Trizol,總RNA抽提試劑 說明書

1、Trizol (總RNA抽提試劑) 產品編號R0016 產品名稱 Trizol (總RNA抽提試劑) 包裝 100ml產品簡介：¾ 碧云天生產的Trizol是一種用于細胞或組織總RNA抽提的試劑。本產品采用和Invitrogen公司的TRIzol完全相似的原理和方法，抽提的方法和步驟完全相同。¾ Trizol的顏色和TRIzol相同，加入氯仿后上層呈無色，下層呈紫紅色，便于吸取上層水相。 ¾ Trizol對動植物細胞或組織及細菌的總RNA抽提均適用。¾ Trizol可以抽提長達15 kb的RNA，也可以抽提microRNA等小RNA¾ Triz

2、ol抽提所得RNA無DNARNA溶于DEPC¾ 裂解細胞或和組織共勻漿時，Trizol可以保持樣品中RNA的完整性，即可以有效抑制RNA的降解。¾ 每一百萬細胞用Trizol抽提可得5-15µg RNA；每毫克組織用Trizol抽提可得1-10µg RNA。產量因細胞和組織不同而異。 ¾ 抽提兩個樣品約需一小時。¾ Trizol抽提所得RNA可直接用于Northern，點雜交，純化mRNA，體外翻譯，RNase protection assay，cDNA克隆，以及RT-PCR；也可以用于基因表達芯片分析、高通量測序(deep sequ

3、encing)等對RNA質量要求較高的情況。¾ 碧云天生產的Beyozol(R0011)和Trizol(R0016)的成分有細微差別，實際抽提效果無任何顯著差異。¾ 每100ml Trizol可以抽提100個六孔板中的樣品或100個50-80mg的組織樣品。包裝清單：產品編號 產品名稱 包裝 說明書 1份保存條件：4保存，一年有效。注意事項：¾ 需自備氯仿，異丙醇，DEPC，75%乙醇(DEPC水配制)，和DEPC水。DEPC(ST036)，DEPC水(R0021)可向碧云天訂購。 ¾ 所有離心管，槍頭及相關溶液都必須無RNA酶污染。耐高溫器物可150烘

4、烤4小時以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜，然后滅菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%(體積比) diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或MiliQ級水中，處理過夜，滅菌即成DEPC水。¾ 使用凍存的細胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細胞或組織差一些。因為在細胞或組織凍融過程中一些細胞或組織內的RNase會被釋放出來并剪切樣品。如果不能及時抽提RNA，推薦先加入適量Trizol，并裂解樣品后凍存。¾ 必須戴一次性手套操作，且盡量不要對著RNA樣品呼氣或說話，以防RNA酶污染。建議戴一次性口罩操作。

5、¾ Trizol含有毒物質苯酚，避免接觸皮膚或吸入。為防止濺入眼睛，請戴防護眼鏡或使用透明保護屏。如皮膚接觸Trizol，請立即用大量去垢劑和水沖洗，如仍有不適，請聽取醫(yī)生意見。¾ Trizol抽提總RNA的同時，理論上也可抽提蛋白和DNA，但未經測試。有興趣者可按Invitrogen公司的TRIzol的操作步驟進行操作。¾ 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。使用說明：1. 細胞裂解或組織勻漿。a. 貼壁細胞吸盡培養(yǎng)液，每10平方厘米細胞加入1ml Trizol。一般六孔板每孔加1ml Trizol，12孔板每孔加0.5ml Trizol?；蝿?-

6、5下，再用槍吹打2-3下，確保全部裂解，然后吸至離心管中。b. 懸浮細胞離心收集細胞，吸盡液體，每五百萬至一千萬動植物或酵母細胞，或一千萬細菌，加入1ml Trizol。用槍吹打或適當vortex，確保全部裂解。某些酵母和細菌如裂解不充分，可用勻漿器勻漿，確保全部裂解。c. 組織先將組織剪切成小塊，放入普通玻璃勻漿器內。每50mg-80mg組織加入1ml Trizol，勻漿。對于RNA完整性要求比較高的情況，推薦先液氮冷凍組織塊，然后在低溫下用研缽研碎組織，隨后再加入Trizol進行總RNA抽提。2. 對于某些蛋白，多糖或脂含量很高的細胞或組織，Trizol裂解后可能會有不溶物或油脂狀漂浮物。

7、需12,000g 4離心10分鐘，然后吸取澄清的Trizol裂解產物至一新的離心管中。3. 室溫放置5分鐘，使樣品充分裂解。4. 每毫升 Trizol加入0.2ml氯仿，vortex混勻或猛烈晃動15秒，室溫放置2-3分鐘。5. 12,000g 4離心15分鐘，然后吸取含總RNA的上層無色水相至一新的離心管中，每毫升Trizol約可吸取0.5-0.55ml。6. 按每毫升最初的Trizol加入0.5ml異丙醇，顛倒數次混勻，室溫沉淀10分鐘。如果希望提取microRNA等小RNA，推薦-70沉淀過夜。7. 12,000g 4離心10分鐘，在管底可見RNA沉淀，棄上清。8. 每毫升最初的Trizol加入1ml 75%乙醇(DEPC水配制)，vortex或顛倒混勻，9. 7,500g 4離心5分鐘，棄上清。再用離心機甩一下（>5,000rpm, 離心1秒），小心吸盡液體。10. 待RNA略干后，加入20µl DEPC水溶解，-70凍存。注意：切勿讓RNA過分干燥，否則將極難溶解，且測出的A260/280值會低于1.6。使用本產品的文獻：1. Wu G, Liu ZS, Qian Q, Jiang CQ.Effects of