純化水、注射用水微生物檢驗(yàn)方法確認(rèn)

1、純化水、注射用水微生物檢驗(yàn)方法確認(rèn)純化水、注射用水微生物檢驗(yàn)方法學(xué)驗(yàn)證方案(VB文件編號(hào)：VP-JY-0026-01項(xiàng)目名稱：純化水、注射用水微生物檢驗(yàn)方法學(xué)驗(yàn)證VP-JY-0026 純化水、注射用水微生物-01檢驗(yàn)方法學(xué)驗(yàn)證方案Page 7Of 24項(xiàng)目部門(mén)職務(wù)簽名日期起草人質(zhì)量管理部化驗(yàn)員年月日審核人質(zhì)量管理部中心化驗(yàn)室主任年月日審核人質(zhì)量管理部質(zhì)量管理部經(jīng)理年月日批準(zhǔn)人驗(yàn)證領(lǐng)導(dǎo)小組質(zhì)量副總經(jīng)理年月日目錄1 引言41.1 驗(yàn)證實(shí)施進(jìn)度計(jì)劃41.2 概述42驗(yàn)證所需設(shè)備清單43驗(yàn)證人員、職責(zé)43.1 項(xiàng)目驗(yàn)證小組成員43.2 驗(yàn)證變更43.3 驗(yàn)證培訓(xùn)44驗(yàn)證目的55驗(yàn)證內(nèi)容51.1 培養(yǎng)基

2、配制51.2 菌種51.3 菌液的制備51.4 薄膜過(guò)濾法檢測(cè)微生物61.5 結(jié)果評(píng)價(jià)76 驗(yàn)證過(guò)程中的偏差及處理7 驗(yàn)證結(jié)果的評(píng)定與結(jié)論78附件8驗(yàn)證文件1引言1.1 驗(yàn)證實(shí)施進(jìn)度計(jì)劃實(shí)施時(shí)間計(jì)劃安排在年月日至年月日。1.2 概述通過(guò)驗(yàn)證以確認(rèn)R2A適用于薄膜過(guò)濾法檢驗(yàn)純化水、注射用水微生物。根據(jù)培養(yǎng)基及驗(yàn)證菌的特性制訂檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)條件，按制定的方法進(jìn)行試驗(yàn)，根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果判斷是否符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。若符合，則R2A可用于薄膜過(guò)濾法檢驗(yàn)純化水、注射用水微生物2驗(yàn)證所需設(shè)備清單2.1. XG1.D脈動(dòng)真空滅菌器2.2. MJ-250-I型霉菌培養(yǎng)箱（2025C）2.3. LPH-250生化培養(yǎng)箱（3

3、035C）2.4. WG11-230BE電熱鼓風(fēng)干燥箱2.5. 微波爐3驗(yàn)證人員、變更及培訓(xùn)3.1項(xiàng)目驗(yàn)證小組成員項(xiàng)目驗(yàn)證小組由中心化驗(yàn)室微生物檢驗(yàn)員、質(zhì)檢員、化驗(yàn)室主任、質(zhì)量管理部經(jīng)理等組成，由化驗(yàn)室主任任項(xiàng)目驗(yàn)證組組長(zhǎng)，驗(yàn)證小組成員見(jiàn)附表1,具體分工、職責(zé)如下:人員職務(wù)職責(zé)Q謔主任負(fù)責(zé)組織驗(yàn)證小組成員起草驗(yàn)證方案，組織驗(yàn)證工作的實(shí)施，并根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果起草驗(yàn)證報(bào)告QA人員負(fù)責(zé)驗(yàn)證實(shí)施過(guò)程監(jiān)督。微生物檢驗(yàn)員負(fù)責(zé)驗(yàn)證的實(shí)施，對(duì)樣品進(jìn)行檢驗(yàn)。3.2驗(yàn)證變更驗(yàn)證過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本方案規(guī)定的內(nèi)容進(jìn)行，若因特殊原因確需變更時(shí)，應(yīng)填寫(xiě)驗(yàn)證方案變更申請(qǐng)及批準(zhǔn)書(shū)（附件2）,報(bào)驗(yàn)證領(lǐng)導(dǎo)小組批準(zhǔn)后執(zhí)行。3.3驗(yàn)證培訓(xùn)

