土壤養(yǎng)分及酶活性測試方法資料

1、硝態(tài)氮的測定：雙波長分光光度法測定土壤硝態(tài)氮，土壤肥料，2006 ( 1): 5052,涂常青，溫欣榮。原理：利用硝酸鹽和亞硝酸鹽在 203nm和230nm波長處有較強(qiáng)紫外吸收峰，利用雙波長系數(shù)倍數(shù)法的公式：.A =A 1 -kA '2選擇合適波長時(shí)，從而消除亞硝酸鹽、有機(jī)質(zhì)的影響。消除干擾后，硝酸鹽氮的含量與.爾呈線性關(guān)系，線性范圍為02.0 mg/L，由此建立了測定土壤硝態(tài)氮的新方法。硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)比色液：稱取0.7220 g與105C烘箱中烘干2h干燥冷卻后的KNO; 與小燒杯中，加入二次蒸餾水溶解，定量轉(zhuǎn)入 1000ml的容量瓶中，定容、搖勻, 即為10ug/ml的硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)液

2、。稱取該溶液 10.00 ml于100ml容量瓶中，定容、搖勻，即為10ug/ml的硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)比色溶液。亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)比色液：稱取 0.1232 g NaNO2于小燒杯中，加入二次蒸餾水，定量轉(zhuǎn)入250ml容量瓶中，定容、搖勻，即為100ug/ml亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)溶液。稱取該溶液10.00 ml于100ml容量瓶中，定容、搖勻，即為10ug/ ml亞硝酸鹽 氮標(biāo)準(zhǔn)比色液。實(shí)驗(yàn)方法：1、k系數(shù)的確定：分別準(zhǔn)確移取10ug/ml硝酸鹽氮使用液2.00 ml、10ug /ml亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)使用 液2.00 ml、土壤浸提液2.5 ml置于各自的25ml比色管中，用二次蒸餾水定容、 搖勻，用1cm的石

3、英比色皿，以二次蒸餾水作參比，在 UV -紫外可見分光光度 計(jì)上在190300 nm范圍內(nèi)掃描，從而確定土壤樣品、硝酸鹽氮的最大吸收波長 203nm，在230nm處吸收較弱，而亞硝酸鹽氮在210 nm處有最大吸收，在230 nm 吸收較弱。選取203nm、230 nm為測量波長和參比波長測定土壤中硝態(tài)氮，從 而可消除樣品中主要干擾組分亞硝酸鹽氮的干擾。據(jù)A203 - kA 230 = 0的公式計(jì)算，求得k =2.72。2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別去 10ug/ml 硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)比色液 0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50 ml置于25ml比色管中，各管加入二次蒸餾水至刻度

4、，搖勻，用UV-紫外可見分光光度計(jì)在203nm和230nm處，用1 cm石英比色皿測定吸光度。用A202.72A230 的計(jì)算方法求得校正吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為 y =0.5283x -0.0009r =0.9999( n =7)3、樣品測定：準(zhǔn)確稱取10g充分拌勻的鮮土壤，分別置于100 ml具塞三角瓶中，加入0.1 g CaSO4和50.00 ml二次蒸餾水，于振蕩器上振蕩 10min。放置10min后， 將懸液的上部清夜用于濾紙過濾。吸取濾液1.0020.00 ml置于25ml比色管中， 用水準(zhǔn)確稀釋至刻度，分別在 203 nm230 nm波長下測量吸光度。按下式計(jì)算 土壤中硝態(tài)氮含

5、量(ug/kg) : w(NO3 - N) = 25： D/m式中，為回歸方程算出的NO3 - N含量，ug/ml ;25為比色測定液總體積，ml ;D為稀釋倍數(shù)；m為鮮土壤樣品質(zhì)量，g。銨態(tài)氮的測定：2mol L4KCl浸提-靛酚藍(lán)比色法1、方法原理：用2mol L4KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤膠體上的NH4及水溶性NH。浸提 出來。土壤浸出液中的銨態(tài)氮在強(qiáng)堿性介質(zhì)中與次氯酸鹽和苯酚作用， 生成水溶 性燃染料靛酚藍(lán)，溶液的顏色很穩(wěn)定。在含氯 0.050.5 ug 范圍內(nèi)，吸光度 與銨態(tài)氮含量成正比，可用比色法測定。2、試劑:(1) 2mol L4KCl溶液：稱取149.1 g KCl溶于

