便潛血(FOB)定性檢測試劑注冊申報資料指導原則

1、附件17便潛血（FOB）定性檢測試劑注冊申報資料指導原則本指導原則旨在指導和規(guī)范便潛血（FOB）檢測試劑的技術審評工作，幫助審評人員理解和掌握該類產(chǎn)品原理、組成、性能、預期用途等內(nèi)容，把握技術審評工作基本要求和尺度，對產(chǎn)品安全性、有效性作出系統(tǒng)評價。本指導原則所確定的核心內(nèi)容是在目前的科技認識水平和現(xiàn)有產(chǎn)品技術基礎上形成的，因此，審評人員應注意其適宜性，密切關注適用標準及相關技術的最新進展，考慮產(chǎn)品的更新和變化。本指導原則不作為法規(guī)強制執(zhí)行，不包括行政審批要求。但是，審評人員需密切關注相關法規(guī)的變化，以確認申報產(chǎn)品是否符合法規(guī)要求。一、適用范圍本指導原則適用于利用免疫層析法或化學法對人大便樣本

2、中的血紅蛋白進行體外定性檢測的試劑。本指導原則適用于進行首次注冊申報和相關許可事項變更的產(chǎn)品。二、注冊申報資料要求（一）綜述資料便潛血（FOB）（亦稱便隱血）是指消化道少量出血，紅細胞被消化破壞，糞便外觀無異常改變，肉眼和顯微鏡下均不能證實的出血。在臨床消化道惡性腫瘤早期20%的患者可出現(xiàn)潛血試驗陽性,晚期病人的潛血陽性率可達到90%以上,并且可呈持續(xù)性陽性；消化道出血,消化道潰瘍病人糞便潛血（FOB）試驗多呈間斷性陽性；痢疾,直腸息肉、痔瘡出血等也可使糞便中出現(xiàn)較多紅細胞,導致潛血試驗陽性。因此，糞便潛血（FOB）檢查可作為檢測各種原因所致的消化道出血及消化道惡性腫瘤早期篩查的重要檢測試驗，

3、是發(fā)現(xiàn)便潛血的有效方法，目前臨床檢查便潛血（FOB）主要有膠體金法和化學法。膠體金法或彩色乳膠法以膠體金或彩色乳膠作為指示標記，應用“雙抗體夾心法”免疫技術原理快速檢測糞便的人血紅蛋白?；瘜W法根據(jù)亞鐵血紅蛋白具有過氧化物酶的作用，可催化過氧化氫生成新生態(tài)氧，氧化聯(lián)苯胺等底物產(chǎn)生有色化合物的原理設計，檢測形式有化學法和干化學法，其應用的底物主要有鄰聯(lián)苯胺、還原酚酞、聯(lián)苯胺、匹拉米洞、無色孔雀綠及愈創(chuàng)木酯等，由于聯(lián)苯胺對人體有致癌性，現(xiàn)在已很少使用，目前主要使用的是匹拉米酮。另外，外源性食物中動物血紅蛋白、肌紅蛋白，可引起假陽性；大量生食蔬菜中含有活性的植物過氧化物酶也可催化H2O2分解產(chǎn)生新生態(tài)

4、氧導致假陽性；維生素C、鐵劑及其他還原物可中和氧化物，不能產(chǎn)生新生態(tài)氧，可引起假陰性。因此，化學法的特異性差，在試劑特異性確定過程中要依據(jù)食物源性，盡可能地明確可能引起假陽性及假陰性的干擾因素。綜述資料主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、有關生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。應符合體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）（以下簡稱辦法）和體外診斷試劑注冊申報資料基本要求（國食藥監(jiān)械2007609號）的相關要求。（二）產(chǎn)品說明書說明書承載了產(chǎn)品預期用途、標本采集及處理、實驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)

5、學解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應符合體外診斷試劑說明書編寫指導原則（國食藥監(jiān)械2007240號）的要求，如果是進口產(chǎn)品其說明書應盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準確且符合中文表達習慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標注，并單獨注明文獻的相關信息。結(jié)合體外診斷試劑說明書編寫指導原則的要求，下面對便潛血（FOB）定性檢測試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明，以指導注冊申報人員更合理地完成說明書編制。1. 【預期用途】 應至少包括以下幾部分內(nèi)

6、容：1.1 試劑盒用于運用免疫膠體金層析技術或化學方法實現(xiàn)對糞便中血紅蛋白的體外定性檢測，以判斷消化道是否有出血。1.2 與預期用途相關的臨床適應證背景情況，相關的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。2. 【主要組成成分】 2.1 說明試劑包含組成、數(shù)量等信息。2.2明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。3. 【儲存條件及有效期】對試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性等信息作詳細介紹，并對開封后未使用產(chǎn)品允許暴露于空氣中的溫度、濕度及期限等條件予以明確。4. 【樣本要求】 重點明確以下內(nèi)容：4.1 樣本是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。明確樣本收集前應注意的有關事項。4.2 建議采用新鮮糞

