大豆異黃酮生理功能及其檢測(cè)方法的研究進(jìn)展

1、飲料工業(yè)綜述與述評(píng)大豆異黃酮生理功能及其檢測(cè)方法的研究進(jìn)展李萬(wàn)林，鐘姣姣，王少龍，程海瑞，白祥君（陜西理工學(xué)院化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，陜西漢中723000）摘要：大豆異黃酮是大豆生長(zhǎng)過(guò)程中形成的一類次級(jí)代謝產(chǎn)物，具有弱雌激素活性、抗氧化活性、抗溶血活性和抗真菌活性，能有效地預(yù)防和治療癌癥、骨質(zhì)疏松、婦女更年期綜合征等多種疾病。本文綜述了大豆異黃酮的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及其提取、分離與分析檢測(cè)方法的研究進(jìn)展，擬為今后大豆異黃酮的綜合利用及其衍生產(chǎn)品的開發(fā)提供參考。關(guān)鍵詞：大豆異黃酮；提??；分離；檢測(cè)方法ResearchProgressesinPhysiologicalFunctionsofandDetecti

2、onMethodsforSoybeanIsoflavonesLIWan-lin，ZHONGJiao-jiao，WANGShao-long，CHENGHai-rui，BAIXiang-jun（CollegeofChemistryandEnvironmentalScience，ShaanxiUniversityofTechnology，Hanzhong723000，China）akindofsecondarymetabolitesformedinsoybeangrowth，withweakestrogenicactivityAbstract:Soybeanisoflavones，andantiox

3、idant，anti-hemolyticandantifungalactivities，caneffectivelypreventortreatmanydiseasessuchascancer，osteoporosisandwomensmenopausesyndrome.Areviewwasmadeontheresearchprogressesinthestructure，property，extraction，separation，analysisanddetectionofsoybeanisoflavonesforprovidingsomereferencesforthecomprehen

4、siveutilizationofsoybeanisoflavonesandthedevelopmentoftheirderivatives.KeyWords:soyisoflavones；extraction；separation；detectionmethod中圖分類號(hào)：TS221文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-7871（2014）04-0054-06大豆異黃酮是大豆生長(zhǎng)過(guò)程中形成的一類次級(jí)代謝產(chǎn)物。由于是從植物中提取的，與雌激素有相似結(jié)構(gòu)，因此被稱為植物雌激素。大豆異黃酮的雌激素作用可以影響到人體的激素分泌、代謝生物學(xué)活性、蛋白質(zhì)合成、生長(zhǎng)因子活性，是天然的癌癥化學(xué)預(yù)防劑。益生大豆異黃

5、酮是從非轉(zhuǎn)基因大豆精制而成的生物活性物質(zhì)，具有多種重要生理活性，是純天然的植物雌激素，容易被人體吸收，能迅速補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)1。1.1大豆異黃酮的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1.1.1大豆異黃酮的結(jié)構(gòu)大豆異黃酮的母核是兩個(gè)苯環(huán)通過(guò)三碳鍵連接而成的。在大豆中存在的異黃酮有十二種，按照結(jié)構(gòu)可以分為四類：游離型異黃酮苷元（aglucone）、葡萄糖苷（glu-2014年第171大豆異黃酮卷第4期收稿日期：2014-02-17基金項(xiàng)目：陜西理工學(xué)院大學(xué)生科技愛好者協(xié)會(huì)項(xiàng)目編號(hào)（UIRP14001）大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，作者簡(jiǎn)介：李萬(wàn)林（1991），男，本科，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物的提取分離和純化。E-mail/p>