6、水，稀釋至1 L ;(2) 苯酚溶液：稱取苯酚(C6H5OH，化學(xué)純)10g和硝基鐵氰化鉀 (Na2Fe(CNhNO2 0)100 mg稀釋至1L ,此試劑不穩(wěn)定，須貯于棕色瓶中, 在4C冰箱中保存；(3) 次氯酸鈉堿性溶液:稱取NaOH 10g、磷酸氫二鈉(Na2HPO4 7H2O )7.06 g、 磷酸鈉(NasPOq I2H2O ) 31.8 g 和 52.5 g LJ 次氯酸鈉(NaOCI，即含 5%t效 氯的漂白粉溶液)10ml溶于水，稀釋至1 L ,貯于棕色瓶中，在4°C冰箱中保存；(4) 掩蔽劑：將400g LJ酒石酸鉀鈉(KNaC4H4O6 4H2O )與100g丄-

7、1的EDTA二鈉鹽溶液等體積混合，每100 ml混合液中加入10mol LJ NaOH溶液0.5 ml ；(5) 2.50 ug ml銨態(tài)氮(NH4 -N )標(biāo)準(zhǔn)液態(tài):稱取干燥的(NH4)2SO40.4717 g 溶于水，洗入容量瓶后定容至1L，制備成銨態(tài)氮(N ) 100ug mF1的貯存溶液； 使用前將其加水稀釋40倍，即配制成含銨態(tài)氮(N ) 2.5 ug ml J的標(biāo)準(zhǔn)溶液備 用。3、分析步驟：(1) 浸提：稱取相當(dāng)于20.00 g干土的新鮮土樣(若是風(fēng)干土，過 10號(hào)篩)準(zhǔn) 確到0.01 g ,置于200ml三角瓶中，加入KCl溶液100ml，塞緊瓶塞，在振蕩 機(jī)上振蕩1h，取出靜置

8、，待土壤-氯化鉀懸濁液澄清后，吸取定量上層清液進(jìn)行 分析。如不能在24h進(jìn)行分析，用濾紙過濾懸濁液，將濾液儲(chǔ)存在冰箱中備用。(2) 比色：吸取土壤浸出液2ml10ml (含NH4 -N2ug2.5 ug )放入50ml 容量瓶中，用KCl溶液補(bǔ)充至10ml，然后加入苯酚溶液5ml和次氯酸鈉堿性溶 液5ml，搖勻。在20C左右的室溫下放置1 h后，加掩蔽劑1ml以溶解可能產(chǎn)生 的沉淀物，然后加水定容至刻度，用 1cm比色槽在625nm波長處進(jìn)行比色，讀 取吸光度。(3) 工作曲線：分別吸取 0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 ml NH / - N標(biāo)準(zhǔn)液于 50ml容量瓶中，各加10m

9、l氯化鉀溶液，同(2)比色。(4) 結(jié)果計(jì)算：土壤中 NH4 - N 含量(mg kg') = V tsm式中：，一顯色液銨態(tài)氮的質(zhì)量濃度(ug ml*)V 顯色液的體積（10ml）ts 分取倍數(shù)m 樣品質(zhì)量（g）脲酶測定（比色法）：（土壤微生物生態(tài)學(xué)及其實(shí)驗(yàn)技術(shù)）1、方法原理：脲酶廣泛存在于土壤中，它能酶促尿素分解成氨、二氧化碳和水。測定脲酶的方 法很多，包括比色法、擴(kuò)散法、電極法等，其中比色法最為常用，現(xiàn)介紹苯酚 - 次氯酸鈉比色法，該方法以尿素為基質(zhì)，根據(jù)酶促產(chǎn)物氨與苯酚 -次氯酸鈉作用（在堿性溶液中及在亞硝基鐵氰化鈉催化作用下）生成藍(lán)色的靛酚，來分析脲酶活性。2、試劑配制：（1

10、）pH 6.7檸檬酸鹽溶液：取368g檸檬酸于600ml蒸餾水中，另取295g KOH 溶于水，再將兩種溶液合并，用 1 mol / L NaOH將pH調(diào)至6.7，并用水稀釋至 2L 0（2）苯酚鈉溶液：稱取62.5 g苯酚溶于少量乙醇中，加 2 ml甲醇和18.5 ml丙 酮后用乙醇稀釋至100ml （A液），保存于冰箱中。稱取27g NaOH溶于100ml 水中（B液），保存于冰箱中。使用前，取 A、B兩液各20ml混合，并用蒸餾 水稀釋至100ml備用。（3） 次氯酸鈉溶液：用水稀釋制劑至活性氯的濃度為0.9 %，溶液穩(wěn)定。（4）10%尿素溶液：10g尿素溶于100ml水中。（5） N的

