動物源性食品中近百種常見抗生素的篩查和譜庫檢索確證.

1、動物源性食品中近百種常見抗生素的篩查和譜庫檢索確證、背景在現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中，牛肉，豬肉，雞肉和火雞等在飼養(yǎng)環(huán)節(jié)往往在飼料中使用大量抗生素來輔助預防和治療疾病。3內(nèi)酰胺類，大環(huán)內(nèi)酯類，磺胺類，四環(huán)素等抗生素，是畜牧飼養(yǎng)生產(chǎn)中不可缺少的一部分。然而，食品中抗生素的殘留 可能會對人類造成潛在的危害，長期攝入可能會產(chǎn)生抗藥性。許多國家已經(jīng)建立了 一系列有關(guān)這些抗生素在動物生產(chǎn)中使用、用量和停藥的法規(guī)。目前已有多種方法來進行抗生素殘留的測定，包括生物測定，免疫法，薄層層 析法等，而LC-MS/MS因為其較高的選擇性和靈敏度能幫助進行更好的檢測和確 證，所以得到更廣泛的應用。本文包含多類抗生素的篩選方

2、法，包括 &內(nèi)酰胺類，四環(huán)素，磺胺類，大環(huán) 內(nèi)酯類，氯霉素類，氟喹諾酮類，抗寄生蟲等。具體的化合物信息詳見化合物列 表。采用scheduled MRM? -IDA-EPI （增強子離子掃描）的技術(shù)路線來進行檢 測，同時得到MRM離子對的定量數(shù)據(jù)以及高靈敏度的二級質(zhì)譜譜圖。采用正離子和負離子兩種采集方法，以達到最高的靈敏度。其中正離子可同時進行76種抗生素的定量和篩查，負離子可同時進行 18種抗生素的定量和篩查。、目標化合物列表動物源性食品中近百種常見抗生素的篩查和譜庫檢索確證中文名稱英文通用名分子式2-巰基苯并咪唑2-mercaptobenzimidazole C 7H 6N 2S阿苯

3、達唑Albe ndazoleC 12H 15N 3O 2S 阿苯達唑胺砜 Albe ndazole Ami no Sulfo ne C 10H 13N 3O 2S 阿苯達唑砜 Albendazole Sulfone C 12H 15N 3O 4S阿苯達唑亞砜 AlbendazoleSulfoxide C 12H 15N 30 3S 阿莫西林 Amoxicillin C 16H 19N 30 5S 桿菌肽Bacitracin C 66H 103N 170 16S 卡巴氧 Carbadox C 11H 10N 40 4頭抱噻夫 CeftiofurC19H 17N 50 7S 3 金霉素 Chlor

4、tetracycline C 22H 23ClN 20 8 環(huán)丙沙星Ci pro?oxacin C 17H 18FN 30 3 克林霉素 Cli ndamyc in C 18H 33ClN 20 5S 達氟沙星Dan o?oxacin C 19H 20FN 30 3 癸氧喹酯 Decoqui nateC 24H 35NO 5 去乙烯環(huán)丙沙星 Desethylene Cipro?oxacin C 15H 16FN 30 3二 氟沙星 Di?oxacin C 21H 19F 2N 30 3二甲硝咪唑 Dimetridazole C 5H 7N 30 2 多西 環(huán)素 Doxycycline C 22

5、H 24N 20 8 依諾沙星 Enoxacin C 15H 17FN 40 3恩諾沙星Enro ?oxac inC 19H 22FN 3O 3紅霉素 Erythromycin C 37H 67NO 13 芬苯達唑 Fenbendazole C 15H 13N 30 2S 芬苯達唑砜 Fenben dazole Sulfo ne C 15H 13N 30 4醐苯達唑亞砜 Fen be ndazole Sulfoxide C 15H 13N 30 3S 氟苯尼考 Florfe nicol C 12H 14Cl 2FN0 4S 氟苯尼考胺 Florfe nicol Ami ne C 10H 14F

6、N0 3S 氟甲喹 Flumequi ne C 14H 12FN0 3 布洛芬 Ibuprofen C 13H 180 2交沙霉素 Josamycin C 42H 69NO 15酮洛芬 Ketoprofen C 16H 140 3 拉沙里菌素 Lasalocid C 34H 53NaO 林可霉素 Lincomycin C 18H 34N 20 6S 洛美沙星 Lome?oxacin C 17H 19F 2N 30 3 甲苯達唑 Mebendazole C 16H 13N 30 3甲硝唑 Metronidazole C 6H 9N 3O 3米諾環(huán)素 Minocyciine C 23H 27N 3