6、54綜述與述評(píng)飲料工業(yè)coside）、乙?；咸烟擒眨╝cetylglucoside）和丙二酰基葡萄糖苷（malonylglucoside）2。每一類又可分為三種，基體分別為游離型異黃酮苷元：染料木黃酮（genistein）、黃豆苷原（daidzein）和大豆黃素（glycitein），這三種異黃酮苷元在大豆籽粒中約占總異黃酮的2%3%。大豆籽粒中有97%98%的異黃酮是以葡萄糖苷、乙?；咸烟擒蘸捅；咸烟擒盏男问酱嬖诘?。葡萄糖苷型異黃酮包括染料木苷（genistin）、黃豆苷（daidzin）、大豆黃苷（glycitin）；乙?；咸烟擒瞻ㄒ阴Ｈ玖夏拒誥cetylgenistin）、

7、乙酰染料黃豆苷（acetyldaidzi）和乙酰染料大豆黃苷（acetylglycitin）；丙二?；咸烟擒瞻ūＨ玖夏拒眨╩alonylgenistin）、丙二酰染料黃豆苷malonyldaidzin）和丙二酰染料大豆黃苷（malonylglyc-itin）。各類異黃酮化學(xué)結(jié)構(gòu)如下圖1所示3：HOOABK2KC1OOHAgluconeCH2OHOHOOOOHABOHK2CK1OHGlucisideOOOOHOOOOHABOHK2KC1OHAcetylgucosideOOCOOHOOHOOOOHABOHK2KC1OHO圖1大豆異黃酮結(jié)構(gòu)式Fig.1Molecularstructuralf

8、ormulaofsoybeanisoflavone1.1.2大豆異黃酮的性質(zhì)純大豆異黃酮是一種無(wú)色、具苦澀味的晶體狀物質(zhì)，染料木素為無(wú)色片狀結(jié)晶，大豆苷元為無(wú)色針狀結(jié)晶。工業(yè)上大豆異黃酮產(chǎn)品則為白色或淡黃色粉末，具有苦味和干澀感覺(jué)。大豆異黃酮苷元，尤其是染料木素和大豆苷元比糖苷具有更強(qiáng)的不愉快風(fēng)味。常溫下大豆異黃酮性質(zhì)穩(wěn)定，易溶于醇類、酯類、酮類溶劑和稀堿中，不溶于水，難溶于石油醚、苯、正己烷等非極性有機(jī)溶劑4，而合成大豆苷元熔點(diǎn)為320321，合成染料木素熔點(diǎn)為295296，合成及從大豆胚芽提取黃豆黃素熔點(diǎn)為337339。大豆異黃酮中葡萄糖苷在高溫強(qiáng)酸或酶存在條件下可水解去掉葡萄糖基而轉(zhuǎn)變成

9、葡萄糖苷配基形式。大豆異黃酮對(duì)鹽酸鎂粉或鈉汞試劑呈鮮紅色、紫色或黃色，與金屬鹽試劑如鋁鹽、鉻鹽、鉛鹽等可生成帶色絡(luò)合物。大豆異黃酮苷元具有多酚羥基結(jié)構(gòu)從而發(fā)揮還原效應(yīng)5。1.2大豆異黃酮的生理功能大豆異黃酮有著許多重要的醫(yī)理作用。大豆異黃酮抗腫瘤作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究國(guó)內(nèi)外報(bào)道很多，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，用含大豆的飼料喂養(yǎng)動(dòng)物，可降低腫瘤的發(fā)生率，延長(zhǎng)潛伏期，減少腫瘤的發(fā)生數(shù)目。目前，大豆異黃酮抗腫瘤作用的主要機(jī)制包括以下幾個(gè)方面：1）抗氧化作用；2）類雌激素和抗激素作用；3）調(diào)節(jié)細(xì)胞周期及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；4）抑制酪氨酸蛋白激酶的活性；5）抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶的活性；6）抑制腫瘤新生血管的生成，有抗癌活性4。大豆