7、便。4.3 如不能采用新鮮樣本應注明樣本保存條件及期限。5. 【檢驗方法】 詳細說明試驗操作的各個步驟5.1 實驗環(huán)境：溫、濕度條件要求。5.2 試劑使用方法、注意事項，試劑條（卡）開封后注意事項等。5.3 明確樣本加樣時間及觀察時間。6. 【檢驗結(jié)果的解釋】可結(jié)合圖示方法說明陰性、陽性及無效結(jié)果的判讀示例。7. 【檢驗方法局限性】至少應包括以下內(nèi)容7.1 本試劑的檢測結(jié)果僅供參考，不得作為臨床診治的唯一依據(jù)，對患者的臨床管理應結(jié)合其癥狀、體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。7.2 受檢測試劑方法學的限制，實驗人員應對陰性結(jié)果給予更多的關注，需結(jié)合其他檢測結(jié)果綜合判斷，建議對有

8、疑問的陰性結(jié)果可采用其他方法進行復核。7.3 有關假陰性結(jié)果的可能性分析8. 【產(chǎn)品性能指標】 詳述以下性能指標：8.1 對參考品檢測的符合情況。8.2 最低檢測限（分析靈敏度）：說明試劑的最低檢出濃度并簡單介紹最低檢測限的確定方法。8.3 重復性：對同一批次的檢測試劑進行重復檢測的檢測結(jié)果。8.4 批間差：對三個批次的檢測試劑進行重復檢測的檢測結(jié)果。 8.5 分析特異性8.5.1 交叉反應：易產(chǎn)生交叉反應物質(zhì)的情況。8.5.2 干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如動物血紅蛋白、肌紅蛋白、維生素、含過氧化物酶的綠葉蔬菜、鐵劑、某些中藥成分。8.6 鉤狀（HOOK）效應：出現(xiàn)鉤狀效應

9、時的抗原最低濃度或經(jīng)驗證的未出現(xiàn)鉤狀效應的最高濃度值。9. 【注意事項】應至少包括以下內(nèi)容：9.1 樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響。9.2 如使用冰箱中冷藏保存的檢測試劑，建議檢測前應從冰箱內(nèi)取出，放置到室溫再打開使用，否則會影響檢測結(jié)果。9.3 有關實驗操作、樣本保存及處理等其他注意事項。（三）擬定產(chǎn)品標準及編制說明擬定產(chǎn)品標準應符合辦法、國食藥監(jiān)械2007609號文件的相關規(guī)定。并將擬申報產(chǎn)品的主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定等內(nèi)容作為附錄附于標準正文后，并在正文的“產(chǎn)品分類”項中引出該附錄內(nèi)容。便潛血（FOB）定性檢測試紙的注冊檢測應主要包括以下性能指標：外觀、寬度、移行速度、最低檢

10、測限（分析靈敏度）、特異性、重復性、批間差、穩(wěn)定性等。（四）注冊檢測首次申請注冊應該在國家食品藥品監(jiān)督管理部門認可的、具有相應承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構進行注冊檢測。并在注冊檢測時應采用相應的參考品進行。（五）主要原材料研究資料1. 試劑所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細試驗資料。如抗體為申請人自制，則應詳述抗體的名稱及生物學來源，申請人對該抗體技術指標的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價等），確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)；如抗體為申請人外購，則應詳述抗體的名稱及生物學來源，外購方名稱，提交外購方出具的抗體性能指標及檢驗證書，詳述申請人對該抗體技術指標的要求以及申請人確定該抗體作為主要

11、原材料的依據(jù)。2. 其他主要原輔料的選擇及驗證資料，如硝酸纖維素膜、膠體金、反應緩沖液等，申請人應詳述每一原輔料技術指標的要求以及確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)。若為外購，應詳述每一原輔料的外購方名稱并提交外購方出具的每一原輔料性能指標及檢驗證書。3. 企業(yè)內(nèi)部參考品的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料。（六）主要生產(chǎn)工藝及反應體系的研究資料1. 主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。2. 產(chǎn)品基本反應原理介紹。3. 抗體包被工藝研究，申請人應考慮如包被液量、濃度、時間等指標對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述指標的最佳組合。4. 實驗體系反應條件確定：申請人

