食品中著色劑的測(cè)定

1、食品中著色劑的測(cè)定一、目的與要求：- * K9 C2 : 2 FS1、明確測(cè)定各類色素的原理與方法。- gg. ! L( 9 Q6 e: F. f5 j7 2、通過(guò)此實(shí)驗(yàn)掌握紙層析定性法與提純色素的定量法。5 I2 + vX6 g* | 二、原理：8 . W: y2 p5 - N+ v2 f 聚酰胺是具有二極性的化合物，水溶性酸性染料在酸性條件下被聚酰胺吸附，而在堿性條件下解吸附，再用紙色譜法或薄層色譜法進(jìn)行分離后與標(biāo)準(zhǔn)比較定性、定量。9 k) V! R9 N/ S9 v2 a% J 三、試劑：8 y+ c( u6 p 1、聚酰胺粉(尼龍6)3 I+ 7 c. d$ q9 o2、硫酸1：1 0

2、$ w. P* g1 4 1 R& O3 A3、甲醇甲酸溶液：6：42 t5 r( A4 / G# j( A: s# 4、甲醇% v4 F! |3 a1 X+ N) $ ?8 U5、20檸檬酸溶液) m- v5 j, K: F5 U6、10鎢酸鈉溶液6 s; n; R! S7 _ 7、石油醚：沸程60-90% y6 L w# r0 J p9 q$ X 8、海砂：先用l：10鹽酸煮沸15min，用水洗中性，再用5氫氧化鈉溶液煮沸15min，再于105干燥，貯于具玻璃塞的瓶中，備用。( m# C) r$ x) o; Q 9、乙醇-氨溶液：取1毫升氨水，加70乙醇至100毫升。7 K C5 A- e

3、/ D10、50 乙醇溶液) x& K/ u1 u- g% ) u) Q; x11、硅膠G。9 V+ m* on6 H6 J8 g12、PH6的水：用20檸檬酸調(diào)節(jié)至PH 6。! 4 P/ u- A% N4 _( - | M4 |3 N: m13、鹽酸: 1：108 R. d; O0 H G: 14、5氫氧鈉溶液9 i& X2 GY) I1 15、碎瓷片：處理方法同海砂8 |( |- | C( q9 ( 16、展開(kāi)劑 B$ A/ a3 L9 K6 l5 c7 O H% g Y* a、正丁醇-無(wú)水乙醇-1氨水(6：2：3)：供紙色譜用。# V, e/ |) g( d) D! b、正丁醇-吡啶-1

4、氨水(6：3：4)：供紙色譜用。- M0 m6 9 S8 v c、甲乙酮-丙酮-水(7：3：3)：供紙色譜用。 ?d: W, I2 ; k2 O d、甲醇-乙二胺-氨水(10：3：2)：供薄層色譜用。, D& + w& m9 N# L, u: E e、甲醇-氨水-乙醇(5：1：10)：供薄層色譜用。9 F5 x T+ m! L9 k! k Z w6 h f、2.5檸檬酸鈉-氨水-乙醇(8：1：2)供薄層色譜用。$ l/ Z1 8 E1 V 17、色素標(biāo)準(zhǔn)溶液以下商品作為標(biāo)準(zhǔn)以100計(jì)。- B+ V: t0 x% o1 r) S 胭脂紅：純度60；莧菜紅：純度60；檸檬黃：純度60%；靛藍(lán)：純度

5、40；日落黃：純度60，亮藍(lán)；純度60。8 , D2 w! C( v+ x4 l1 M; _) 精密稱取上述色素各0.100克，用PH6的水溶解，移入100毫升容量瓶中并稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于1毫克商品色素。靛藍(lán)溶液需在暗處保存。: U2 Q9 n1 j; g 18、色素標(biāo)準(zhǔn)使用液：用時(shí)吸取色素標(biāo)準(zhǔn)溶液各5.0毫升，分別置于50毫升容量瓶中，加PH6的水稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于0.1毫克商品色素。1 * j, K: E, T四、儀器：) R* B4 q8 D: I: S+ h1、分光光度計(jì), z7 ; W# k! m, |. N! 2、微量注射器或色素吸管# I ?; C: w