10、異黃酮有抗心血管疾病、調(diào)節(jié)血脂的作用。大量流行病學(xué)研究表明，攝入富含大豆異黃酮飲食的人群，其心血管疾病的發(fā)病率明顯低于較少攝入大豆異黃酮的人群?，F(xiàn)在以大豆胚軸及大豆異黃酮為主要原料開發(fā)的功能性天然健康產(chǎn)品已實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化6。大豆異黃酮有延緩衰老、抗老年性癡呆的作用。老年性癡呆癥是目前最常見的一種癡呆癥，是一組病因未明的原發(fā)性退行性腦變性疾病。多起病于老年期，潛隱起病，病程緩慢且不可逆，臨床上以智能損害為主。病理改變主要為皮質(zhì)彌漫性萎縮，溝回增寬，腦室擴(kuò)大，神經(jīng)元大量減少，并可見老年斑（SP），神經(jīng)原纖維結(jié)NFT）等病變，膽堿乙酰化酶及乙酰膽堿含量顯著減少。該病與膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（chAT）的活性和膽

11、堿能神經(jīng)減少密切相關(guān)。用大豆異黃酮對(duì)這類患者進(jìn)行治療，可明顯降低該病的發(fā)病率，緩解癥狀，恢復(fù)認(rèn)知。大豆異黃酮由于具有弱雌激素活性、抗氧化活性、抗溶血活性和抗真菌活性，能有效地預(yù)防和治療癌癥特別是乳腺癌和前列腺癌）、骨質(zhì)疏松、婦女更年期綜合征等多種疾病，因此在保健食品和醫(yī)藥中有廣泛的應(yīng)用7。2014年第17卷第4期55（飲料工業(yè)2大豆異黃酮的提取分離及分析檢測(cè)方法2.1大豆異黃酮的提取方法近年來(lái)異黃酮作為一類有重要藥理活性的物質(zhì)，其提取方法受到人們的廣泛關(guān)注，較為常見的有溶劑萃取、微波萃取、超聲萃取、超臨界流體萃取等。2.1.1水解法采用水解法是將結(jié)合型大豆異黃酮水解為游離型大豆異黃酮，這樣既有

12、利于分離純化，也有利于大豆異黃酮的檢測(cè)。張炳文等8通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確立了糖昔型大豆異黃酮轉(zhuǎn)化為游離型大豆異黃酮的最佳酸水解工藝條件：鹽酸甲醇溶液的濃度為2mol/L，水解溫度為80，水解時(shí)間為60min，水解前后大豆素的含量由0.22%增加至14.01%，染料木素的含量由0.02%增加至14.01%。汪海波9等以脫脂大豆粕為原料，采用酸水解后用無(wú)水乙醚萃取的方法提取游離型大豆異黃酮成分，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，酸水解大豆異黃酮的提取率和產(chǎn)品純度均高于常規(guī)有機(jī)溶劑浸提法。2.1.2有機(jī)溶劑提取法根據(jù)大豆異黃酮的特性，在大豆乳清經(jīng)超濾去除大部分的蛋白質(zhì)后可采用一定的有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取使大豆異黃酮溶于有機(jī)溶劑中，完

13、成初步純化。乙酸乙酯對(duì)大豆異黃酮的萃取效果較好。井樂(lè)剛等10采用乙酸乙酯為提取劑對(duì)大豆異黃酮進(jìn)行提取。實(shí)驗(yàn)對(duì)用乙酸乙酯從大豆乳清中萃取大豆異黃酮進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)3次萃取后，大豆乳清中的異黃酮有87.2%轉(zhuǎn)移到乙酸乙酯相中。2.1.3微波輔助提取法微波萃取技術(shù)是根據(jù)物質(zhì)在微波場(chǎng)中吸收能力差異，使基體物質(zhì)的某些區(qū)域選擇性加熱，從而使被萃取物從基體體系中分離，進(jìn)入微波吸收能力相對(duì)差的萃取劑中。李俠等11以乙醇作為提取劑，微波輔助從大豆中提取大豆異黃酮。在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過(guò)正交試年驗(yàn)，考察了乙醇濃度、料液比、微波時(shí)間、提取溫度、提取時(shí)間5個(gè)因素對(duì)大豆異黃酮提取量的影響。實(shí)驗(yàn)表第明微波輔