12、應考慮反應時間、反應溫度、膜孔徑大小（或移行速度）等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。5. 體系中反應時間的確定：申請人應考慮樣本加樣后觀察時間對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，通過實驗確定最佳的觀察時間。（七）分析性能評估資料企業(yè)應提交原廠在產(chǎn)品研制階段對試劑進行的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、內(nèi)控標準、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細資料。對于便潛血（FOB）定性檢測試劑，建議著重對以下分析性能進行研究。1. 最低檢測限（分析靈敏度）1.1 最低檢測限的確定用參考品進行檢測，免疫法應不高于0.2g/ml；化學法應不高于20g/ml。2. 分析特異性潛在的干擾物質(zhì)主要包括：動物血

13、紅蛋白、肌紅蛋白、維生素、含過氧化物酶的綠葉蔬菜、鐵劑、某些中藥成分。3. 陽性和陰性參考品企業(yè)應設置合理的內(nèi)部陽性/陰性參考品。4. 鉤狀（HOOK）效應目前，便潛血（FOB）定性檢測試劑大多采用夾心法的原理檢測樣本，考慮到方法學的缺陷，有必要對鉤狀（HOOK）效應進行考慮。建議采用高濃度的參考品進行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開始檢測，每個梯度稀釋液重復35份，將顯色深度隨濃度升高反而變淺時的濃度作為出現(xiàn)鉤狀效應時的最低濃度，建議產(chǎn)品說明書上明示包被的抗體濃度和出現(xiàn)鉤狀效應時血紅蛋白的最低濃度，最低濃度應不低于2000g/ml。5. 重復性檢測重復性指標時建議采用檢測限附近的樣品進行多次檢測

14、，然后計算同一份樣品多次檢測的結(jié)果或其精確性。在分析試劑重復性時，不應使用強陽性樣品或明顯陰性的樣品，否則無法客觀地評價其檢測效果。6. 批間差取三個批號的檢測試劑，每個批號抽取相同數(shù)量，按照說明書步驟操作，對重復性進行檢測，三個批號測試條的結(jié)果應一致，顯色度均一。（八）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。申報試劑的穩(wěn)定性主要包括實時穩(wěn)定性、高溫加速破壞穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性及開瓶穩(wěn)定性（如涉及）等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案，穩(wěn)定性研究資料應包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究

15、，應提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。適用樣本的穩(wěn)定性主要包括樣本正常儲存條件下的研究資料。（九）臨床試驗資料1. 研究方法一般選擇與已上市的同類產(chǎn)品進行臨床對比研究。對比產(chǎn)品應選擇境內(nèi)已批準上市、臨床普遍認為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。研究對象應包括兩組，一組是用對比試劑確定為陽性的異常組，另一組是用對比試劑確定為陰性的對照組。2. 臨床研究單位的選擇2.1 第二類產(chǎn)品申請人應當選定不少于2家（含2家）省級衛(wèi)生醫(yī)療機構開展臨床試驗。2.2 臨床機構的檢驗實驗室（簡稱實驗室）應符合醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法要求；應優(yōu)先考慮經(jīng)CNAS

16、-CL02醫(yī)學實驗室能力認可準則(ISO 15189:2007)認可或GB17025標準認可的實驗室。實驗室的該項目檢測人員應具有相應資質(zhì)（項目負責人至少具有中級以上技術職稱），對選擇對照系統(tǒng)的項目檢測具有一定經(jīng)驗。2.3 不同的臨床單位應使用同一批試劑進行臨床試驗，以便對數(shù)據(jù)進行科學客觀的統(tǒng)計分析。2.4 在整個實驗中，考核試劑、對比試劑、確認試驗方法都應處于有效的質(zhì)量控制下，以最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。2.5 臨床單位應有能力提供臨床評價所需的各類樣本。3. 臨床試驗方案臨床試驗實施前，研究人員應從統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。臨床研究方

17、案應符合倫理學的相關要求。試驗方案中應確定嚴格的病例納入和排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的參比試劑應完全一致，以便進行合理的統(tǒng)計學分析。另外，考核試劑的樣本類型不應超越參比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了參比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應采用其他方式進行驗證。各臨床研究機構的方案設置應一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床研究機構的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨

18、意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。4. 病例選擇及樣本類型4.1 臨床試驗樣本量的確定：注冊申請人或臨床研究者應根據(jù)產(chǎn)品臨床使用目的，與該產(chǎn)品相關疾病的臨床發(fā)生率確定臨床研究的樣本量。在符合指導原則有關最低樣本量要求的前提下，還應符合統(tǒng)計學要求。4.1.1 臨床研究的總樣本數(shù)至少為200例。4.1.2 應考慮樣本量的分布。樣本量的選擇應符合統(tǒng)計學及相關指導原則的要求。4.1.3 陽性樣本不少于總樣本的50%。包含陽性、陰性樣本，樣本數(shù)目應盡可能原分布，盡可能收集或獲取弱陽性樣本。4.2 應明確臨床樣本的采集要求。4.2.1 盡可能采用新鮮樣品，避免貯存。4.2.2 對檢測結(jié)果有明顯干擾作用的