7、O 7 莫能菌素 Monensin C 36H 620 11 那拉霉素 Narasin C 43H 720 11 諾氟沙星 Nor?oxacin C 16H 18FN 30 3 新生霉素 Novobiocin C 31H 36N 20 11 氧氟沙星 O?oxacin C 18H 20FN 30 4 奧比沙星 Orbi?oxacin C 19H 20F 3N 30 3 惡喹酸 Oxolinic Acid C 13H 11N0 5 羥基保泰松 Oxyphenbutazone C 19H 20N 20 3±霉素 Oxytetracyciine C 22H 24N 20 9 保泰松 P h

8、e nylbutazo ne C 19H 20N 20 2雷托巴胺 Racto pami ne C 18H 23NO 3羅硝 唑 Ronidazole C 6H 8N 40 4沙拉沙星 Sara?oxacin C 20H 17F 2N 30 3螺旋霉素 Sp iramycin C 43H 74N 20 14 磺胺醋酰 Sulfacetamide C 8H 10N 20 3S磺胺氯達嗪Sulfachloro pyridazi ne C 10H 9ClN 40 2S 磺胺嘧啶 Sulfadiaz ine C 10H 10N 40 2S 磺胺二甲嘧啶 Sulfadimethoxine C 12H 1

9、4N 40 4S磺胺多辛 Sulfadoxine C 12H 14N 40 4S 磺胺脒 Sulfagua ni di ne C 7H 10N 40 2S 磺胺甲嘧啶Sulfameraz ineC 11H 12N 40 2S磺胺二甲嘧啶 Sulfamethazine C 12H 14N 40 2S磺胺甲二唑 Sulfamethiazole C 9H 10N 40 2S 2磺胺甲惡唑 Sulfamethoxazole C 10H 11N 30 3S磺胺甲氧嗪Sulfamethoxy pyridazi ne C 11H 12N 40 3S 磺胺 Sulfa nilamide C 6H 8N 20

10、2S 磺胺吡 啶 Sulfapyridine C 11H 11N 30 2S 磺胺喹惡啉 Sulfaquinoxaline C 14H 12N 40 2S 柳 氮磺胺吡啶 Sulfasalazine C 18H 14N 40 5S磺胺噻唑 Sulfathiazole C 9H 9N 30 2S 2磺胺異惡唑 Sul?soxazole C 11H 13N 30 3S四環(huán)素 T etracycline C 22H 24N 20 8 四 咪唑 T etramisole C 11H 12N 2S 噻菌靈 Thiabe ndazole C 10H 7N 3S 甲砜氯霉素Thiamphenicol C 1

11、2H 15Cl 2N0 5S 替米考星 Tilmicosin C 46H 80N 20 13 托滅酸 T olfenamic acid C 14H 12ClN0 2 三氯苯噠唑 Triclabendazole C 14H 9Cl 3N 20S泰樂菌素 T ylosinC 46H 77NO 172-喹喔啉羧酸 2-quinoxalinecarboxylic acid C 9H 6N 20 26-苯基- 2-硫脲嘧啶 6-phenyl-2-thiouracil C 10H 8N 20S 氨芐西林 Ampicillin C 16H 19N 304S 氯霉素 Chloram phen icol C 1

12、1H 12Cl 2N 20 5 氯唑西林 Cloxacilli n C 19H 20ClN 30 6S 雙氯酚酸 Diclofe nac C 14H 11Cl 2N0 2 安乃近 Di pyrone C 13H 17N 30 4S 乙 哚乙酸 Etodolac C 17H 21N0 3氟苯尼考 Florfe nicol C 12H 14Cl 2FN0 4S 氟尼克辛 Flu ni xi n C 14H 11F 3N 20 2拉沙里菌素Lasalocid C 34H 540 8萘普生Naproxen C 14H 140 3尼卡巴嗪Nicarbazin C 19H 18N 60 6 氯硝柳胺 Ni

13、closamide C 13H 8Cl 2N 20 4 青霉素 GPe ni cillin G C 16H 18N 20 4S 雷復尼特 Rafoxa nide C 19H 11Cl 2I 2N0 3 磺胺硝苯Sulfa nitran C 14H 13N 30 5S 甲砜氯霉素Thia mphenicolC 12H 15CI 2NO 5S動物源性食品中近百種常見抗生素的篩查和譜庫檢索確證三、樣品制備方法?牛腎/腎積液或血清樣品11.稱取1 g牛腎勻漿樣品，腎汁，或血清放入 50 mL FEP （氟化乙烯丙烯） 管。2.添加5 L內(nèi)標溶液。3.加入2 mL水和8 mL乙腈。4.使用旋渦混合器進行

