牛膝種子帶菌檢測(cè)和藥劑消毒處理效果研究(1)

1、牛膝種子帶菌檢測(cè)和藥劑消毒處理效果研究(1)    【關(guān)鍵詞】 牛膝種子；,寄藏真菌檢測(cè),；,藥劑消毒摘要：目的研究3個(gè)不同產(chǎn)地的牛膝種子寄藏真菌情況，比較不同藥劑處理牛膝種子的消毒效果，為牛膝種子預(yù)防保健處理提供依據(jù)。方法采用離體平皿法對(duì)牛膝種子表面和內(nèi)部進(jìn)行帶菌檢測(cè)；通過平皿培養(yǎng)法觀察藥劑拌種的消毒效果。結(jié)果牛膝種子表面的孢子負(fù)荷量為17.8孢子/粒種子321.9孢子/粒種子，產(chǎn)地間差異極顯著；攜帶的優(yōu)勢(shì)真菌群主要為青霉屬Penicillium spp.，曲霉屬Aspergillus spp.真菌，產(chǎn)地間差異不顯著，但分離頻率差異顯著；種子穎殼帶菌率

2、在19.5%67.3%,種仁的帶菌率在13.5%47.5%, 內(nèi)部寄藏的優(yōu)勢(shì)菌群主要有鉸鏈孢屬Alternaria spp.，根霉屬Rhizopus spp.，曲霉屬和交鏈孢屬真菌，產(chǎn)地間帶菌率和優(yōu)勢(shì)菌群都有較大差異。結(jié)論 在7種農(nóng)作物常用的種子處理消毒劑中敵克松表面消毒效果相對(duì)較好，可達(dá)到50.0以上。關(guān)鍵詞：牛膝種子； 寄藏真菌檢測(cè) ； 藥劑消毒Testing of Seed-borne Fungi of Achyranthes Seed and Disinfection Effect of Seven Fungicides on Seed-borne FungiAbstract：Obje

3、ctiveTo study the dominant seed_ borne fungi of Achyranthes seeds from 3 different producing areas and compare the disinfection effect of several fungicides on seed-borne fungi of Achyranthes seed. MethodsPetri-dish testing was used to determine the external and internal seed-borne fungi and the dis

4、infection effect of fungicides.ResultsThe result showed that the amount of spore on the surface of one Achyranthes seed was17.8%321.9% according to different samples, and the big differences existed. Penicillium spp.and Aspergillus spp. were the two kinds of externally dominant fungi and there was f

5、ew differences in fungi kind among producing areas but differences in fungi isolation frequency; Penicillium spp. ,Rhizopus spp., Aspergillus spp. and Alternaria spp. were the internally dominant seed-borne fungi ,including seed capsule and the internal tissue of seed and their fungi percentage was

6、19.5%67.3% and 13.5%47.5% respectively. There were differences in fungi percentage and dominant seed borne fungi among different producing areas. ConclusionThe disinfection effect of seven fungicides are not so good, only Fenaminosulf was up to 50.0%.Key words：Achyranthes Seed; Seed-borne Fungi Test

7、ing; Effect of Fungicide    隨著人們對(duì)種子質(zhì)量的認(rèn)識(shí)提高，不再局限于傳統(tǒng)的凈度、發(fā)芽率、水份和千粒重，而越來越關(guān)注種子健康狀況和通過對(duì)種子健康保健處理來提高種子播種價(jià)值。國(guó)內(nèi)外對(duì)很多大田作物如小麥、水稻、玉米等種子都進(jìn)行了健康檢測(cè)的研究15，并且檢驗(yàn)技術(shù)已經(jīng)日趨成熟，但是關(guān)于中藥材種子健康檢測(cè)還少有報(bào)道。懷牛膝(Achyranthes Bidentata B1.)為莧科多年生草本植物，以根入藥，有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、逐淤通經(jīng)、引血下行之功效6。牛膝以種子繁殖，我國(guó)許多省份都有大范圍的人工種植，近年來隨著牛膝種植面積逐漸增大,牛膝種

