人參皂苷改善胰島素抵抗的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)

1、人參皂苷改善胰島素抵抗的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)林衛(wèi)東1，2，3，陳超1，2，3*，梁生旺1，2，3，田元新4，王淑美1，2，3*（1廣東藥科大學(xué)，廣東廣州510006；2廣東高校中藥質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，廣東廣州510006；3國家中醫(yī)藥管理局中藥數(shù)字化質(zhì)量評價技術(shù)重點研究室，廣東廣州510006；4南方醫(yī)科大學(xué)，廣東廣州510515）收稿日期：2016-01-27基金項目：國家自然科學(xué)基金項目（81274059，81274060，81473413）mail ：2395903468qqcom 摘要：目的采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探索人參皂苷改善胰島素抵抗的作用。方法將19個胰島素抵抗關(guān)鍵靶點與52種人參皂苷進行分

2、子對接，再把篩選出來的成分與磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK ）、過氧化物酶體增殖物激活受體（PPA）、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K ）和c-Jun 氨基末端激酶（JNK ）信號通路上的31個靶點對接，并通過Cytoscape 3. 2. 1軟件進行網(wǎng)絡(luò)分析。結(jié)果17個化合物protopanaxadiol 、protopanaxatriol 、notoginsenoside 、6-malonylginsenosided1、gypenoside LXIX 、ginsenoside h2、ginsenoside g1、ginsenoside-b2、ginsenoside-c和ginsenoside

3、b3，ginsen-oside-s2、ginsenoside h3、ginsenoside-a0、ginsenoside f、ginsenoside-a1、ginsenoside-a2、ginsenoside-s1與4條信號通路的蛋白具有很強的相互作用，其中前10個成分已有文獻驗證。結(jié)論后7種人參皂苷成分也可能是改善胰島素抵抗的靶點。關(guān)鍵詞：網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；分子對接；人參皂苷；網(wǎng)絡(luò)分析；胰島素抵抗中圖分類號：966文獻標(biāo)志碼：A文章編號：1001-1528（2016）07-1455-07doi ：10. 3969/jissn1001-1528. 2016. 07. 004Network pharm

4、acology of ginsenosides improving insulin resistanceLIN Wei-dong 1，2，3，CHEN Chao 1，2，3*，LIANG Sheng-wang 1，2，3，TIAN Yuan-xin 4，WANGShu-mei 1，2，3*（1Guangdong Pharmaceutical University ，Guangzhou 510006，China ；2Engineering and Technology esearchCenter for Chinese Materia Medica Quality of Universities

5、 of Guangdong Province ，Guangzhou 510006，China ；3Key Laboratory of Digital Quality Evaluation of Chinese Materia Medica of State Administration of TCM ，Guangzhou 510006，China ；4Southern Medical University ，Guangzhou 510515，China ）ABSTACT：AIM To study the roles of ginsenosides in improving insulin re

6、sistance by network pharmacological methodMETHODSNineteen key targets related to insulin resistance were molecular-docked with fifty-two gin-senosides ，then the selected ginsenosides were taken with thirty-one targets of adenosine monophosphate activated protein kinase （AMPK ），peroxisomeproliferator

7、-activated receptor gamma （PPA），phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K ）and c-Jun N -terminal kinase （JNK ）Meanwhile ，the network analysis was carried out by Cytoscape 3. 2. 1softwareESULTSSeventeen compounds ，including protopanaxadiol ，protopanaxatriol ，notoginsen-oside ，6-malonylginsenoside d1，gypeno

8、side LXIX ，ginsenoside h2，ginsenoside g1，ginsenoside-b2，gin-senoside-c，ginsenoside b3，ginsenoside-s2，ginsenoside h3，ginsenoside-a0，ginsenoside f，ginsenoside-a1，ginsenoside-a2and ginsenoside-s1had close interactions with the proteins of four signaling pathwaysThe former ten ginsenosides had been conf

9、irmed by literatureCONCLUSION The latter seven ginsenosides may al-so be the targets improving insulin resistanceKEY WODS：network pharmacology ；molecular docking ；ginsenosides ；network analysis ；insulin resistance5541過去，藥物研發(fā)的主導(dǎo)思想是設(shè)計高選擇性配體藥物，然而傳統(tǒng)的高選擇性單靶點藥物很難治愈一些復(fù)雜疾病。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作為中藥研究的學(xué)科前沿，融合了系統(tǒng)生物學(xué)和多向藥理學(xué)的思想