14、助乙醇提取大豆異黃酮的最佳工藝條件為：乙17卷醇濃度（體積分?jǐn)?shù)）80%，料液比116g/mL，微波時(shí)間4min，提取溫度70，提取時(shí)間2h。在該條件下，第大豆異黃酮的提取量為25.37mg（20g脫脂大豆粉）。由4期此可見用該工藝提取方法簡(jiǎn)單可行，不僅節(jié)省時(shí)間，而且提取量高。還有采用乙酸乙酯萃取的方法從大豆乳清中分離異黃酮是可行的。2.1.4超聲輔助提取法超聲萃取技術(shù)的原理是根據(jù)超聲具有空化、粉碎、56綜述與述評(píng)攪拌等特殊作用，對(duì)植物藥材的細(xì)胞有破壞現(xiàn)象，使其有效成分快速溶于溶媒中，以利于提取。何恩銘等12以乙醇為溶劑，采用超聲波提取法，對(duì)豆渣中大豆異黃酮的提取工藝進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，乙醇

15、濃度、提取溫度、超聲提取時(shí)間和料液比對(duì)大豆異黃酮的提取均有影響，初步得出超聲波法提取豆渣中大豆異黃酮的工藝為：乙醇濃度為80%，提取溫度5060，超聲提取時(shí)間為3040min，料液比在18至112之間。用超聲波提取豆渣中大豆異黃酮的方法與傳統(tǒng)的乙醇提取法相比，能縮短提取時(shí)間，減少溶劑的用量，可以提高乙醇的提取效率；在較低的溫度下提取，可減少對(duì)大豆異黃酮活性物質(zhì)的氧化破壞；無(wú)任何的污染，工藝過(guò)程簡(jiǎn)單，該方法能提高豆渣的綜合利用率，具有廣闊的應(yīng)用前景。2.1.5超臨界流體萃取法13與傳統(tǒng)的固定床吸附/脫附理論一樣，天然產(chǎn)物的超臨界二氧化碳流體萃取過(guò)程可分解為以下5個(gè)步驟：1）萃取劑（二氧化碳/夾帶

16、劑）在天然藥物顆粒表面形成層流膜；2）萃取劑向顆粒內(nèi)部孔隙的滲透；3）顆粒內(nèi)有效成分向萃取劑的溶解擴(kuò)散；4）溶有目標(biāo)組分的溶劑向顆粒表面擴(kuò)散；5）溶有目標(biāo)組分的溶劑向液相主體的擴(kuò)散14。萃取過(guò)程中，脫脂豆粕粉末粒徑大約為0.095pm，粒徑非常小。因此，可以認(rèn)為溶質(zhì)在豆粕粉末顆粒內(nèi)部的擴(kuò)散速率非?？?，而主要傳質(zhì)阻力來(lái)源于床層中的對(duì)流擴(kuò)散和軸向反混過(guò)程。另外，處理過(guò)程中認(rèn)為乙醇完全溶解于二氧化碳中形成均一超臨界流體相。借鑒傳統(tǒng)的固定床吸附/脫附理論，模型建立過(guò)程中假設(shè)條件如下：l）固定床層內(nèi)溫度、壓力操作等參數(shù)分布均勻；2）固定床層內(nèi)部豆粕粉末均勻填充，可采用恒定空隙率；3）流動(dòng)相（二氧化碳/乙