4、驗(yàn)證過(guò)程中，確認(rèn)方案以及驗(yàn)證中應(yīng)該掌握的技能應(yīng)該進(jìn)行培訓(xùn)，培訓(xùn)應(yīng)遵循員工培訓(xùn)管理規(guī)程。培訓(xùn)情況記錄于附件3。4驗(yàn)證目的與適用范圍4.1 驗(yàn)證目的根據(jù)中國(guó)藥典2015版四部1105項(xiàng)下微生物檢查法的規(guī)定，驗(yàn)證純化水、注射用水微生物檢查方法的適用性，即確認(rèn)檢品、所設(shè)定的檢驗(yàn)條件及檢驗(yàn)程序?qū)┰嚻分锌赡艽嬖诘母黝愇⑸餆o(wú)抑制作用，其方法可行有效。4.2適用范圍適用于純化水、注射用水微生物檢驗(yàn)方法學(xué)驗(yàn)證。5驗(yàn)證內(nèi)容培養(yǎng)基在使用前應(yīng)進(jìn)行適用性的檢查，合格后方可進(jìn)行，通過(guò)R2A瓊脂培養(yǎng)基.上的菌落與營(yíng)養(yǎng)瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基和TSA對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落比較，以確認(rèn)所采用方法的可行性。5.1 培養(yǎng)基的制備取適用性檢查

5、合格的R2A瓊脂培養(yǎng)基按照15.2g加入1000ml純化水的比例進(jìn)行配制，加熱使其完全溶解，分裝于的錐形瓶中，裝量不得超過(guò)容器的三分之二，蓋塞，用無(wú)菌布包扎好后進(jìn)行濕熱滅菌121C、15min,滅菌后PH值7.2±0.2。冷卻后放入28c冰箱備用。5.2 菌種銅綠假單胞菌CMCCB)10104金黃色葡萄球菌CMCCB)26003枯草芽抱桿菌CMCCB)63501白色念珠菌CMCCF)98001黑曲霉CMCCF)98003使用以上各種菌株傳代次數(shù)均不得超過(guò)5代5.3 菌液的制備：接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基上，3035c培養(yǎng)1824小

6、時(shí)；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基上，2025c培養(yǎng)23天，上述培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)10100CFU(菌落形成單位)的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，2025c培養(yǎng)57天,加入35ml含0.05%(v/v)聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將抱子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出抱子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05%(v/v)聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含抱子數(shù)純化水、注射用水微生物檢驗(yàn)方法學(xué)驗(yàn)證方案VP-JY-0026-01Page910100CFU的抱子懸液。菌懸液在室溫下放置應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用，若保

7、存在28c可在24小時(shí)內(nèi)使用。5.4 菌液的計(jì)數(shù)：(每種菌液每種培養(yǎng)基接種2個(gè)平皿)5.2.2.1 分別接種銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌至培養(yǎng)皿，每皿接種1ml菌液(10100cfu),傾注TSA對(duì)照培養(yǎng)基，凝固后于3035c倒置培養(yǎng)不超過(guò)5天。營(yíng)養(yǎng)瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基、R2A瓊脂培養(yǎng)基方法同TSA對(duì)照性關(guān)官人口斤/05.2.2.2 分別接種白色念珠菌2皿，每皿接種1ml菌液(10100cfu),傾注胰酪大豆陳瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基，凝固后于3035c倒置培養(yǎng)不超過(guò)5天。5.2.2.3 用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液將黑曲霉制成每1ml含抱子數(shù)10100cfu

8、的抱子懸液。取1ml菌液至胰酪大豆陳瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基3035c培養(yǎng)不超過(guò)5天。5.4 薄膜過(guò)濾法檢測(cè)微生物5.4.1 制備平皿取在28c冰箱中保存的培養(yǎng)基，微波爐溶化后按標(biāo)準(zhǔn)操作程序傳至微生物限度檢查室，待培養(yǎng)基冷卻至50c左右澆注平皿(每皿30±2ml,注意培養(yǎng)皿不得破裂，裝量應(yīng)相同，盡量避免形成氣泡)。5.4.2 水樣的檢測(cè)取純化水5ml加入滅菌純化水50ml薄膜過(guò)濾，按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行水樣微生物的檢測(cè)后，取膜置于R2A瓊脂培養(yǎng)基，在3035。叵溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)5天。取注射用水100ml薄膜過(guò)濾，按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行水樣微生物的檢測(cè)后，取膜置于R2A®脂培養(yǎng)基，在303