10、，它從整體的角度探索藥物與疾病的關(guān)聯(lián)性，強調(diào)從藥物、靶點與疾病間相互作用的整體性和系統(tǒng)性出發(fā)，反映及闡釋中藥的多成分-多靶點作用關(guān)系1。糖尿病是目前花費多、負(fù)擔(dān)沉重的慢性病之一，發(fā)病率正在全球范圍內(nèi)迅速增長。糖尿病發(fā)展到一定時期，可出現(xiàn)各種并發(fā)癥，從而使患者生活質(zhì)量下降，如中風(fēng)、冠心病、糖尿病足的大血管病變、腎病、眼底病變等2。因此，如何治療和預(yù)防糖尿病的發(fā)生和發(fā)展成為公眾矚目的焦點。糖尿病的主要病理機制是胰島素抵抗3，從糖尿病本身來看，并不是由單一基因或靶點導(dǎo)致的疾病，胰島素抵抗發(fā)病機制復(fù)雜，多數(shù)具有多基因相關(guān)性，在臨床上使用單一靶點的藥物并不能實現(xiàn)胰島素抵抗的有效控制或治愈4。因此，進行胰

11、島素抵抗的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究具有重要意義。人參為五加科植物人參Panax ginseng C. A. Mey的干燥根和根莖。現(xiàn)代醫(yī)藥研究表明，人參在胰島素抵抗方面有一定療效5，但其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機制尚不明確。本研究從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)出發(fā)，通過對大量中藥及上市新藥對改善胰島素抵抗相關(guān)文獻的檢索和梳理，篩選出4條與胰島素抵抗相關(guān)信號通路，從系統(tǒng)生物學(xué)和網(wǎng)絡(luò)生物學(xué)的角度、在分子網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的層面認(rèn)識人參皂苷改善胰島素抵抗的多組分、多靶點、多途徑的整體性作用機制。1材料與方法1. 1材料本研究應(yīng)用的軟件為ChemBioOffice 2008（美國劍橋公司）中的ChemBioDraw 模塊、Open Babel-

12、2. 3. 2、Sybyl-7. 3（美國Tripos 公司）中的Surflex-Dock 模塊和Cytoscape 3. 2. 1。軟件運行環(huán)境為Microsoft Windows XP Professional 操作系統(tǒng)。1. 2人參皂苷所含成分的收集從化學(xué)專業(yè)數(shù)據(jù)庫、中藥原植物化學(xué)成分手冊、TCMSP 以及人參的國內(nèi)外文獻調(diào)研，共收集得到人參177種化學(xué)成分，其中人參皂苷52種成分。通過ChemBio-Draw 軟件繪制分子結(jié)構(gòu)后，導(dǎo)入軟件Sybyl-7. 3進行三維結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換、加氫處理及Minimize 能量優(yōu)化，結(jié)果保存為mol2文件格式。1. 3配體與關(guān)鍵蛋白對接通過大量國內(nèi)外文獻調(diào)

13、研關(guān)于胰島素抵抗的靶點，在蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫PDB 搜索過氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisomeproliferator-activated receptor gamma ，PPA）、c-Jun 氨基末端激酶1（c-Jun N-terminalkinase 1，JNK1）、胰島素受體底物1（insulin re-ceptor substrate-1，IS-1）等19個有復(fù)合晶體結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵靶點。利用分子對接方法對人參皂苷作用靶點進行篩選，提取靶點晶體結(jié)構(gòu)的配體以暴露活性位點、除水分子、加氫和除側(cè)鏈的殘基后，采用Sybyl-7. 3對接軟件的Surflex-Dock 程序與人參皂苷成分進

