蛋白A抗體離心純化試劑盒

1、蛋白A抗體離心純化試劑盒產(chǎn)品簡介：蛋白A/G親和層析是純化單克隆和多克隆抗體的常用方法。本試劑盒是利用蛋白A鍵合的凝膠介質(zhì)對血漿，培養(yǎng)液上清中的抗體進(jìn)行小批量快速純化。本試劑盒中含有高質(zhì)量的蛋白A鍵合膠，平衡與分離溶液以及2毫升離心層析柱。經(jīng)本試劑盒純化的抗體可被應(yīng)用在各種實(shí)驗(yàn)室分析檢驗(yàn)過程（如免疫共沉淀，免疫熒光，蛋白印跡，同位素標(biāo)記和免疫親和層析復(fù)合物的制備）。本抗體純化試劑盒的優(yōu)點(diǎn)如下： 本試劑盒配備齊全，價(jià)格便宜。 本試劑盒采用離心的方式分離抗體，避免了繁雜的常規(guī)層析步驟和昂貴的層析配套設(shè)備。 本試劑盒含有十次純化所需試劑，可純化不同抗體，也可大量純化同一抗體。本試劑盒組成如下： 蛋白

2、A凝膠介質(zhì) 3ml/瓶 2ml 離心柱 10 個/袋 溶液 A 50ml/瓶 溶液 B1 25ml/瓶 溶液 B2 25ml/瓶 溶液 C 5ml/瓶儲存條件：蛋白A凝膠介質(zhì)必須儲存在2-8C，不能放在室溫或冷凍保存。其他的溶液含有0.1%的疊氮化鈉，儲存在室溫即可。相關(guān)信息： Relative affinity of protein A with antibody+ strong affinity + moderate/light affinity +/- requires evaluation - No affinityHuman IgG1+Mouse IgM+/-Sheep IgG+/-

3、Human IgG2+Rat IgG+Goat IgG+/-Human IgG3-Rat IgG1+/- Pig IgG+Human IgG4+Rat IgG2a+/- Chicken IgG-Human IgA+Rat IgG2b+/-FragmentsHuman IgD+Rat IgG2c+/-Human Fab+Human IgE+Rat IgM+/-Human F(ab)2+Human IgM+Rabbit IgG+Human scFv+Mouse IgG1+Hamster IgG+Human Fc+Mouse IgG2a+Guinea pig IgG+Human -Mouse IgG

4、2b+Bovine IgG+Huamn -Mouse IgG3+ Affinity of protein A for IgG subclassSpeciesSubclassBinding pHElution pHMouseIgG18.5-9.06.0-7.0MouseIgG2a8.0-9.04.5-5.5MouseIgG2b8.0-9.03.5-4.5MouseIgG38.0-9.04.0-7.5RatIgG18.0-9.06.0-8.0RatIgG2a9.07.5-9.0RatIgG2b8.0-9.07.0-8.0RatIgG2c8.0-9.03.0-7.0HumanIgG17.0-7.52

5、.5-4.5HumanIgG27.0-7.52.5-4.5HumanIgG37.0-7.53.0-7.0HumanIgG47.0-7.52.5-4.5RabbitIgG7.52.5-7.0Guinea pigIgG17.5-9.04.0-5.0Guinea pigIgG27.5-8.03.0-4.5操作步驟：平衡凝膠介質(zhì)1. 放置蛋白A凝膠和各種緩沖溶液于室溫15分鐘左右。2搖動蛋白A凝膠使其均勻。然后用廣口的槍頭取500ul蛋白A膠并加入到空白離心柱中。33000g離心一分鐘，去掉凝膠緩沖液，然后用500ul溶液A洗滌三遍。樣品處理1離心去掉細(xì)胞碎片或沉淀2如要求嚴(yán)格，可進(jìn)行脫脂（具體步驟是

6、在每毫升樣品中加0.04毫升10% 硫酸葡聚糖和1毫升 1M 氯化鈣，然后混合15分鐘。最后用10,000g離心10分鐘并去掉沉淀）。上樣和洗脫雜質(zhì)1用溶液A1：1等體積稀釋樣品（200ul溶液A： 200ul樣品）2將稀釋后的樣品加到離心柱中，并上下顛倒離心柱2分鐘，使樣品與膠充分混合。3. 3000g 離心1分鐘以去掉溶液A.4. 用溶液A重復(fù)洗滌三次。離心條件為3000g, 1分鐘。.洗脫1如果您要純化小鼠IgG1, 大鼠 IgG1, 大鼠 IgG2a, 大鼠 IgG2b 或牛 IgG1（或您不知道所要純化的IgG種類），分別嘗試洗脫步驟a和b，以確定最佳的洗脫條件。2如果您要純化小鼠

7、IgG2a, 小鼠 IgG2b, 小鼠 IgG3, 大鼠 IgG2c, 人IgG1-IgG4, 兔 IgG, 豚鼠 IgG1, 豚鼠 IgG2, 牛 IgG2 和其他 IgGs, 直接遵照步驟a步驟a：用100ul溶液B1洗脫IgG，并把洗脫液離心至含有5ul 溶液 C的離心管中。步驟b：用100ul溶液B2洗脫IgG，并把洗脫液離心至含有13ul 溶液 C的離心管中。凝膠再生用200ul 溶液 B2洗脫凝膠介質(zhì)，3000g 離心 1分鐘去掉洗脫液。然后用5毫升溶液A反復(fù)洗滌凝膠。常見問題與解決辦法1 樣品不能順利流過離心柱 介質(zhì)結(jié)塊或其中混有大塊的顆粒。 儲存不當(dāng)導(dǎo)致微生物繁殖。2目標(biāo)蛋白不能被洗脫下來 洗脫液變質(zhì)，需要更新。 洗脫條件不正確。3