9、5。叵溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)5天。5.4.3對(duì)照樣品另取含菌數(shù)10100CFUI勺銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌、白色念珠菌、黑曲霉1ml加入濾杯內(nèi)，分別取純化水、注射用水同上操作過(guò)膜后，取膜置于R2A瓊脂培養(yǎng)基，在3035。叵溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)5天。TSA寸照培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)瓊脂又1照培養(yǎng)基上方法同R2A瓊脂培養(yǎng)基。5.4.4 陰性對(duì)照Of24另取滅菌純化水50ml薄膜過(guò)濾后置于R2A瓊脂培養(yǎng)基、TSA對(duì)照培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基上，作為陰性對(duì)照。在3035。叵溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)5天。5.4.5 空白對(duì)照另取滅菌的濾膜置于R2A瓊脂培養(yǎng)基、TSA對(duì)照培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基.上，作為空白對(duì)

10、照。在3035。叵溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)5天。5.5 結(jié)果評(píng)價(jià)逐日觀察培養(yǎng)皿微生物生長(zhǎng)情況，被檢培養(yǎng)皿與營(yíng)養(yǎng)瓊脂和TSA對(duì)照培養(yǎng)皿比較菌落形態(tài)大小應(yīng)一致，菌落平均數(shù)的比值在0.5-2(50%-200%)范圍內(nèi)，則可確定R2A瓊脂培養(yǎng)基適用于薄膜過(guò)濾法進(jìn)行制藥用水微生物檢測(cè)。6驗(yàn)證過(guò)程中的偏差及處理在執(zhí)行驗(yàn)證過(guò)程中，檢測(cè)人員需要及時(shí)記錄出現(xiàn)的任何偏差，并按照偏差處理管理規(guī)程進(jìn)行處理。7驗(yàn)證結(jié)果的評(píng)定與結(jié)論驗(yàn)證各項(xiàng)驗(yàn)證工作結(jié)束后，驗(yàn)證項(xiàng)目小組負(fù)責(zé)收集、匯總各項(xiàng)驗(yàn)證、試驗(yàn)結(jié)果記錄，依據(jù)各項(xiàng)驗(yàn)證結(jié)果起草驗(yàn)證報(bào)告，對(duì)驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行評(píng)定與結(jié)論，報(bào)驗(yàn)證領(lǐng)導(dǎo)小組。評(píng)定與結(jié)論至少包括以下內(nèi)容：1) 驗(yàn)證項(xiàng)目是否有遺漏？

11、2) 驗(yàn)證實(shí)施過(guò)程中對(duì)驗(yàn)證方案有無(wú)修改？修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)？3) 驗(yàn)證記錄是否完整？4) 驗(yàn)證結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求？5) 如有異常情況、偏差處理是否合理？是否需要進(jìn)一步補(bǔ)充驗(yàn)證？6) 驗(yàn)證項(xiàng)目是否通過(guò)驗(yàn)證，可否投入使用？7) 日常監(jiān)測(cè)(使用)的建議。8) 再驗(yàn)證周期。驗(yàn)證文件純化水、注射用水微生物檢驗(yàn)方法學(xué)驗(yàn)證方案VP-JY-0026-01Page 13Of 248附件附件1驗(yàn)證小組成員名單驗(yàn)證方案名稱驗(yàn)證方案編號(hào)姓名所在部門(mén)崗位及驗(yàn)證中負(fù)責(zé)工作附件2驗(yàn)證方案修改申請(qǐng)及批準(zhǔn)書(shū)驗(yàn)證方案名稱驗(yàn)證方案編號(hào)修改內(nèi)容修改原因及依據(jù)修改后方案審批起草人：日期：項(xiàng)目驗(yàn)證組組長(zhǎng)：日期：驗(yàn)證領(lǐng)導(dǎo)小組