14、行對接。1. 4分子蛋白及蛋白通路的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建在KEGG 、BioCarta 、Drug-Bank 數(shù)據(jù)庫上，針對胰島素抵抗的靶蛋白網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)上述靶點集中在磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK ）、過氧化物酶體增殖物激活受體（PPA）、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K ）和c-Jun 氨基末端激酶（JNK ）4條信號通路6。我們把打分高于閾值并且符合類藥性的化合物與這4條通路中和胰島素抵抗有關(guān)的31個靶蛋白進行分子對接，方法同“2. 2”項。為了更加直觀和準(zhǔn)確地找出具有活性的成分，明確藥物主次要靶點，我們使用構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)圖這一關(guān)鍵技術(shù)。我們把對接結(jié)果導(dǎo)入Cy-toscape 3. 2. 1網(wǎng)絡(luò)分析軟件，構(gòu)建d

15、rug-target （D-T ）網(wǎng)絡(luò)，通過network analyzer 分析人參皂苷藥物分子與靶蛋白的D-T 網(wǎng)絡(luò)特征，如網(wǎng)絡(luò)度（de-gree ）、介數(shù)（betweenness ），觀察人參皂苷化合物與靶點的作用情況以及靶點在生物通路中的分布情況。2結(jié)果2. 1分子對接結(jié)果結(jié)合分子對接結(jié)果和類藥性分析，本課題組已經(jīng)篩選出17個至少高于一個靶點的閾值的分子，分別是protopanaxadiol （S4）、protopanaxatriol （S5）、notoginsenoside 6（S35）、6-malonylginsenoside d1（S41）、ginsenoside h3（S62）

16、、gypenoside LXIX （S78）、ginsenoside-s2（S80）、ginsenoside h2（S81）、ginsenoside-s1（S85）、ginsenoside g1（S160）、ginsenoside-a0（S168）、ginsenoside f（S170）、ginsen-oside-a1（S171）、ginsenoside-a2（S172）、ginsenoside-b2（S174）、ginsenoside-c（S175）、ginsenoside b3（S176）。2. 2可靠性驗證從AMPK 、PPA、PI3K 和JNK4條信號通路上找到31個靶蛋白，要驗證復(fù)合

17、晶體結(jié)構(gòu)靶點是否可靠，需要將原配體抽離出來，然后重新對接回復(fù)合物的活性口袋。如果計算得到對6541接后配體的構(gòu)象與原晶體結(jié)構(gòu)中配體構(gòu)象的均方根偏差（MSD）值小于2 ，證明該對接方法可靠，見表1，表明所選用的蛋白結(jié)構(gòu)都比較可靠，可用于虛擬篩選。表1蛋白靶點的總分值及MSD值Tab. 1Protein targets total score values and MSDvalues靶點蛋白庫編號總分均方根偏差過氧化物酶體增殖物激活受體（PPA）1I7G 7. 610. 62過氧化物酶體增殖物激活受體（PPA）2PG7. 700. 99過氧化物酶體增殖物激活受體（PPA）3OZ09. 491. 9

18、5磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K ）4WWP 7. 061. 09蛋白激酶A （PKA ）3L9L 8. 171. 51蛋白激酶B （Akt ）4EKL 10. 080. 30腫瘤壞死因子-（TNF-）2AZ56. 820. 44胰島素受體底物1（IS1）1K3A 8. 031. 65胰島素受體底物12（IS2）3BU510. 311. 95c-Jun 氨基末端激酶1（JNK1）4AWI 7. 790. 95c-Jun 氨基末端激酶2（JNK2）3NPC 17. 080. 57c-Jun 氨基末端激酶3（JNK3）1PMN 9. 850. 78人雷帕霉素靶蛋白（mTO）4JSX 7. 260.

19、31胰島素受體（INS）4IBM 5. 770. 56磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK ）3AQV 6. 950. 51磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK ）2UV47. 661. 24有絲分裂原活化蛋白激酶（MAPK ）4QNY 10. 071. 43促分裂原活化蛋白激酶2（MEK2）1S9I 9. 530. 91細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1（EK1）2ZOQ 7. 891. 01細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶2（EK2）1TVO 8. 830. 58p38絲裂原激活蛋白激酶（p38MAPK ）1KV19. 190. 55細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶5（Erk5）4B998. 951. 41抑癌基因（LKB1）2WTK 8.