17、醇）在固定床內(nèi)為均勻混合的均相超臨界流體；4）萃取過(guò)程中流動(dòng)相的流型為平推流；5）忽略徑向傳質(zhì)及徑向萃取劑流速15。2.2大豆異黃酮的分離方法黃酮類化合物被認(rèn)為是高度有效的抗氧化劑以及非常有效的生物活性物質(zhì)，黃酮類化合物的藥物用作治療也日益增多，分離技術(shù)對(duì)這些藥物的制造成本的降低起到了重要作用。因此有關(guān)大豆異黃酮在分離方法的選擇就極為重要，下面介紹幾種大豆異黃酮的分離方法。2.2.1薄層層析法薄層層析是一種將固定相在固體上鋪成薄層進(jìn)行色譜分離的方法。薄層層析的作用機(jī)理主要包括吸附、分配、離子交換和凝膠過(guò)濾等作用，能分離純化和定性分析生姜精油中姜烯成分等少量物質(zhì)，并且它兼具柱色譜和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)。

18、薄層層析法的基本原理是利用混合物中不同組分在同一物質(zhì)中不同的吸附或溶解性能，或者2014綜述與述評(píng)飲料工業(yè)是其它的親和作用性能差異，使混合物溶液流經(jīng)這種物質(zhì)時(shí)，能夠進(jìn)行反復(fù)的吸附或者是分配等作用，從而將各組分分離開來(lái)。2.2.2硅膠柱層析法硅膠層析法具有分離速度快、效率高、分離效果明顯等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于生物活性物質(zhì)的分離研究中。在硅膠柱層析中，使用的硅膠是一種堅(jiān)硬無(wú)定型立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的硅酸。硅膠與被分離物質(zhì)之間產(chǎn)生物理和化學(xué)兩種作用。物理作用來(lái)自于硅膠表面與溶質(zhì)分子之間的范德華力，如靜電力、誘導(dǎo)力、色散力，其特點(diǎn)是吸附速度快，在相同的情況下，吸附過(guò)程與脫附過(guò)程是同時(shí)進(jìn)行的，被吸附物質(zhì)在一定的條

19、件下可以被解吸出來(lái)?；瘜W(xué)作用主要是硅膠表面的硅羥基與待分離物質(zhì)之間的氫鍵作用。不同的化合物由于其分子結(jié)構(gòu)的不同，與硅膠表面作用力的大小也不同；同時(shí)，同一種洗脫劑對(duì)不同化合物也因分子結(jié)構(gòu)而異使得他們的溶解度也不同。當(dāng)進(jìn)行層析操作時(shí)，隨著層析柱洗脫劑的不斷沖洗，致使不同的化合物組分在層析柱中的流動(dòng)速度不一樣，最后使得一個(gè)復(fù)雜的混合物由于各組分通過(guò)色譜柱的速率不同而達(dá)到分離的效果。2.2.3膜分離與醇沉法結(jié)合膜技術(shù)是近幾年來(lái)發(fā)展的一項(xiàng)新的分離技術(shù)，因獲得的產(chǎn)物活性高而廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物工程等領(lǐng)域。膜技術(shù)是用天然或人工合成的高分子薄膜，以外界能量或化學(xué)位差為推動(dòng)力，對(duì)雙組分或多組分的

20、溶質(zhì)和溶劑進(jìn)行分離、分級(jí)、提純和富集的方法。包括反滲透、超濾、微濾、納濾、電滲析、膜電解、擴(kuò)散滲析、透析等第一代膜過(guò)程和氣體分離、蒸汽滲透、全蒸發(fā)、膜蒸餾、膜接觸器和載體介導(dǎo)等第二代膜過(guò)程。膜分離技術(shù)在制備大豆?jié)饪s磷脂和制備大豆分離蛋白和多肽中以及處理大豆乳清廢水中都有著重要的應(yīng)用16。許萍萍等通過(guò)對(duì)膜材料，乙醇濃度、提純時(shí)間、方法等工藝參數(shù)的確定，提供一種設(shè)備成本低，簡(jiǎn)單可行、易于操作、分離提純效率高的方法，為實(shí)現(xiàn)大豆異黃酮的工業(yè)化生產(chǎn)提供可靠途徑17。2.2.4高速逆流色譜法逆流色譜是20世紀(jì)50年代源于多極萃取技術(shù)（非連續(xù)性）。其原理是基于組分在旋轉(zhuǎn)螺旋管內(nèi)的相對(duì)移動(dòng)而互不混溶的兩相溶劑