14、混合，然后搖動5 min。5.離心5 min。6.將上清液倒出至一 50毫升試管，加入500 mg C18吸附劑。7.使用旋渦混合 器混合30秒。8.離心1 min。9.取5 mL上清液，濃縮至1 mL后，用水定容至1 mL。10.過濾（PVDF ,0.45 m）至進樣小瓶，待用。？牛奶21.稱10 g牛奶至一個干凈的50毫升試管。2.加入10 mL乙腈和10 iL內(nèi)標溶液（100 g/mL），劇烈震搖1分鐘。3.添加 QuEChERS 預處理填料 Q110 Packets3 (P/N 26213, Restek 劇烈震搖 1 分鐘。4. 5000轉(zhuǎn)離心5 min。5. 1mL上清液轉(zhuǎn)移到2

15、mL試管，加入150 mg硫酸鎂和50 mg C18 （特殊定 制，Restek），劇烈震搖1分鐘。6. 5000轉(zhuǎn)，離心5 min。7.將500 L上清轉(zhuǎn)移到一個干凈的1.5 mL離心管，40C下進行氮吹至微干,50 L甲醇復溶，渦旋，離心；8.再用450 L蒸餾水進行稀釋復溶；9.過濾（PVDF , 0.45 m）至進樣小瓶，待用？蜂蜜21.稱取蜂蜜5克和水5克到一個干凈的50毫升試管里，拌勻。2.可選步驟：添加200 L 5N氫氧化鈉（NaOH ）用來調(diào)節(jié)pH，后拌勻。 注：這一步將減少基體效應，并改善一些化合物的回收率（例如，氯唑西林，青霉 素G,沙拉沙星等堿性抗生素），然而，一些其他

16、化合物的回收率顯著降低（頭 抱噻呋，單諾沙星，二氟沙星，恩諾沙星，奧比沙星等酸性抗生素，并依此類 推）。3.加入10 mL的乙腈和10 L內(nèi)標溶液（100 g/mL），劇烈震搖1 min 。4.添加 QuEChERS 預前處理填料 Q110 Packets （P/N 26213, ResteK 劇烈震搖 1分鐘。5. 5000轉(zhuǎn)，離心5 min。6. 1 mL上清液轉(zhuǎn)移到2 mL試管，加入150 mg硫酸鎂和50 mg C18 （特殊定 制，Restek，劇烈震搖1分鐘。7. 5000轉(zhuǎn)，離心5 min。8.將500 L上清轉(zhuǎn)移到一個干凈的1.5 mL離心管，40C下進行氮吹至微干,50 L甲

17、醇復溶，渦旋，簡單離心；9.再用450 L蒸餾水進行稀釋復溶;10.過濾（PVDF , 0.45 m）至進樣小瓶，待用;四、色譜分離條件流動相：A :含0.1%甲酸的水（V/V ）溶液；B :含0.1%甲酸的乙腈（V/V ）溶液色譜柱：P he no me nex分析柱，3 m 110 ?, Gem ini C18 Colu mn, 50 2 mm（P/N 00B-4439-B0）Phenomenex保護柱，C18 4 >2 mm (P/N AJO-4286)含保護柱柱套(P/N KJO- 4282) Shimadzu Prominence系統(tǒng)：CBM-20A 系統(tǒng)控制器LC-20AD

18、X泵（帶有100 L半微量混合器） DGU-20A3在線脫氣機SIL-20AC自動進樣器CTO-20AC柱溫箱流動相梯度條件：步驟分析時間（min）Module Eve nt %B10 Pumps Pump B Co nc.220.30Pum ps Pump BCo nc.237.27Pumps Pump B Con c.8047.37Pum ps Pump B Con c.99510.9Pum ps Pump BCo nc.99611 Pumps Pump B Con c.2715.00Pum ps Pump B Cone.15.01Con trollerStop流速:0.5 mL/min柱

19、溫:40E進樣體積：10洗針模式：Before and after aspiration （甲醇作為洗針液）Rinse dip time （洗針時間）：3 s注：洗針可有效減少樣品殘留；五、質(zhì)譜檢測質(zhì)譜系統(tǒng)為AB SCIEX 4000 QTRAP?系統(tǒng)，Turbolon Spray?離子源 正離子分析模式源/氣體參數(shù)動物源性食品中近百種常見抗生素的篩查和譜庫檢索確證CUR: 25 psi IS: 5500 V TEM: 600 C GS1: 60 psi GS2: 60 psi lhe: On CAD: highScheduled MRM?設(shè)置方法：MRM檢測窗口時間：120 s目標掃描時間：

20、0.5s Q1單位分辨Q3單位分辨化合物MRM參數(shù)和保留時間分析物Q1 (m/z Q3 (m/z 保留時間(min )2-merca ptobe nzimidazole 151.2 93 3.12Albe ndazole266.1 234.1 5.30Albe ndazole Ami no Sulfo ne 240.1 133.1 1.83Albe ndazole Sulfo ne298.1 266.2 4.54Albe ndazole Sulfoxide 282.1 208.1 4.17Amoxicillin 366.1 349.1 1.00Bacitracin 712 669.6 4.64