20、421. 66生長因子受體結(jié)合蛋白2（GB2）3IN811. 090. 6670k 道爾頓核糖體蛋白S6激酶（p70S6K ）3A6010. 130. 26原癌基因絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶1af13OMV 6. 251. 15B 細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl2）4AQ39. 790. 66血管內(nèi)皮型細(xì)胞一氧化氮合酶（eNOS ）3EAH 6. 010. 78KB 抑制蛋白激酶（IKK ）4KIK 10. 290. 18固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（SEBP）4YHC 5. 171. 46acetyl-CoA carboxylase （ACC2）3GID12. 990. 392. 3網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析將這1

21、7個成分與AMPK 、PPA、PI3K 和JNK 4條信號通路上的靶蛋白進行分子對接，打分大于5. 0的認(rèn)為小分子與靶點可能有較好的活性。人參皂苷只作用于其中22個靶點，結(jié)果見表2。把對接結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3. 2. 1網(wǎng)絡(luò)分析軟件構(gòu)建藥物-靶點網(wǎng)絡(luò)并進行網(wǎng)絡(luò)分析，結(jié)果見表3、表4和圖1。通過網(wǎng)絡(luò)分析可知，平均每個化合物對應(yīng)8. 5個靶點，平均每個靶點對應(yīng)6. 6個化合物，體現(xiàn)了人參皂苷改善胰島素抵抗的作用是多成分多靶點的特點。靶點-通路的關(guān)系我們也構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)進行網(wǎng)絡(luò)可視化（圖2），結(jié)果顯示，通路與通路之間也是以某種關(guān)系聯(lián)系在一起而不是獨立分開的 。圖1藥物-靶點網(wǎng)絡(luò)Fig. 1Dru

22、g-target （D-T ）network75412016年7月第38卷第7期中成藥Chinese Traditional Patent Medicine July 2016Vol38No7表2人參皂苷虛擬篩選結(jié)果Tab. 2esultsof virtual screening of ginsenosides化合物PPAPPAPPAAMPK AMPK PI3K PKA Akt SEBPTNF-S45. 235. 52S55. 87S35S416. 875. 48S625. 236. 80S788. 29S807. 69S815. 52S857. 47S160S1685. 24S1705. 6

23、0S1716. 427. 28S1727. 66S1747. 17S1756. 27S1768. 42化合物IS1JNK1JNK2JNK3ACC2IS2mTOINSLKB1GB2p70S6K S47. 856. 265. 856. 695. 025. 735. 685. 82S55. 266. 587. 026. 32S355. 189. 755. 605. 016. 776. 99S416. 427. 347. 63S626. 797. 496. 216. 595. 46S785. 4510. 186. 398. 47S806. 666. 756. 2311. 906. 17S815. 81

24、8. 506. 397. 59S855. 586. 818. 356. 60S1605. 917. 336. 76S1688. 958. 236. 4495. 755. 49S1705. 019. 007. 695. 53S1715. 117. 498. 05S1727. 736. 715. 819. 74S1748. 447. 877. 665. 47S1758. 187. 055. 457. 545. 336. 088. 84S1768. 245. 558. 547. 525. 366. 87化合物MAPK af1MEK2EK1EK2p38MAPKErk5Bcl2eNOS IKK S46.

25、 385. 936. 435. 59S57. 117. 245. 145. 106. 60S355. 105. 05S417. 285. 29S627. 157. 315. 256. 48S785. 045. 77S808. 01S816. 506. 185. 505. 397. 54S858. 42S1605. 725. 305. 16S1687. 2510. 62S1707. 506. 34S1715. 7010. 74S1727. 635. 755. 49S1745. 676. 288. 18S1755. 855. 325. 76S17610. 7210. 406. 735. 54854

26、1第38卷第7期中成藥Chinese Traditional Patent Medicine Vol38No7表3D-T 網(wǎng)絡(luò)中化合物節(jié)點的網(wǎng)絡(luò)特征Tab. 3Network features of compound nodes in the D-T network 表4D-T 網(wǎng)絡(luò)中靶點節(jié)點的網(wǎng)絡(luò)特征Tab. 4Network features of target nodes in the D-T network 圖2靶點-通路網(wǎng)絡(luò)Fig. 2Target-pathway （T-P ）network3討論根據(jù)分子對接結(jié)果，本課題組已經(jīng)篩選出17個至少高于一個靶點的閾值的分子，對計算得到的人參

