柴郁溫膽湯及其拆方對抑郁大鼠血清ACTH、COR及海馬cAMP的影響

1、柴郁溫膽湯及其拆方對抑郁大鼠血清ACTH、COR及海馬cAMP的影響 作者：周志華周海虹陸汎韓詠竹胡紀(jì)源王訓(xùn)【摘要】 探討柴郁溫膽湯及其拆方對抑郁大鼠血清ACTH、COR和海馬cAMP的影響。方法健康雄性SD大鼠84只，隨機(jī)分為正常組、模型組、柴郁溫膽湯組、化痰組、調(diào)氣血組、養(yǎng)心脾組、馬普替林組。參照Katz刺激方法制備慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激(CUMS)抑郁模型。采用放射免疫法測血清ACTH、COR和大鼠海馬cAMP含量。結(jié)果與正常組相比，模型組大鼠血清ACTH和COR水平明顯升高、海馬cAMP含量明顯降低。同模型組相比，柴郁溫膽湯組及調(diào)氣血組能明顯降低ACTH濃度(P0.05）；柴郁溫膽湯組

2、、化痰組和調(diào)氣血組均能顯著降低COR濃度(P0.01)；柴郁溫膽湯組、化痰組和馬普替林組均能夠顯著提升大鼠海馬cAMP的含量(P0.01)。結(jié)論慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激可以導(dǎo)致大鼠血清ACTH和COR水平升高；海馬cAMP含量下降，柴郁溫膽湯可以逆轉(zhuǎn)這種改變，其中以調(diào)氣血和化痰藥作用為主，其機(jī)制可能與其參與調(diào)節(jié)HPA軸功能和細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】 柴郁溫膽湯；組分；抑郁癥；HPA軸；ACTH；COR；cAMPUniversityAbstract:Objective To explore the effects of the traditional Chinese drugs Chaiy

3、uwendantang (CYWDT) and its component on the plasm levels of ACTH, COR and cAMP in hippocampus of depressed mode. Methods Eighty-four male rats were divided into seven groups: control group, depressed model group, group of CYWDT, group of HuaTan, group of TiaoQiXue, group of YangXinPi, group of mapr

4、otiline equally and made up models in chronic unpredictable mild stress (CUMS). The plasm levels of ACTH, COR and the level of cAMP in hippocampus were detected by radioimmunoassay. Results We found that the plasm levels of ACTH, COR were significantly increase and cAMP in hippocampus was significan

5、tly decreasd in depression model of rat. CYWDT and TiaoQiXue could significantly decreased the level of ACTH(P0.05); CYWDT, HuaTan and TiaoQiXue could significantly decreased the level of COR(P0.01). CYWDT, HuaTan and TiaoQiXue could significantly increase the level of cAMP in hippocampus. Conclusio

6、n Chronic unpredictable mild stress can increase the plasm levels of ACTH, COR and the level of cAMP in hippocampus of depression rats. CYWDT could reverse all the changes. The mechanism maybe relatd to regulate hypothalamicpituitaryadrenal axis and signal transmission in cell.Key words: Chaiyuwenda

7、ntang; component;depression; hypothalamicpituitaryadrenal axis; adrenocorticotropic hormone; cortisol; cyclic adenosine monophosphate抑郁癥(depression)是最常見的心境障礙，嚴(yán)重威脅人類的身心健康。我們在前期研究中證實(shí)柴郁溫膽湯對腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝紊亂具有良好的調(diào)節(jié)作用，且可明顯增加大鼠海馬部位PKA表達(dá)1。本實(shí)驗(yàn)擬觀察柴郁溫膽湯及其拆方對抑郁大鼠血清ACTH、COR和海馬cAMP的影響。并與四環(huán)類抗抑郁藥馬普替林相對照，現(xiàn)報(bào)告如下。1 材料與方法1.

8、1 材料(1) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康SpragueDawley(SD)雄性大鼠84只，體重（18020）g，由南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(許可證號：SCXK(蘇)20020031)。所有大鼠均用普通飼料喂養(yǎng)兩周后開始造模。(2)實(shí)驗(yàn)藥品:柴郁溫膽湯組（柴胡、郁金、半夏、陳皮、竹茹、枳實(shí)、人參、茯苓、炙甘草）濃度為1.84g生藥量/ml?；到M（半夏、陳皮、竹茹）濃度為0.64g生藥量/ml。調(diào)氣血組（柴胡、郁金、枳實(shí)）濃度為0.6g生藥量/ml。養(yǎng)心脾組（人參、茯苓、炙甘草、大棗）濃度為0.5g生藥量/ml。以上藥物的煎制和濃縮均手工操作，所用煎藥器具為陶瓷制品以保證藥物在煎制過程中的穩(wěn)定性。濃縮