21、間分布不同而獲得分離，其分離效率和速度可以與HPLC相媲美。HSCCC分離效率高，產(chǎn)品純度高；不存在載體對(duì)樣品的吸附和污染；制備量大和溶劑消耗少；操作簡(jiǎn)單，能從極復(fù)雜的混合物中分離出特定的組分。高速逆流色譜（HSCCC）是新型的液液分配色譜技術(shù)，無(wú)需固體載體作固定相，克服了固體載體所帶來(lái)的樣品吸附，既能分離非極性化合物，也能分離極性化合物，制備量大，一步分離便可得到高純度化合物18。吳永慧等19采用高速逆流色譜法對(duì)大豆皂苷和異黃酮進(jìn)行了分離，通過(guò)調(diào)整溶劑體系，確立大豆異黃酮和大豆皂苷的分離方法。2.3大豆異黃酮的檢測(cè)方法經(jīng)常用的檢驗(yàn)方法如下：2.3.1比色法比色法是以生成有色化合物的顯色反應(yīng)為

22、基礎(chǔ)的，一般包括兩個(gè)步驟：首先是選擇適當(dāng)?shù)娘@色試劑與待測(cè)組分反應(yīng)，形成有色化合物，然后再比較或測(cè)量有色化合物的顏色深度。比色分析對(duì)顯色反應(yīng)的基本要求是：1）反應(yīng)應(yīng)具有較高的選擇性，即選用的顯色劑最好只與待測(cè)組分反應(yīng)，而不與其他干擾組分反應(yīng)或其他組分的干擾很?。?）反應(yīng)生成的有色化合物有恒定的組分和較高的穩(wěn)定性；3）反應(yīng)生成的有色化合物有足夠的靈敏度，摩爾吸光系數(shù)一般應(yīng)在104以上；4）反應(yīng)生成的有色化合物與顯色劑之間的顏色差別較大，它們的最大吸收濃度之差一般應(yīng)在60nm以上。選用的顯色劑可以是一種試劑，也可以是兩種不同的試劑。如果待測(cè)組分與兩種不同的試劑反應(yīng)生成一種有色化合物，則稱為三元絡(luò)合物

23、顯色反應(yīng)。這類顯色反應(yīng)常常具有更高的靈敏度和選擇性，在比色法和紫外-可見分光光度法中應(yīng)用非常普遍。選擇適當(dāng)?shù)娘@色反應(yīng)，研究最合適的反應(yīng)條件和消除干擾的方法是比色分析的關(guān)鍵問(wèn)題。溶液的酸度、顯色劑的用量、溫度、溶劑等對(duì)顯色反應(yīng)都有影響。董懷海等20研究建立了三波長(zhǎng)比色法，能有效地扣除色素和醇溶性蛋白等雜質(zhì)的干擾，精密度實(shí)驗(yàn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.14%，平均加樣回收率為104.03%，加樣回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.70%，并用此方法測(cè)定6個(gè)品種大豆及其胚芽中異黃酮的含量，其異黃酮的含量分別為0.308%0.447%和1.23%2.49%。2.3.2氣相色譜法氣相色譜系統(tǒng)由盛在管柱內(nèi)的吸附劑或惰性固體