11、標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取 0.4717 g硫酸銨溶于水稀釋至1L ,則得1ml含0.1 mg N的標(biāo)液，再將此液稀釋至10倍制成氨工作液（0.01 ug/L ）.3、操作步驟：取5g風(fēng)干土置于50ml三角瓶中，加1 ml甲苯。15min后加10ml 10%尿素溶液和20ml pH =6.7檸檬酸鹽緩沖液。搖勻，37C恒溫箱中培養(yǎng)24h。過濾，取1ml 濾液注入50ml容量瓶中，然后按配制標(biāo)準(zhǔn)曲線顯色方法進(jìn)行測定。標(biāo)準(zhǔn)曲線配制：分別取 0、1、3、5、7、9、11、13ml氮工作液，移至50ml容 量瓶中，然后加蒸餾水至20ml，再加4ml苯酚鈉溶液和3ml次氯酸鈉溶液，隨 加隨搖。20min后顯色、

12、定容。1h內(nèi)在分光光度計(jì)上于波長578nm處比色，根 據(jù)吸光值與氮溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3、結(jié)果計(jì)算：以24h后1 g 土壤中NH3 - N的質(zhì)量（mg ）表示脲酶活性（Ure）:Ure = a V n / m式中：a為由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的NH3-N濃度（mg/ml ）;V為顯色液體積（50 ml ）；n為分取倍數(shù)；m為烘干土質(zhì)量（g ）0磷酸酶測定（磷酸苯二鈉比色法）：（土壤微生物生態(tài)學(xué)及其實(shí)驗(yàn)技術(shù)）1、方法原理：測定磷酸酶主要根據(jù)酶促作用生成的有機(jī)基團(tuán)量或無機(jī)磷量計(jì)算磷酸酶活性。前一種通稱為有機(jī)基團(tuán)含量法，是目前較為常用的測定磷酸酶的方法， 后一種稱為 無機(jī)磷含量法。研究證明，磷酸酶有 3種最

13、適pH值：45、67和810，因 此測定酸性、中性和堿性反應(yīng)土壤的磷酸酶，要提供相應(yīng)的pH緩沖液才能測出該土壤的磷酸酶最大活性。測定磷酸酶常采用的pH緩沖體系有乙酸鹽緩沖液（pH值=5.05.4 ）、檸檬酸鹽緩沖液（pH值=7.0 ）、三羥甲基氨基甲烷緩沖液（pH值=7.08.5、和硼酸緩沖液（pH值=910） o磷酸酶測定時(shí)常用的基質(zhì) 有磷酸苯二鈉、酚酞磷酸鈉、甘油磷酸鈉、:或1 -萘酚磷酸鈉、1 -硝基苯磷酸 鈉等?，F(xiàn)介紹磷酸苯二鈉比色法。2、試劑配制：（1）甲苯（2）磷酸苯二鈉：稱取6.75 g磷酸苯二鈉（CeHsPOqNa? 2H2O ），用緩沖液稀 釋至1 L （1 ml含25 mg

14、酚）。（3）pH 9.0硼酸鹽緩沖液：A、 0.05 M硼砂溶液：19.07 g硼砂（NazBqO? 10出0）溶于1000ml蒸餾水中；B、 0.2 M硼酸溶液：12.37 g硼酸（H3BO3）溶于1000ml蒸餾水中；硼酸鹽緩沖液（pH 9.0）： 80ml A+20ml B混勻即得。（4）緩沖溶液配制：a、酸性磷酸酶：醋酸鹽緩沖液（pH 5.0）A、0.2 M醋酸鈉溶液：16.4 g無水醋酸鈉（C2H3O2Na ）溶于1000ml蒸餾水中或是27.2 g三水醋酸鈉（CzHsOzNa 3H2。）溶于1000ml蒸餾水中。B、 0.2 M醋酸溶液：11.55 ml醋酸定容于1000ml。7m