12、組長(zhǎng)：日期：附件3驗(yàn)證培訓(xùn)記錄（一）培訓(xùn)時(shí)間培訓(xùn)對(duì)象培訓(xùn)講師培訓(xùn)內(nèi)容：被培訓(xùn)人員簽名序號(hào)姓名考核結(jié)果考核人合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格驗(yàn)證文件VP-JY-0026 純化水、注射用水微生物Page 17Of 24-01檢驗(yàn)方法學(xué)驗(yàn)證方案合格口不合格合格口不合格合格口不合格附件4驗(yàn)證所需文件序號(hào)文件名稱編號(hào)存放地點(diǎn)附件5純化水菌落回收率記錄'培R2AR2A營(yíng)營(yíng)養(yǎng)TSATSAR2營(yíng)TS回收養(yǎng)基瓊瓊養(yǎng)瓊脂對(duì)對(duì)A養(yǎng)A率脂脂瓊對(duì)照昭八、昭八、瓊瓊對(duì)與與培培脂培培脂脂昭八、TS營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)對(duì)基養(yǎng)培培對(duì)培A養(yǎng)菌種基基昭八、(1m基養(yǎng)養(yǎng)昭八、

13、養(yǎng)對(duì)瓊(5(1培l(xiāng)菌(5(1基培基照月旨mlml養(yǎng)液mlml(養(yǎng)(培對(duì)供菌基+50m供菌陰基陰養(yǎng)昭八、試液(5l滅試液性(性基培品+50ml菌水品+50對(duì)陰對(duì)比養(yǎng)+50ml供薄膜+50ml昭八、性昭八、較基ml滅試過(guò)ml滅)對(duì))比滅菌品濾）滅菌昭八、較菌水+50菌水)水薄ml水薄薄膜滅薄膜膜過(guò)菌膜過(guò)過(guò)濾）水過(guò)濾）濾）薄濾）膜過(guò)濾）枯草芽抱桿菌銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌白色念珠菌黑曲霉菌與對(duì)照培養(yǎng)基比較，菌落大小、形態(tài)是否一致標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定與對(duì)照培養(yǎng)基比較，菌數(shù)比值應(yīng)在0.5-2(50%-200%)范圍內(nèi)。結(jié)果確認(rèn)：驗(yàn)證文件VP-JY-0026 純化水、注射用水微生物Page 19Of 24-01檢驗(yàn)

14、方法學(xué)驗(yàn)證方案檢驗(yàn)人/日期：復(fù)核人/日期：附件6注射用水菌落回收率記錄培二<R2AR2A營(yíng)營(yíng)養(yǎng)TSATSAR2營(yíng)TS回收瓊養(yǎng)瓊脂對(duì)對(duì)A養(yǎng)A率J1脂瓊對(duì)照昭八、昭八、瓊瓊對(duì)與與培培脂培培脂脂昭八、TS營(yíng)菌養(yǎng)養(yǎng)對(duì)基養(yǎng)培培對(duì)培A養(yǎng)種基基昭八、(1m基養(yǎng)養(yǎng)昭八、養(yǎng)對(duì)瓊(1(1培l(xiāng)菌(1(1基培基昭八、脂00mml養(yǎng)液00mml(養(yǎng)(培對(duì)l菌基+100l菌空基空養(yǎng)昭八、供+10(1ml供供液白(白基培試品薄膜過(guò)凝0ml供試品薄膜過(guò)濾）00ml供試品薄膜過(guò)濾）試品薄膜過(guò)濾）試品薄膜過(guò)凝+100ml供試品薄膜過(guò)濾）對(duì)昭八、）空白對(duì)昭八、）對(duì)昭八、）比較養(yǎng)基比較枯草芽抱桿菌銅綠假單驗(yàn)證文件純化水、注射用水微生物檢驗(yàn)方法學(xué)驗(yàn)證方案VP-JY-0026-01Page 22Of 24胞菌金黃色葡萄球菌白色念珠菌里八、曲霉菌與對(duì)照培養(yǎng)基比較，菌落大小、形態(tài)是否一致標(biāo)準(zhǔn)規(guī)與對(duì)照培養(yǎng)基比較，菌數(shù)比值應(yīng)在0.5-2(50%-200%)范圍內(nèi)。結(jié)果確認(rèn)檢驗(yàn)人/日期：復(fù)核人/日期：附件7驗(yàn)證過(guò)程的偏差及處理驗(yàn)證方案名稱/編號(hào)偏差描述處理方式偏差報(bào)告人報(bào)告人：日期：評(píng)價(jià)驗(yàn)證項(xiàng)目組長(zhǎng)：日期：驗(yàn)證文件VP-JY-0026 純化水、注射用水微生物Page 24Of 24-01檢驗(yàn)方法學(xué)驗(yàn)證方案批準(zhǔn)