27、皂苷與胰島素抵抗疾病相關(guān)的有效物質(zhì)進行了文獻驗證，發(fā)現(xiàn)預(yù)測出的protopanaxadiol 7、proto-panaxatriol 8、notoginsenoside 69、6-malonylgin-senoside d110、gypenoside LXIX 11、ginsenosideh212、ginsenoside g113、ginsenoside-b214、ginsenoside-c15和ginsenoside b316等10個化合物均有相關(guān)文獻報道，證明了我們研究方法的合理性。而ginsenoside-s2、ginsenoside h3、ginsen-oside-a0、ginseno

28、side f、ginsenoside-a1、gin-senoside-a2、ginsenoside-s1等7個化合物的藥效學(xué)研究及作用機制有待進一步驗證。磷酸腺苷活化蛋白激酶（adenosine monophos-phate-activated protein kinase ，AMPK ）是一種在細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)能量代謝的蛋白激酶，廣泛存在于骨骼肌、肝臟、胰腺和脂肪組織中。肝臟和骨骼肌中的甘油三酯過度聚集或游離脂肪酸（FFAs ）含有量增多，可以引起或加重胰島素抵抗17，AMPK 可通過增加脂肪酸氧化、減少甘油三酯的合成而改善胰島素抵抗。根據(jù)對接結(jié)果，17個人參皂苷成分都作用于這個通路，說明其可能是

29、人參皂苷改善胰島素抵抗在AMPK 通路的主要有效物質(zhì)，其藥效學(xué)研究有待進一步驗證。過氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisomeproliferation activated receptors ，PPAs）是20世紀(jì)90年代初克隆出來的核受體超家族中的一類受體18。PPAs存在3種亞型，分別為PPA、。PPAs是營養(yǎng)代謝和能量平衡主要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子。目前，PPAs激動劑已經(jīng)廣泛應(yīng)用于糖尿病、脂質(zhì)紊亂、代謝綜合征等疾病的臨床治療19。根據(jù)對接結(jié)果，篩選出來的17個人參皂苷與這個通路上的12個靶點有7個沒有直接作用，說明此通路可能不是人參皂苷改善胰島素抵抗的主要通路。對接多于6. 6個化合物這一

30、平均值的只有TNF-和Erk5，分別有8個和12個，說明在這個通路上人參皂苷主要作用于這2個靶點。PI3K 是骨骼肌中胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑級聯(lián)反應(yīng)中關(guān)鍵蛋白分子之一，其表達異常可影響葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4（GLUT4）的合成、分泌、移位等變化，從而使血糖升高。PI3K 在胰島素對營養(yǎng)物質(zhì)9541第38卷第7期中成藥Chinese Traditional Patent Medicine Vol38No72016 年 7 月 第 38 卷 第 7 期 中成藥 Chinese Traditional Patent Medicine July 2016 Vol 38 No 7 代謝的調(diào)控 （ 如提高葡萄糖的轉(zhuǎn)

31、運與合成、 脂質(zhì) 代謝） 方面起著重要的作用， 當(dāng)胰島素與胰島素 受體結(jié)合造成受體自體磷酸化后， 胰島素 受 體 1 （ IS1 ） 便結(jié)合到受體磷酸化的酪氨酸殘基上， 隨 后 PI3K 與 IS1 結(jié)合并磷酸化產(chǎn)生 PIP3 ， PIP3 可 以激活一連串的細(xì)胞反應(yīng)， 將 GLUT4 轉(zhuǎn)運至細(xì)胞 膜上，提高葡萄糖的吸收， 活化糖原激酶 3 ， 增加 20 糖原的合成 。根據(jù)對接結(jié)果，17 個人參皂苷成 malonylginsenoside d1 外， 其他 16 個都 分除了 6作用于這個通路， 說明這 16 個成分可能是人參皂 苷改善胰島素抵抗在 PI3K 通路的主要有效物質(zhì)， 其藥效學(xué)研