15、l A +3ml B混合即得。b、堿性磷酸酶：硼酸鹽緩沖液（pH 10.0）A、硼砂液：19.072 g硼砂溶于1000ml蒸餾水中。B、NaOH溶液：4g NaOH溶于1000ml蒸餾水中。50ml A +43ml B加水稀釋至200ml，混合即得。c、中性磷酸酶：檸檬酸鹽緩沖液（pH 7.0 ）A、0.1 M檸檬酸溶液：21.01 g檸檬酸H2O （或是19.21 g C6H8O7）溶于1000ml 蒸餾水中。B、 0.2 M磷酸氫二鈉：35.61 g磷酸氫二鈉 2H2O （或是53.63 g磷酸氫二鈉 7H2O或是71.7 g磷酸氫二鈉12H2O ）溶于1000ml蒸餾水中。3.63 m

16、l A +16.37 ml B 混合即得。（5）2.5 %鐵氰化鉀：12.5 g鐵氰化鉀溶于500ml水。（6）0.5 %的4-氨基安替吡啉溶液：2.5 g4-氨基安替吡啉溶于500ml水中。（7）酚原液：2g酚用蒸餾水定容至1 L （2mg/ml ），溶液在暗色中穩(wěn)定（8）酚工作液：取2.5 ml原液稀釋至100ml （0.05 mg酚/ml ）。3、操作步驟：稱取5g風(fēng)干土于50ml三角瓶中，加1 ml甲苯，輕搖15min.再加入20ml磷酸苯二鈉（酸性磷酸酶用PH5.0的醋酸緩沖液，中性磷酸酶用PH 7.0的檸檬酸鹽 緩沖液，堿性磷酸酶用PH 10.0的硼酸鹽緩沖液），仔細(xì)搖勻后放入恒溫

17、箱，在 37°C下培養(yǎng)24h。用致密濾紙過濾，取1 ml濾液于100ml容量瓶中，加5ml PH 10.0硼酸鹽緩沖液， 再加入3ml 2.5 %的鐵氰化鉀和3ml 0.5 %的4-氨基安替吡啉溶液，搖勻，這時(shí) 溶液呈粉紅色，然后加水定容。待顏色穩(wěn)定時(shí)（2030min ），在波長570nm處 測定各樣品的吸光度。土壤的磷酸酶活性根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出酚的含量（為了消除土壤引起的誤差，每一土壤需做無基質(zhì)的對(duì)照，整個(gè)試驗(yàn)需做無土壤對(duì)照）。磷酸酶活性以每克土壤的酚毫克數(shù)表示（若用P的毫克數(shù)表示，結(jié)果需乘0.32 ;若用P2O5的毫克數(shù)，結(jié)果需乘2.29 ）。標(biāo)準(zhǔn)曲線配制：分別向100ml容量瓶中

18、注入0、1、3、5、7、9、11ml工作液并 顯色定容（分別相當(dāng)于 0.05、0.15、0.25、0.35、0.45、0.55 mg酚），待顏色 穩(wěn)定后，比色繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。4、結(jié)果計(jì)算：以24h后1 g 土壤中釋出的酚的質(zhì)量（mg ）表示磷酸酶活性Pho。Pho=a V n/m式中：a為由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的酚濃度（mg/ml ）；V為顯色液體積（50 ml ）；n為分取倍數(shù)；m為烘干土質(zhì)量（g）。過氧化氫酶的測定（容量法）：1、試劑配制：（1）0.3 % H2O2溶液：按 1:100 將 30% H2O2用水稀釋。(2) 3g/L硫酸：168ml濃HSO4定容于2L容量瓶。(3) 0.1 g/L高

19、錳酸鉀(1/5 KMnO 4)溶液：稱取化學(xué)純高錳酸鉀 3.161 g溶于 1L無CO2蒸餾水中，貯于棕色瓶中備用。(4) 草酸鈉(標(biāo)定1/5 KMn。4)：105110C烘至恒重，稱取0.2 g (準(zhǔn)至0.0001 g ) 溶于100ml (8+92)硫酸溶液中。2、操作步驟：取2g風(fēng)干土，置于100ml三角瓶中，并注入40ml蒸餾水和5ml 0.3 % H2O2溶 液(同時(shí)設(shè)置無土對(duì)照)。振蕩20min后，加入5ml 3g/ L H2SO4，以穩(wěn)定未分 解的H2O2，用慢速濾紙過濾。吸取25ml濾液，用0.1 g/L高錳酸鉀滴定至淡粉 紅色終點(diǎn)。3、結(jié)果計(jì)算：M = M -V2) T/gM