6、z1 N% T7 v0 e* s3、展開(kāi)槽，25 X 6 x 4cm# & Q! k2 E$ U+ I1 O+ m; i4、層析缸R(shí)( ( C$ m4 b; Z. # y: P% 5、濾紙、中速濾紙，紙色譜用9 f/ _2 i7 K h6 l3 ?6、薄層板：5 X 20em8 y4 + q$ i/ 7、電吹風(fēng)機(jī)) V. r) t2 n. 4 Q V! b, p9 f; T- I 8、水泵5 b2 ( P( j( B 五、操作方法： # I# u9 o1 N! / c 1、樣品處理0 m3 Z2 T3 y7 I( r5 e3 p( A、果味水、果子露、汽水：吸取50.0毫升樣品于100毫升燒杯

7、中，汽水需加熱驅(qū)除二氧化碳。- _! z, u3 y# J# v B、配制酒：吸取100.0毫升樣品于燒杯中，加碎瓷片數(shù)塊，加熱驅(qū)除乙醇。: r+ Z$ t+ h2 L * _0 t% P% q. g. D# + B D、含蛋奶的樣品Y4 J$ h9 D: E- G7 z0 q# O (1)奶糖：稱取10.0克粉碎均勻的樣品，加30毫升乙醇-氨溶液溶解，置水浴上濃縮至約20毫升，立即用1：10硫酸調(diào)溶液至微酸隆再加1.0毫升1：l0硫酸，加1毫升l0鎢酸鈉溶液，使蛋白質(zhì)沉淀，過(guò)濾，用少量水洗滌，收集濾液。; P: X% v5 N1 0 k2 Z3 D (2)蛋糕類：稱取10.0克粉碎均勻的樣品

8、，加海砂少許，混勻、用熱風(fēng)風(fēng)干樣品(用手摸已干燥即可以)，加入30毫升石油醚攪拌，放置片刻，傾出石油醚，如此重復(fù)處理三次，以除去脂肪吹干后研細(xì)，全部轉(zhuǎn)人G3垂融漏斗或普通漏斗中，用乙醇氨溶液提取色素，直至色素全部提完以下按(1)自“置水浴下濃縮至約20毫升”起依法操作。- A0 t! . b* f v 2、吸附分離, ekf5 b2 l+ t& c4 g0 0 c/ E9 H 將處理后所得的溶液加熱至70，加入0.5-1.0克聚酰胺粉充分?jǐn)嚢?，?0檸檬酸溶液調(diào)PH至4，使色素完全被吸附，若溶液還有顏色，可以再加一些聚酰胺粉。將吸附色素的聚酰胺全部轉(zhuǎn)入G3垂融漏斗或玻璃漏斗中過(guò)濾(如用G3垂融

9、漏斗過(guò)濾，可以用水泵慢慢地抽濾)。用20檸檬酸酸化PH4的70水反復(fù)洗滌，每次20毫升，邊洗邊攪拌，若含有天然色素再用甲醇-甲酸溶液洗滌1-3次，每次20毫升，至洗液無(wú)色為止。再用70水多次洗滌至流出的溶液為中性。洗滌過(guò)程中必須充分?jǐn)嚢琛Ｈ缓笥靡掖?氨溶液分次解吸全部色素，收集全部解吸液，于水浴上驅(qū)氨。如果為單色，則用水準(zhǔn)確稀釋至50毫升，用分光光度法進(jìn)行測(cè)定。如果為多種色素混合液，則進(jìn)行紙色譜或薄層色譜法分離后測(cè)定，即將上述溶液置水浴上濃縮至約2毫升后移人5毫升容量瓶中，用50乙醇洗滌容器，洗液并入容量瓶中并稀釋至刻度。: X0 z6 I- M, v$ _2 Z6 8 t 3、定性: Z2