9、后的藥物中每種單味藥的濃度在整方和拆方中均相同，以保證各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可比性。鹽酸馬普替林(北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H19991047)用去離子雙蒸水配制成1mg/ml藥物混懸液。(3)主要實(shí)驗(yàn)試劑和儀器促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone ACTH)放射免疫分析試劑盒(北京北方生物技術(shù)研究所)、皮質(zhì)醇(cortisol COR)放射免疫分析試劑盒(北京華英室溫技術(shù)研究所)、環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate cAMP)放射免疫分析試劑盒(上海中醫(yī)藥大學(xué)核醫(yī)學(xué)試驗(yàn)室)。儀器：GC911放射免疫計(jì)數(shù)器(科大創(chuàng)新股份

10、有限公司中佳分公司)。 1.2 方法選取Openfield評分相近的大鼠84只，隨機(jī)分為正常組、模型組、柴郁溫膽湯組、化痰組、調(diào)氣血組、養(yǎng)心脾組、馬普替林組，每組12只。各治療組在應(yīng)激的第2天開始均按提取液(濃縮后)1ml/100g灌胃給藥；模型組和正常組給予等量生理鹽水。每天上午8時(shí)給藥1次，持續(xù)至實(shí)驗(yàn)的第23天。正常組每籠飼養(yǎng)只，正常攝水飲食，不給任何刺激。其余各組，每只均單籠飼養(yǎng)，并接受21天各種不同的應(yīng)激刺激，參照Katz方法2，每天隨機(jī)給予一種刺激。使大鼠不能預(yù)料刺激的發(fā)生，以避免產(chǎn)生適應(yīng)。Openfield法測定行為 所用自制敞箱規(guī)格為高40cm、直徑80cm的內(nèi)空圓柱桶，周壁為黑

11、色，地面用黑線劃分為面積相等的25塊。以動(dòng)物四肢完全進(jìn)入一個(gè)分區(qū)作為一個(gè)水平活動(dòng)(crossing)得分、以雙前肢完全抬離地面至放下作為一次垂直活動(dòng)(rearing)得分、以及觀察大鼠的理毛(修飾)次數(shù)和大便顆粒數(shù)。每只動(dòng)物僅進(jìn)行一次測定，每次觀察3min。在實(shí)驗(yàn)第22天所有實(shí)驗(yàn)大鼠均單籠飼養(yǎng)并禁食和禁水，只給1%蔗糖溶液150ml，計(jì)算大鼠24h飲用1%蔗糖溶液量。用10%水合氯醛(0.36ml/100g) 給大鼠腹腔注射，麻醉后開腹，腹主動(dòng)脈抽取血液5ml，待測ACTH和COR。按試劑盒方法要求分離血清，采用125I標(biāo)記放免法測定。按大鼠腦立體定向圖譜(包新民等編著，人民衛(wèi)生出版社，199

12、1年)定位，冰上分離大鼠一側(cè)海馬，裝于凍存管并立即投入液氮中，待固化后稱重，放入-86冰箱保存待測。檢測時(shí)海馬置于pH4.75的醋酸緩沖液中勻漿，加入無水乙醇沉淀蛋白，離心取上清液。采用125I標(biāo)記放免法測定cAMP含量。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(xs)表示。用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件對兩組間均數(shù)進(jìn)行兩獨(dú)立樣本檢驗(yàn)和F檢驗(yàn)。2 結(jié)果 各組大鼠行為學(xué)變化,見表1。表1 柴郁溫膽湯及其組分對大鼠行為學(xué)評分的影響(略)與正常組比較 P0.05, P0.01;與模型組比較 P0.05, P0.01各組大鼠糖水消耗量變化,見表2。表2 柴郁溫膽湯及其組分對大鼠糖水消耗量的影響(略)。與正

13、常組比較 P0.05, P0.01;與模型組比較 P0.05, P0.01各組大鼠血清ACTH和COR及海馬cAMP含量的變化,見表3。表3 柴郁溫膽湯及其組分對大鼠血清ACTH、COR和海馬cAMP含量的影響(略)與正常組比較 P0.05, P0.01;與模型組比較 P0.05, P0.013 討論 對于抑郁大鼠的行為學(xué)觀察多采用經(jīng)典的Openfield法，目前比較肯定的觀察指標(biāo)是大鼠的水平運(yùn)動(dòng)得分和垂直運(yùn)動(dòng)得分。本試驗(yàn)觀察了大鼠的修飾次數(shù)以及大便顆粒數(shù)。其中水平得分代表動(dòng)物的活動(dòng)度；垂直得分代表動(dòng)物對新鮮事物的好奇程度和對外界環(huán)境的探究興趣2。修飾次數(shù)代表了動(dòng)物對周圍環(huán)境的要求和自身的關(guān)注程度，大便顆粒數(shù)反應(yīng)了CUMS抑郁模型大鼠是否有便秘的抑郁癥常見并發(fā)癥。結(jié)果顯示復(fù)方柴郁溫膽湯能夠顯著提升抑郁模型大鼠的水平得分、垂直得分、修飾次數(shù)和大便顆粒數(shù)。相對于馬普替林，更是顯示了少或無