24、上涂著液體的固定相和不斷通過(guò)管柱的氣體的流動(dòng)相組成。將欲分離、分析的樣品從管柱一端加入后，由于固定相對(duì)樣品中各組分吸附或溶解能力不同，即各組分在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)有差別，當(dāng)組分在兩相中反復(fù)多次進(jìn)行分配并隨移動(dòng)相向前移動(dòng)時(shí)，各組分沿管柱運(yùn)動(dòng)的速度就不同，分配系數(shù)小的組分被固定相滯留的時(shí)間短，能較快地從色譜柱末端流出。以各組分從2014年第17卷第期57飲料工業(yè)柱末端流出的濃度C對(duì)進(jìn)樣后的時(shí)間t作圖，得到的圖稱為色譜圖。只要在氣相色譜儀允許的條件下可以氣化而不分解的物質(zhì)，都可以用氣相色譜法測(cè)定。張素霞等21提出了高效氣相色譜質(zhì)譜法聯(lián)用方法是氣相色譜法的延伸，它的定性能力更準(zhǔn)確。該方法具有

25、高的靈敏度，是一種簡(jiǎn)便靈敏的分析方法，可用于食品中大豆苷元和染料木素常規(guī)分析的方法。2.3.3紫外分光光度法許多有機(jī)化合物在紫外區(qū)具有特征的吸收光譜，因此可用紫外分光光度法對(duì)有機(jī)物質(zhì)進(jìn)行定性鑒定，結(jié)構(gòu)分析及定量測(cè)定。紫外分光光度法定量測(cè)定的依據(jù)是比耳定律。首先確定化合物的紫外吸收光譜，確定最大吸收波長(zhǎng)。在選定的波長(zhǎng)下，作出化合物溶液的工作曲線，根據(jù)在相同條件下測(cè)得待測(cè)液的吸光度值來(lái)確定待測(cè)液中化合物的含量。黃莉等22以染料木素為標(biāo)準(zhǔn)品，在其紫外最大吸收峰260nm處，用紫外分光光度法測(cè)定大豆豆粕中異黃酮的含量進(jìn)行了精密度回收率的實(shí)驗(yàn)，最終確定測(cè)定方法的相關(guān)系數(shù)R2=0.9982，平均回收率在規(guī)

26、定的（100±10）%范圍內(nèi)，精密度試驗(yàn)RSD為1.03%，重現(xiàn)性好，能全面反映樣品中大豆異黃酮的含量，適用于豆粕中所含大豆異黃酮的質(zhì)量檢測(cè)和測(cè)定。2.3.4近紅外光譜法有機(jī)物以及部分無(wú)機(jī)物分子中各種含氫基團(tuán)在受到近紅外線照射時(shí)，被激發(fā)產(chǎn)生共振。同時(shí)吸收一部分光的能量，測(cè)量其對(duì)光的吸收情況，可以得到極為復(fù)雜的紅外圖譜，及被測(cè)物質(zhì)的特征。不同物質(zhì)在近紅外區(qū)域有豐富的吸收光譜，每種都有其固定的特征。由此可得到各種物質(zhì)的組成和結(jié)構(gòu)信息。王力立等23以100份中國(guó)核心大豆種質(zhì)資源為材料，掃描大豆的近紅外光譜，以傅里葉近紅外光譜法（FT-NIRS）與HPLC技術(shù)相結(jié)合，采用偏最小二乘（PLS）

27、回歸和交叉驗(yàn)證法，探討利用FT-NIRS技術(shù)預(yù)測(cè)異黃酮含量的可行性結(jié)果表明，利用FT-NIRS預(yù)測(cè)大豆年中總異黃酮含量是可行的，但是各異黃酮組分的近紅外模型不能達(dá)到準(zhǔn)確預(yù)測(cè)要求。大豆異黃酮近紅外模型的第建立對(duì)今后大豆的異黃酮選育工作可以提供幫助。17卷2.3.5高效液相色譜法高效液相色譜法有“三高一廣一快”的特點(diǎn)：1）高第壓：流動(dòng)相為液體，流經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，4期為了能迅速通過(guò)色譜柱，必須對(duì)載液加高壓。2）高效：分離效能高?？蛇x擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。3）高靈敏度：紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，進(jìn)樣量在微升數(shù)量級(jí)。4）應(yīng)用范圍廣：