10、F) g; z+ r: a% t A、紙色譜4 # 5 J: d% l* _0 u 取色譜用紙，在距底邊2cm的起始線上分別點(diǎn)3-10微升樣品溶液，1-2微升色素標(biāo)準(zhǔn)溶液，掛于分別盛有a、b、c、d、e、f的展開(kāi)劑的層析缸中，用上行法展開(kāi)，待溶劑前沿展至15cm處，將濾紙取出于空氣中晾干，與標(biāo)準(zhǔn)斑比較定性。2 h( T* C/ t) A, V ? 也可取0.5毫升樣液，在起始線上從左到右點(diǎn)成條狀，紙的右邊點(diǎn)色素標(biāo)準(zhǔn)溶液，依法展開(kāi)，晾干后先定性后定量，靛藍(lán)在堿性條件下易褪色可用e展開(kāi)劑。8 a/ SD s8 c B、薄層色譜/ F1 Z3 Ie- z3 K: D (1)薄層板的制備$ X: L7

11、 j& F8 F8 _, D5 9 3 U3 U6 F( h 稱取1.6克聚胺粉，0.4克可溶性淀粉及2克硅膠G，置于合適的研缽中，加15毫升水研勻后，立即置涂布器中鋪成厚度為0.3mm的板。在室溫晾干后，于80干燥1小時(shí)置于燥器中備用。 k+ M) Z( Z# U( A6 M8 F: (2)點(diǎn)樣/ c Y/ U/ J. u) l6 V8 L% F 離板底邊2cm處將0.5毫升樣液從左到右點(diǎn)成與底邊平行的條狀的右邊點(diǎn)2微升色素標(biāo)準(zhǔn)溶液。2 o9 G x7 R# S+ I (3)展開(kāi)D. X; & L! E7 % H$ X 莧菜紅與胭脂紅用d展開(kāi)劑，靛藍(lán)與亮藍(lán)用e展開(kāi)劑，檸檬黃與其他色素用f展開(kāi)

12、劑。取適量展開(kāi)劑倒入展開(kāi)槽中，將薄層板放入展開(kāi)，待色素明顯分開(kāi)后取出，晾干，與標(biāo)準(zhǔn)斑比較，如比移值相同即為同一色素。! |8 E8 _0 a5 H H7 g 4、定量2 K( T5 x9 P7 q; k, A樣品測(cè)定 8 f B+ C; k/ c, W將紙色譜的條狀色斑剪下，用少量熱水洗滌數(shù)次，洗液移入10毫升比色管中，并加水稀釋至刻度，作比色法定用。 e3 E6 C X6 D& 將薄層色譜的條狀色斑包括有擴(kuò)散的部分，分別用刮刀刮下，移入漏斗中，用乙醇-氨溶液解吸色素，少量反復(fù)多次至解吸液無(wú)色，收集解吸液于蒸發(fā)皿中，于水浴上揮發(fā)除去氨，移入10毫升比色管中，加水至刻度作比色用。$ l& m1

13、1 z% SB、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備2 G# Z4 s) $ s( f分別吸取0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml胭脂紅，檸檬黃，日落黃色素標(biāo)準(zhǔn)使用液或0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml亮藍(lán)，靛藍(lán)色素標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別置于10ml比色管中，各加水稀釋至刻度。5 b: x9 C1 l) : v. X7 n上述樣品與標(biāo)準(zhǔn)管分別用1cm比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于一定波長(zhǎng)下（胭脂紅510nm，莧菜紅520nm，檸檬黃430nm，日落黃482nm，亮藍(lán)627nm），測(cè)定吸光度，分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較或與標(biāo)準(zhǔn)色列目測(cè)比較。; f. q- w( ? r( O& q. F+ X& J/ Q計(jì)算：9 o% L0 l6 u+ 4 2 h5 GX=(A*100)/(m*V2/V1*1000)