32、究有待進一步驗證。 JNK 是一種重要的蛋白激酶， 它可以被 TNF 、FFAs 等多種因素激活。JNK 信號通路在胰島素 抵抗形成中起重要作用。由于胰島素受體第五蛋白 分子含有 JNK1 結(jié)合基本序列， 增高的 JNK1 可與 IS1 蛋白結(jié)合，并誘導(dǎo) IS1 絲氨酸 307 位點的磷 酸化水平增高， 抑制 ISs 正常的酪氨 酸 磷 酸 化， 干擾胰島素信號經(jīng)胰島素受體受體 / PI3K 通路下傳 21 至效應(yīng)器， 進而誘發(fā)胰島素抵抗 。 根據(jù)對接結(jié) 果，其中 JNK1 和 IS1 共有的化合物有 3 個， 即 protopanaxadiol、 ginsenoside f 和 ginsen

33、osidec。 說明其可能是人參皂苷改善胰島素抵抗在 JNK 通 路的 主 要 有 效 物 質(zhì)， 其 藥 效 學(xué) 研 究 有 待 進 一 步 驗證。 本研究將分子計算、網(wǎng)絡(luò)分析、文本挖掘等組 合起來，從上述 4 條通路出發(fā)，研究與胰島素抵抗 有關(guān)的靶點，多靶點、多方位、多層次地對人參皂 苷進行網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究， 同時體現(xiàn)了中藥多成分、 多靶點、協(xié)同作用的特點，也給中藥復(fù)方的藥效物 質(zhì)基礎(chǔ)分析、作用機制研究提供參考。 致謝 本 實 驗 受 到 國 家 自 然 科 學(xué) 基 金 項 目 （ 81274059 、 81274060 、 81473413 ） 資 助。 同 時， 中 山 大 學(xué) 藥 學(xué) 院

34、 的 羅 海 彬 老 師 提 供 了 TIPOS SYBYL7. 3 軟件， 保證本 實 驗 的 順 利 完 成。 在 此 一并致以衷心的感謝！ 參考文獻： 1 2 劉 志 華，孫 曉 波 網(wǎng) 絡(luò) 藥 理 學(xué)： 中 醫(yī) 藥 現(xiàn) 代 化 的 新 機 遇 703 J 藥學(xué)學(xué)報， 2012 ， 47 （ 6 ） ： 696Yoshida S，Hirai M，Suzuki S，et al Neuropathy is associated with depression independently of healthrelated quality of life in Japanese patients

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45、， 青海 西寧 810001 ； 2 中國科學(xué)院西北高原生物研究所， 青海省 藏藥藥理學(xué)和安全性評價研究重點實驗室 ，青海 西寧 810001 ； 3 中國科學(xué)院大學(xué)，北京 100049 ） 摘要： 目的 通過行為絕望模型懸尾實驗 （ TST） 、不可預(yù)測性慢性溫和應(yīng)激 （ CUMS） 模型，探索藏藥佐太 （ 硫化 行為絕望模型懸尾實驗中，KM 小鼠給予佐太 14 d 后， 通過測 汞、硫磺等煅制品的混合物 ） 的抗抑郁作用。方法 定懸尾實驗不動時間 、開場實驗 （ OFT ） 、 血清中皮質(zhì)酮 （ COT ） 變化， 評價佐太的抗抑郁活性 。 構(gòu)建 CUMS 模型 KM 小鼠，給予佐太 42

46、 d， 通過糖水偏好實驗、 開場實驗和強迫游泳實驗 ， 進一步評價佐太的抗抑郁作用 。 通過 ELISA 法測定小鼠血清中 5HT ） 、 去甲腎上腺素 （ NE ） 和海馬中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子 （ BDNF ） 的水平。 羥色胺 （ 5結(jié)果 行為絕望模型懸尾實驗中，與空白組相比，佐太在劑量為 60. 697 、303. 49 mg / kg 時能顯著降低小鼠懸尾不動 時間和血清中 COT 水平。CUMS 模型實驗中，與 CUMS 模型組相比， 佐太在劑量為 6. 069 7 、60. 697 、606. 97 mg / kg 時，均可顯著提高受試小鼠的糖水偏好率 、開場實驗中的自主活動 ， 同時可顯著降低強迫游泳實驗 （ CFST ） 中的不 動時間，表明佐太能緩解慢性應(yīng)激引起的抑郁樣行為 。另外，佐太在上述 3 個劑量下，可顯著增加 CUMS 模型小鼠血 HT 的 清中 NE 和海馬中 BDNF 的水平，并在劑量為 6. 069