28、百分之七十以上的有機(jī)化合物可58綜述與述評(píng)用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢(shì)。5）分析速度快、載液流速快：較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個(gè)樣品在1530min，有些樣品甚至在5min內(nèi)即可完成，一般小于1h。張海軍等24初步建立測(cè)定大豆異黃酮5種組分（染料木素、染料木苷、大豆苷元、大豆苷、黃豆黃苷）含量的高效液相色譜法，研究大豆不同組織異黃酮含量差異及不同生長(zhǎng)時(shí)期胚中異黃酮的積累規(guī)律，為深入研究大豆異黃酮含量以及大豆和豆制品的綜合利用開發(fā)提供理論依據(jù)。3大豆異黃酮的研究展望大豆異黃酮是一種天然植物保健品，正處于開發(fā)階段，其市場(chǎng)前景廣

29、闊。近年來(lái)，美國(guó)、日本、德國(guó)、英國(guó)出現(xiàn)大豆異黃酮熱，美國(guó)和日本對(duì)大豆異黃酮開展大量研究工作。我國(guó)對(duì)大豆異黃酮研究已成為熱點(diǎn)。國(guó)內(nèi)大豆異黃酮作為食品、保健品、特別是醫(yī)藥中間體，被用作食品添加劑、保健飲品和藥物組分。目前在全球范圍內(nèi)，大豆異黃酮類產(chǎn)品基本是作為功能性食品在市場(chǎng)上銷售，而我國(guó)近90%大豆異黃酮作為原材料出口，僅約占10%產(chǎn)量在國(guó)內(nèi)被轉(zhuǎn)化為終端產(chǎn)品。因此國(guó)內(nèi)食品科研部門已立項(xiàng)大力開發(fā)大豆異黃酮產(chǎn)品，這不僅能填補(bǔ)國(guó)內(nèi)市場(chǎng)空白，還能提高大豆產(chǎn)品附加值25。隨著人類生活水平的提高，人們?cè)絹?lái)越重視身體的保健，大豆異黃酮對(duì)人體生理代謝具有有益的調(diào)節(jié)作用，它對(duì)于低激素水平者可以起到雌激素樣作用，對(duì)

30、于高激素水平者可產(chǎn)生抗激素作用，特別是大豆異黃酮有利于預(yù)防心血管疾病以及腫瘤等疾病的發(fā)生，為人類對(duì)慢性疾病的預(yù)防提供了可能。我國(guó)大豆資源豐富，豆制品種類多樣，大豆異黃酮的價(jià)值相當(dāng)可觀，具有很好的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，為其開發(fā)利用展示了廣闊前景。但是目前對(duì)確切的作用機(jī)制還不是完全清楚，因此，深入開展大豆異黃酮在整體動(dòng)物及人體的生物學(xué)作用實(shí)驗(yàn)研究，將會(huì)是今后研究工作的重點(diǎn)之一。參考文獻(xiàn)：1陳霞，趙貴興，張延坤.大豆皂甙的生理功能及制備應(yīng)用J.大豆通報(bào)，2002（2）：23-23.2李丹.大豆異黃酮的提取分離及相關(guān)動(dòng)力學(xué)和熱力學(xué)的基礎(chǔ)研究D.鄭州：鄭州大學(xué)，2009.3左玉幫.從豆粕中提取大豆異黃酮的研究

31、D.天津：天津大學(xué)，2008.4井樂(lè)剛，張永忠.大豆異黃酮的物理化學(xué)性質(zhì)J.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2006，22（1）：85-87.5金俊艷，郝為民.淺談大豆異黃酮產(chǎn)品J.現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)，2007：33（2）：2014綜述與述評(píng)飲料工業(yè)28-29.proteinaloneorsupplementedwithanisoflavoneextractor6高榮海，張春紅，趙秀紅，等.大豆異黃酮研究進(jìn)展J.糧食與油脂，conjugatedequineestrogeninovariectomizedcynomolgusmonkeysJ.2009，5：2-6.TheJournalofNutrition，2000，13

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