19、樣本,如動物血紅蛋白、肌紅蛋白、維生素、含過氧化物酶的綠葉蔬菜、鐵劑、某些中藥成分樣本盡量避免使用。4.3 試驗方案中應確定嚴格的病例或樣本納入和排除標準。任何已經(jīng)入選的病例或樣本再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。4.4 統(tǒng)計學分析應分析考核試劑的敏感性、特異性、陽性預期值、陰性預期值、陽性符合率、陰性符合率、總體符合率、考核試劑和對比試劑的一致性（如kappa值）。4.5 結(jié)果差異樣本的驗證在數(shù)據(jù)收集過程中，對兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本，應采用“金標準”方法或臨床上普遍認為質(zhì)量較好的第三種同類試劑進行復核，同時結(jié)合患者的臨床病情對差異原因及可能結(jié)果進行分析。4.6 臨床試驗總結(jié)

20、報告撰寫根據(jù)體外診斷試劑臨床研究技術指導原則的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述。4.6.1 臨床試驗總體設計及方案描述4.6.1.1 臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。4.6.1.2 病例納入和排除標準、不同年齡段人群的預期選擇例數(shù)及標準。4.6.1.3 樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。4.6.1.4 統(tǒng)計學方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標準。4.6.2 具體的臨床試驗

21、情況4.6.2.1 申報試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期等信息。4.6.2.2 對各研究單位的病例數(shù)、年齡分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。4.6.2.3 質(zhì)量控制，試驗人員培訓、質(zhì)控品檢測情況，對檢測質(zhì)控品測量值的抽查結(jié)果評估。4.6.2.4 具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗等。4.6.3 統(tǒng)計學分析4.6.3.1 數(shù)據(jù)預處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。4.6.3.2 定性結(jié)果的一致性分析陽性符合率、陰性符合率、總體符合率，以交叉表的形式總結(jié)兩

22、種試劑的定性檢測結(jié)果，對定性結(jié)果進行四格表卡方或kappa檢驗以驗證兩種試劑定性結(jié)果的一致性。4.6.4 討論和結(jié)論對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。四、名詞解釋1.分析特異性（Analytical Specificity）：測量程序只測量被測量物的能力。分析特異性用于描述檢測程序在樣本中有其他物質(zhì)存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學相關濃度值水平的分析干擾程度。 注：潛在干擾物包括干擾物和交叉反應物。 2.精密度（Precision）：在規(guī)定條件下，相互獨立的測試結(jié)

23、果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計學方法得到的測量不精密度的數(shù)字形式表示，如標準差（SD）和變異系數(shù)（CV）。五、參考文獻1.體外診斷試劑注冊管理辦法（試行），（國食藥監(jiān)械2007229號），2007年4月19日2.體外診斷試劑臨床研究技術指導原則，（國食藥監(jiān)械2007240號），2007年4月28日3.體外診斷試劑說明書編寫指導原則，（國食藥監(jiān)械2007240號），2007年4月28日4.YY/T 1164-2009, 人絨毛膜促性腺激素（HCG）檢測試紙（膠體金免疫層析法）s. 北京:中國標準出版社，20115.彭文偉. 傳染病學M. 北京:人民衛(wèi)生出版社，20016.劉艷芳,張勇建,

24、蘇明. 臨床病毒學檢驗M. 北京:軍事醫(yī)學科學出版社，20097.陳敬賢. 診斷病毒學M. 北京:人民衛(wèi)生出版社，20088.馮仁豐. 臨床檢驗質(zhì)量管理技術基礎M. 上海:上?？茖W技術文獻出版社，20079.中國生物制品規(guī)程M. 北京:化學工業(yè)出版社，200010.Establishing the Performance Characteristics of In Vitro Diagnostic Devices for the Detection or Detection and Differentiation of Influenza Viruses, CDRH, FDA, USA, Fe

25、bruary 15, 200811.In Vitro Diagnostic Devices to Detect Influenza A Viruses: Labeling and Regulatory Path, CDRH FDA, USA May 1, 200712.中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國臨床檢驗操作規(guī)程（第3版）.南京：東南大學出版社，2006 便潛血（FOB）定性檢測試劑注冊申報資料指導原則編制說明一、指導原則編寫的原則（一）本指導原則編寫的目的是用于指導和規(guī)范第二類便潛血檢測試劑（定性）注冊申報過程中審查人員對注冊材料的技術審評。（二）本指導原則旨在讓初次接觸該類產(chǎn)品的注冊審查人員對產(chǎn)品機理、結(jié)構、主要性能、預期用途等各個方面有個基本了解，同時讓技術審查人員在產(chǎn)品注