GA9論文蛋白相互作用 轉(zhuǎn)錄活性 乳腺癌 組蛋白修飾

1、GA9論文：雌激素受體共調(diào)節(jié)因子GA9的功能研究【中文摘要】雌激素受體ER是一種核受體類轉(zhuǎn)錄因子,主要調(diào)節(jié)與雌激素有關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄,在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有重要作用,是乳腺癌治療的靶標(biāo)和預(yù)后的指標(biāo)之一。ER分為ERa和ERp兩種,兩者在結(jié)構(gòu)和功能上有相似之處,但又不完全相同,都含兩個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域AF1和AF2。AF1和AF2的有效轉(zhuǎn)錄激活作用依賴于與其它蛋白質(zhì)的相互作用。目前,乳腺癌的內(nèi)分泌治療主要是通過(guò)降低ER轉(zhuǎn)錄活性來(lái)實(shí)現(xiàn)的,因此ER共調(diào)節(jié)因子的發(fā)現(xiàn)和功能研究對(duì)于有效開(kāi)發(fā)治療乳腺癌的藥物具有重大意義。在人類的許多重大疾病包括腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中,DNA和組蛋白修飾等表觀遺傳修飾也

2、具有非常重要的作用。多數(shù)表觀遺傳的改變是可逆的,這就為疾病的治療提供了樂(lè)觀的前景。其中,組蛋白修飾有豐富的多樣性并且在基因表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮重要作用,這些修飾可影響組蛋白與DNA的親和性,進(jìn)而改變?nèi)旧|(zhì)的狀態(tài),或者影響轉(zhuǎn)錄因子與DNA序列的結(jié)合,最終導(dǎo)致下游基因轉(zhuǎn)錄激活或抑制。越來(lái)越多證據(jù)表明,組蛋白修飾與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān),因此,對(duì)組蛋白修飾的進(jìn)一步研究,對(duì)于腫瘤等重大疾病的診斷、防治和預(yù)后判斷有重要意義,為腫瘤的治療及相應(yīng)藥物開(kāi)發(fā)研究提供了新的靶標(biāo)。GA9是一個(gè)未.【英文摘要】Estrogen receptor(ER) is a member of a large superfamily of

3、 nuclear receptors that regulate the transcription of estrogen-responsive genes. ER is an effective treatment target as well as a prognostic factor of breast cancer. There are two forms of ER, ERa and ER,which exhibit similar, yet distinct, structural and functional features. Both ERs have two impor

4、tant transcription activation function regions, AF1 and AF2. The effective transactivation of AF1 and AF2 depends on their interaction with other protei.【關(guān)鍵詞】GA9 ER 蛋白相互作用 轉(zhuǎn)錄活性 乳腺癌 組蛋白修飾【英文關(guān)鍵詞】GA9 ER protein interaction transcriptional activity breast cancer histone modification【索購(gòu)全文】聯(lián)系Q1：138113721

5、Q2：139938848【目錄】雌激素受體共調(diào)節(jié)因子GA9的功能研究摘要3-4ABSTRACT4-5英文縮寫(xiě)詞說(shuō)明6-10第一部分 前言10-171.1 研究背景10-16 雌激素10 雌激素受體分類及結(jié)構(gòu)域10-11 ER的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制11-12 ER共調(diào)節(jié)因子12-13 乳腺癌的治療13 核心組蛋白修飾13-161.2 研究目的及意義16-17第二部分 GA9在乳腺癌組織細(xì)胞中的表達(dá)情況17-242.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器17-19 細(xì)胞株及乳腺癌組織標(biāo)本切片17 細(xì)胞培養(yǎng)試劑17 抗體17 其它分子生物學(xué)試劑和化學(xué)試劑17 主要實(shí)驗(yàn)儀器及試劑盒17-18 主要工作液配方18-192.2 實(shí)驗(yàn)

6、方法19-21 細(xì)胞培養(yǎng)19-20 Western blot分析20 細(xì)胞免疫熒光20 組織免疫20-212.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-23 GA9在乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況21-22 細(xì)胞內(nèi)源GA9在乳腺癌細(xì)胞中的定位22 GA9在乳腺癌患者組織中的表達(dá)22-232.4 討論23-24第三部分 GA9與ER的相互作用及其對(duì)ER活性的調(diào)節(jié)作用24-433.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器24-27 引物合成及序列測(cè)定24 菌株和細(xì)胞系24 質(zhì)粒24 分子生物學(xué)工具酶24 常用試劑盒24-25 細(xì)胞培養(yǎng)試劑25 抗體25 其他試劑25 主要實(shí)驗(yàn)儀器25 主要工作液配方25-273.2 實(shí)驗(yàn)方法27-32 重組質(zhì)粒的構(gòu)

7、建27-29 siRNAs表達(dá)載體的構(gòu)建29 哺乳動(dòng)物細(xì)胞的轉(zhuǎn)染29-30 Western blot分析(同前)30 GST融合蛋白在大腸桿菌DH5中的表達(dá)鑒定30 GST融合蛋白的純化30 GST沉淀(pull down)分析30 免疫共沉淀30-31 熒光素酶和-半乳糖苷酶活性測(cè)定31 轉(zhuǎn)錄激活活性檢測(cè)31-32 RNA的提取32 實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time PCR)323.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-41 GST-GA9八個(gè)缺失突變體的表達(dá)鑒定32 GST-pull down實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證GA9與ER和ER存在體外相互作用32-33 GST-pull down實(shí)驗(yàn)確定GA9與ER體外相互作用的區(qū)

8、域33 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證GA9與ER和ER在體內(nèi)的相互作用33-34 雌激素(E2)對(duì)GA9與ER和ER在體內(nèi)相互作用的影響34 與GA9相互作用的ER和ER區(qū)域的定位34-35 內(nèi)源性免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證GA9與ER在體內(nèi)的相互作用35-36 過(guò)表達(dá)GA9能抑制ER的轉(zhuǎn)錄活性36-37 GA9對(duì)ER轉(zhuǎn)錄活性的抑制存在劑量效應(yīng)37 過(guò)表達(dá)GA9能抑制ER或ER的轉(zhuǎn)錄活性37-38 GA9降低ERE報(bào)告基因的活性依賴于ER38-39 GA9 siRNAs的表達(dá)鑒定39 敲低GA9升高ER的轉(zhuǎn)錄活性39-40 GA9對(duì)ER下游基因表達(dá)的影響40-413.4 討論41-43第四部分 GA9與核心組蛋白修飾43-474.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器434.2 實(shí)驗(yàn)方法434.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-