21、Carbadox 263.1 231.1 3.93Ceftiofur524 241.2 5.54Chlorotetracycli ne 479.3 444 3.45Ci pro?oacin 332.2 314.2 2.79Cli ndamycin 425.4 126.1 3.85Da no?oxacin 358.2 340.2 2.93Decoqui nate418.3 344.4 8.47Desethyle ne Cip ro?oxaci n 306.2 288.1 2.61Di?oxacin 400.2 356.3 3.01Dimetridazole 142.1 96.1 1.89Doxy

22、cycli ne 445.2 428.3 3.99E noxacin 321.2 303.2 2.66Enro?oxacin 360.3 342.2 2.92Erythomycin 734.6 158.2 4.80Fe nbe ndazole 300.1268.1 6.32Fe nbe ndazole Sulfo ne 332.1 300.2 5.28Fe nbe ndazole Sulfoxide316.1159.24.97Florfe nicol Ami ne 248.1 230.2 0.33Flumequi ne 262.1 202.1 5.511b uprofen 207.1161.2

23、 7.47I ndomethacin 358.1 139.1 7.47Ipron idazole-OH 186.1 168.1 3.30Josamycin 828.7 109.1 5.38Ket oprofen 255.1 209.2 6.41Lasalocid 613.4 377.5 8.79Li neomycin 407.4 126.1 1.84Lome?oxacin 352.2 265.2 2.91Mebe ndazole 296.1 264.1 5.70Metro ni dazole 172.1 128.1 1.75Mi no cycli ne 458.2 441.3 2.10M on

24、en sin 693.4 675.7 8.51Naras in 787.5 531.6 8.61Nor?oxacin 320.2 276.2 2.69Novobiocin 613.2 189.2 8.30O?oxacin 362.2 318.2 2.62Orbi?oxaci n 396.2 352.3 2.99Oxoli nic acid 262.1 244 4.75Oxy phe nbutazo ne 325.2 204.2 6.24Oxytetracycli ne 461.2 426.1 2.85Phe nylbutaz one309.2 160.2 7.08Ract op ami ne

25、302.2 107 2.59Ro nidazole 201.1 140.1 2.01Sara?oxaci n386.3 368.1 3.08S piramycin 422.5 174.1 3.39Sulfacetamide 215.1 156.1 1.69Sulfachloro pyridazi ne 285 156.1 3.45Sulfadiazi ne 251.1 156 2.20Sulfadimethox ine311.1 156.2 4.51Sulfadoxi ne 311.2 156.2 3.76Sulfagua nidi ne 215 156.1 0.59Sulfameraz in

26、e 265.1 92.2 2.71Sulfamethaz ine 279.2 92.1 3.14Sulfamethizole271.2156.13.16動物源性食品中近百種常見抗生素的篩查和譜庫檢索確證Sulfamethoxazole 254.1 156.1 3.54Sulfamethoxy pyridazi ne 281.1 155.9 3.29Sulfa nilamide 173.1 92.1 0.66Sulfa pyridi ne 250.1 156.1 2.51Sulfaqui noloxali ne301.1 156.1 4.71Sulfasalazi ne 399.3 381.3

27、7.68Sulfathiazole 256.1 156.1 2.45Sul?soxazole 268.1 156.1 3.79T etracycli ne 445.2 410.1 2.72T etramisole 205.2178.2 1.0 仃hiabe ndazole 202.1 175.1 2.40Tilmicosin 435.6 695.7 3.95T olfe namic acid262.1 209.1 8.13Triclabe ndazole 359 344.1 7.92T ylosin916.7 174.3 4.91Sulfamethazi ne-d4283.1186.13.13

28、負離子分析模式 CUR: 25 psi IS: -4500 TEM: 600C GS1: 60 psi GS2: 60 psi Ihe:On CAD: High An alyteQ1 (m/z Q3 (m/z 保留時間(min )2-qui noxali necarboxylic acid 172.9 102 4.36 6-phen yl-2-thiouracil 203.1 58 4.09Amp icilli n 348 207 2.77 Chlora mp he nicol 321.1 152 4.25 Cloxacilli n 434.1 292.9 7.04Diclofe nac 293.9 250 7.43 Dipyrone 310 191.1 6.00 Etodolac 286.1 242.1 7.28Florfe nicol356.11853.59Flu nix in 295.1 191 6.90 Lasalocid 589.3 191.2 8.79 Nap roxen 229 170 6.56Nicarbaz