲基硫氧嘧啶、丙硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶和2-巰基苯并咪唑殘留的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。本辦法的測定低限為：硫脲嘧啶、甲巰咪唑50g/kg；甲基硫氧嘧啶、2-巰基苯并咪唑30g/kg；丙硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶5g/kg。 19.2.2.2 辦法原理 采納提取試樣中殘留的、苯基硫氧嘧啶和2-巰基苯并咪唑，提取液經(jīng)液液分配和hlb固相萃取柱凈化后，采納高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜定性檢測，內(nèi)標法定量。 19.2.2.3 試劑和材料 甲醇、甲酸、乙酸乙酯、：高效液相色譜級；、二水乙二胺四乙酸二

2、鈉：分析純；無水硫酸鈉：650灼燒4h，置于干燥器中備用。 0.1mol/l乙二胺四乙酸二鈉溶液：精確稱取37.2g二水乙二胺四乙酸二鈉，用水溶解并定容至1l；乙腈飽和的正己烷：量取正己烷80ml于100ml分液漏斗中，加入適量乙腈后，強烈振搖，待分配平衡后，棄去乙腈層；0.1%甲酸水溶液：精確量取1ml甲酸，用水定容至1l；0.0025mol/l磷酸：精確量取0.2ml磷酸，用水定容至1l；溶解液：90ml 0.1%甲酸水溶液中加入10ml甲醇。 標準物質(zhì)：硫脲嘧啶(2-thiouracil，tu)、甲巰咪唑(methimazole，tap)、甲基硫氧嘧啶(methyl thiouracil

3、，mtu)、丙硫氧嘧啶(propyl thiouracil，ptu)、苯基硫氧嘧啶(phenyl thiouracil，phtu)、2-巰基苯并咪唑(2-mercaptobenzimidazole，mbi)，純度均99%。 內(nèi)標物質(zhì)：5，6-二甲基硫氧嘧啶(5，6-dimethyl-2-thiouracil，dmtu)，純度99%。 標準儲備溶液：精確稱取適量標準品(精確至0.0001g)，用甲醇溶解，配制成濃度為100g/ml的標準儲備溶液，-18冷凍避光保存，有效期3個月。 混合中間標準溶液：精確移取各1ml標準儲備液于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成濃度為10g/ml的混合中間

4、標準溶液，4冷藏避光保存，有效期1個月。 混合標準工作溶液：按照需要用甲醇把混合中間標準溶液稀釋成適合濃度的混合標準工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。 內(nèi)標標準儲備液：精確稱取適量5，6-二甲基硫氧嘧啶(精確至0.0001g)，用甲醇溶解，配制成濃度為100g/ml的內(nèi)標標準儲備溶液，-18冷凍避光保存，有效期3個月。 內(nèi)標標準工作溶液：精確移取0.1ml內(nèi)標標準儲備液于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成濃度為1g/ml的內(nèi)標標準工作溶液，4冷藏避光保存，有效期1個月。 氮氣：純度999%。氬氣：純度9999%。 hlb固相萃取柱：200mg，6ml，或相當者。 微孔濾膜：0.20um，有機相。 1

5、9.2.2.4 儀器和設(shè)備 液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀：配備電噴霧離子源(esi)；組織搗碎機；分析天平：感量0.0001g，0.01g；均質(zhì)器：10000r/min；振蕩器；離心機：10000r/min；氮吹儀；旋渦混合器；超聲波水??；減壓濃縮儀；梨形瓶：100ml；具塞塑料離心管：50ml；刻度試管：10ml；移液槍：5ml，1ml，200l；分液漏斗：50ml。 19.2.2.5 樣品前處理 (1) 試樣制備 a.肌肉和內(nèi)臟：從原始樣品取出有代表性樣品約500g，用組織搗碎機充分搗碎混勻，均分成兩份，分離裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標明標志。將試樣置于-18冷凍避光保存。 b.奶：從原始樣品

6、取出有代表性樣品約500g，充分攪拌混勻，均分成兩份，分離裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標明標志。將試樣置于4冷藏避光保存。 c.蛋：從原始樣品取出有代表性樣品約500g，去殼后用組織搗碎機攪拌充分混勻，均分成兩份，分離裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標明標志。將試樣置于4冷藏避光保存。 注：在制樣的操作過程中，應防止樣品污染或發(fā)生殘留物含量的變幻。 (2)提取 稱取約5g試樣(精確至0.01g)于50ml塑料離心管中，依次加入150l內(nèi)標標準工作液、50ul巰基乙醇、30l 0.1mol/l的乙二胺四乙酸二鈉溶液和適量無水硫酸鈉，吸去樣品中的水分，再加入20ml乙酸乙酯，用均質(zhì)器以10000r

7、/min均質(zhì)1min后，振蕩提取20min，再以4000r/min離心5min，收集上清液于100ml梨形瓶中。殘渣用20ml乙酸乙酯再提取一次，合并上清液，在40水浴中減壓濃縮至近干。殘留物用10ml乙腈溶解，并轉(zhuǎn)移至50ml分液漏斗中，用30ml乙腈飽和后的正己烷分三次液液分配，去除油脂。收集乙腈層，在40水浴中減壓濃縮至近干，殘留物用10ml 0.0025mol/l磷酸溶解，超聲波水浴助溶5min后，待凈化。 (3)凈化 hlb固相萃取柱依次用5ml甲醇、5ml水預淋洗后，轉(zhuǎn)入10ml樣品提取液。先用5ml水舉行淋洗，棄去；再用5ml甲醇舉行洗脫，收集洗脫液于10ml刻度試管中。囫圇固相萃取凈化過程控制流速不超過2ml/min。洗脫液在40下用n2吹干。殘留物用1ml溶解液溶解，渦動1min后，過0.2um微孔濾膜，供儀器檢測。 (4) 混合基質(zhì)標準溶