8、子在產(chǎn)區(qū)間頻繁調(diào)運(yùn)。但目前還沒有關(guān)于牛膝種子健康檢測(cè)和種子藥劑消毒處理的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)參考國(guó)際種子檢驗(yàn)規(guī)程和農(nóng)作物種子健康檢測(cè)方法,對(duì)來自3個(gè)不同產(chǎn)地的牛膝種子進(jìn)行寄藏真菌檢測(cè)，同時(shí)選用農(nóng)作物種子常用的7種殺菌劑進(jìn)行種子消毒處理，旨在明確牛膝種子內(nèi)、外所攜帶的優(yōu)勢(shì)菌群并篩選合適的種子處理藥劑，為牛膝種子產(chǎn)區(qū)間安全調(diào)運(yùn)和實(shí)施種子預(yù)防保健處理防治牛膝種子真菌病害提供理論依據(jù)。1 材料與方法1.1    供試樣品 2005年收集的當(dāng)年產(chǎn)牛膝種子共3份，分別來自河南溫縣，河南武陟，北京中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所。1.2   

9、 供試殺菌劑 50%福美雙（thriam）WP，50%多菌靈（carbendazim）WP，70%土菌消（hymexazol）WP，70%代森錳鋅（mancozeb）WP，70%敵克松（fenaminosulf）WP，20%萎銹靈膠懸劑（carboxin）FS，35%阿普隆拌種劑（mentality）ES，均由中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)種衣劑研究發(fā)展中心提供。1.3 方法牛膝種子帶菌檢測(cè)：參照ISTA Handbook on Seed Health Testing和植病研究方法等書中有關(guān)的方法79。1.3.1 種子外部帶菌檢測(cè) 每份樣品隨機(jī)選取400粒種子，放入100 ml錐形瓶中，加入50 ml

10、無菌水充分振蕩，吸取懸浮液1 ml，以2000 rmin-1轉(zhuǎn)速離心10 min，棄上清液，再加入1 ml無菌水充分震蕩、浮載后吸取100 l加到直徑為9 cm的 PDA平板上，涂勻，每個(gè)處理4次重復(fù)。相同操作條件下設(shè)無菌水空白對(duì)照，25溫箱中黑暗條件下培養(yǎng)5 d后觀察，統(tǒng)計(jì)種子外部帶菌種類及其分離比例,計(jì)算孢子負(fù)荷量。孢子負(fù)荷量（孢子數(shù)/粒種子）=分離孢子總數(shù)    檢測(cè)種子總數(shù) 1.3.2 種子內(nèi)部帶菌檢測(cè) 將牛膝種子的穎殼與籽粒分開，用5%NaClO溶液浸泡穎殼5 min，籽粒2 min，無菌水沖洗3遍，將同一樣本的穎殼和籽粒分別均勻擺放在直徑為1

11、5 cm的PDA平板上，每皿擺放100粒，4次重復(fù)。25恒溫、黑暗條件下培養(yǎng)57 d，統(tǒng)計(jì)真菌種類、分離頻率和帶菌率。1.4 種子帶菌鑒定將分離到真菌分別進(jìn)行純化、鏡檢和轉(zhuǎn)管保存。根據(jù)真菌培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征，參考工具書進(jìn)行鑒定。1.5 藥劑消毒處理效果檢測(cè) 按照殺菌劑處理種子安全有效劑量選擇原則，對(duì)供試種子進(jìn)行藥劑消毒處理：50%福美雙WP按藥劑種子質(zhì)量比1125拌種；50%多菌靈WP和35%阿普隆拌種劑按藥種比1333拌種；70%土菌消WP按藥種比1182拌種；70%代森錳鋅WP按藥種比1200濕拌；70%敵克松WP按藥種比1118拌種；20%萎銹靈膠懸劑按藥種比172拌種，以未經(jīng)任何藥劑處理的種子作為對(duì)照。經(jīng)過處理的種子均勻擺放在直徑為15 cm的PDA平板上，每皿100粒，4次重復(fù)，25，12 h光照/黑暗交替條件下培養(yǎng)，37 d后觀察記錄。藥劑消毒處理效果（%）=對(duì)照樣品帶菌率藥劑處理樣品帶菌率    對(duì)照樣品帶菌率×100%2 結(jié)果2.1 種子外部帶菌檢測(cè)不同產(chǎn)地牛膝種子外部攜帶的真菌情況差異