氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯檢測試劑盒使用說明書

1、氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯檢測試劑盒使用說明書本試劑盒是適用于各種農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境樣品中的低含量氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯檢測。1、原理利用間接競爭酶聯(lián)免疫吸附原理，將菊酯類農(nóng)藥半抗原-蛋白（固定抗原）偶聯(lián)物包被于聚苯乙烯微量反應板的孔穴中，再加入樣品提取液（含游離抗原）和抗體，使固定和游離抗原與抗體進行免疫競爭反應，加入HRP標記的羊抗兔IgG，使在酶標板上形成抗原-抗體-羊抗兔IgG -酶復合物，然后加酶底物顯色。顏色的深淺與游離抗原的量成反比。即游離抗原的量越大，顏色越淺；游離抗原的量越小，顏色越深。用酶標儀測定樣品的光吸收值，與菊酯類農(nóng)藥標準品作比較來判斷樣品中菊酯類農(nóng)藥的含量。2、試劑盒組成2.

2、1 包被抗原：菊酯類農(nóng)藥半抗原與卵清蛋白OVA的偶聯(lián)物，50ul/瓶，使用時用包被緩沖液稀釋3000倍。2.2 檢測抗體：新西蘭大白兔經(jīng)免疫后取血清制備，100ul/瓶，使用時用PBS緩沖液稀釋6000倍和樣品預混。2.3 底物: 四甲基聯(lián)苯胺（TMB），5mg/瓶。 2.4 HRP標記的羊抗兔IgG：工作濃度1：10000，用PH7.4的磷酸鹽緩沖液稀釋使用。的過氧化氫。100ul/瓶2.6 96孔酶標板。2.7 卵清蛋白（OVA），0.5g/瓶。以上試劑每套試劑盒各配備一瓶。3、需自行準備的試劑氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯標樣4、分析步驟氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯標樣配制：將氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯標

3、準品用丙酮配制成10m，g/mL儲備液，使用時分別用含有10丙酮的PH7.4的PBS緩沖液稀釋成5、2、1、0.5、0.1、0.05、0.01、0mg/ml的標準溶液。4.1 將包被抗原用包被緩沖液稀釋到1ug/ml，包被酶標板，每孔100L，4過夜。4.2 酶標板用洗液洗滌3次，并在每孔中加入200L1OVA封閉液，37溫育1小時。4.3 酶標板用洗液洗滌3次，加入不同濃度的氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯標準樣品（制作標準曲線）或樣品提取液（檢測樣品中的氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯含量）與抗體溶液的混合液（1：1，每孔100L，該混合液應于使用前一天配好，4過夜備用）， 37溫育 2小時。4.4 酶標板洗

4、滌同上。加入酶聯(lián)葡萄球菌A蛋白，每孔100L，37溫育1小時。4.5酶標板洗滌同上?？焖偌尤氲孜锶芤海靠?00L，37 溫育15分鐘。4.6 快速加入2M的硫酸溶液，終止反應，每孔50L，于450nm處測定吸光值。5、結(jié)果計算設定對照孔F11、G11、H11孔的OD值的平均值為Bo，1至6列的A、B、C孔的OD值平均值為B(n=l，2，3，4，5，6)，同一樣品的重復孔的OD值平均值為Byp(yp代表不同的樣品)。每組數(shù)據(jù)都以三次重復的平均值為準。以氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯標樣濃度的常用對數(shù)logc為橫坐標(X)，對應的抑制率I=100(BoByp)Bo為縱坐標(Y)，可得一條Y=a+bX直線

5、。將Byp經(jīng)換算成Yyp，然后代入直線中，可得Xyp，對Xyp取反對數(shù)，即可得知樣品中氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯含量Cyp。本方法的重復測定結(jié)果相對偏差不得超過10%。6、 保存本試劑盒中包被抗原和檢測抗體需在20下保存，其他試劑保存在4，保質(zhì)期為4-6個月。 附注1、配套試劑要求和配制1.1稱取1.59碳酸鈉（Na2CO3），2.93g碳酸氫鈉（NaHCO3），加水稀釋至1000mL。1.2 磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4）氯化鈉（NaCl）8.0g，氯化鉀（KCl）0.2g，磷酸氫二鈉（Na2HPO412H2O）2.9g，磷酸二氫鉀（KH2PO4）0.2g，加去離子水定容至1L。1.3洗液：

6、含0.05%吐溫-20的磷酸鹽緩沖液。1.4封閉液：1%的OVA溶液。1gOVA溶于100mL磷酸鹽緩沖液中。1.5底物緩沖液: PH5.0的磷酸-檸檬酸緩沖液，配制方法如下：檸檬酸（C6H7O8）21g，磷酸氫二鈉（Na2HPO412H2O）71.6g，加去離子水定容至1L 1.6 底物溶液：取100LTMB（10mgTMB溶于1mL二甲基甲酰胺中）溶液+9.875mL底物緩沖液+ 25L0.65%過氧化氫，混勻。1.7 終止液: 2mol/L的H2SO4。濃硫酸溶解在500ml雙蒸水中。附注2、所需儀器設備及要求2.1微量連續(xù)可調(diào)取樣器及吸頭：1-5，5-50，200-1000L2.2電熱恒溫水浴鍋2.3酶標測定儀：含波長450nm的濾光片分析天平：感量0.0001g附注3、樣品、標準品、對照孔和空白孔在酶標板上的分布示意123456789101112A空白標樣1標樣1標樣1標樣1標樣1標樣1空白樣品1樣品3B標樣1標樣1標樣1標樣1標樣1標樣1標樣1對照樣品1樣品3C標樣1標樣1標樣1標樣1標樣1標樣1標樣1對照樣品1樣品3D標樣2標樣2標樣2標樣2標樣2標樣2標樣2對照樣品2樣品4E標樣2標樣2標樣2標樣2標樣2標樣2標樣2對照樣品2樣品4F空白標樣2標樣2標樣2標樣2標樣2標樣2對照樣品2樣品4GHABC三列17排加氯氰菊酯系列濃度的標樣DEF三列17排加三氟氯