20、 :活性值；V :樣品消耗的0.1 g/L高錳酸鉀溶液的ml數(shù)；V :對(duì)照消耗的0.1 g/L高錳酸鉀溶液的ml數(shù)；T : 0.1 g/L高錳酸鉀滴定校正值；g :樣品重。用于滴定土壤濾液所消耗的高錳酸鉀量(毫升數(shù))為 B，用于滴定25ml原始的 過氧化氫混合液所消耗的高錳酸鉀量(毫升數(shù))為 A，(A-B) T即為過氧化氫 酶活性，以20min后1g 土壤的0.1 g/L高錳酸鉀的毫升數(shù)表示。式中T為高錳 酸鉀滴定度的校正值(就是最后換算成每克，所以還要測土壤含水量) 。高錳酸鉀溶液標(biāo)定：用配制好的高錳酸鉀溶液(c(KMnO4)=0.1 mol/L )滴定基準(zhǔn)草酸鈉溶液，近終 點(diǎn)時(shí)加熱至65E

21、，繼續(xù)滴定至溶液呈粉紅色保持 30s，同時(shí)做空白試驗(yàn)。高錳酸鉀溶液標(biāo)準(zhǔn)濃度計(jì)算:c(1/5KMnO4)=m/(VV2) 0.06700式中：c(1 /5KMnO4)高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)液之物質(zhì)的量濃度，mol /L ；m 草酸鈉之質(zhì)量，g ；y高錳酸鉀的用量，ml ；V2 空白試驗(yàn)用高錳酸鉀的用量，ml ；0.06700 與1.00 ml高錳酸鉀=0.1 mol/L相當(dāng)?shù)囊钥吮硎镜牟菟?鈉的質(zhì)量。硝酸還原酶活性的測定：生態(tài)學(xué)常用試驗(yàn)研究方法與技術(shù)，土壤酶及其研 究方法1、方法原理：在硝酸還原酶和亞硝酸還原酶的作用下，土壤中硝態(tài)氮可還原成氨，測定土壤中 這些酶的活性可了解土壤氮素轉(zhuǎn)化中脫氮作用的強(qiáng)度。

22、另外，硝酸還原酶還參與 土壤中鐵的還原作用。測定土壤硝酸還原酶活性的原理是：硝酸鹽在硝酸還原酶、亞硝酸還原酶和羥基 還原酶的催化作用下轉(zhuǎn)化為氨，反應(yīng)前為硝態(tài)氮的變化反映出土壤硝酸還原酶的 活性，硝態(tài)氮的變化可用酚二磺酸比色法測定。2、儀器設(shè)備：分光光度計(jì)、恒溫培養(yǎng)箱、100ml三角瓶、50ml容量瓶、瓷蒸發(fā)皿、水浴(100C),3、試劑配制：(1) 硝酸鉀溶液:(KNO3) 1g/100ml : 10.0 g分析純KNO3溶于去離子水中 稀釋至1 L ;(2) 葡萄糖溶液XC6H12O6)=1g/100ml : 10.0 g分析純葡萄糖溶于去離子水 中稀釋至1 L ;(3) 碳酸鈣(CaCO3

23、)準(zhǔn)備適量；(4) 鋁鉀磯(AlK (SO4)飽和溶液，準(zhǔn)備適量；(5) 酚二磺酸溶液：取3g重蒸酚與20.1 ml濃硫酸混合在沸水浴上回流加熱6h ；(6) NaOH溶液；:(NaOH ) = 10g/100ml : 50g分析純NaOH溶于去離子水中 并稀釋至500 ml ；(7) 硝酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液MKNO3) =0.1mg/ml : 16.3025 g重結(jié)晶KNOa溶于去離子水中并定容至1 L，此溶液濃度為10g/100ml，使用前將其稀釋至0.1 mg/ml。4、操作步驟：取1.00 g新鮮土壤(<2 mm )于100 ml減壓三角瓶中，加20mg CaCO3和1ml KNO3溶液

24、，混勻后加1ml葡萄糖溶液，抽氣3min，輕搖三角瓶，置于30C 恒溫箱中培養(yǎng)24h，培養(yǎng)結(jié)束后加50ml去離子水和鋁鉀磯溶液，混勻后過濾。取20ml濾液于瓷蒸發(fā)皿上蒸干，加 1ml酚二磺酸溶液溶解處理10min，再加15ml去離子水，用10% NaOH調(diào)至微黃色，最后轉(zhuǎn)移至 50 ml容量瓶中，定容后于400500nm處比色。采用于180C加熱3h滅菌的土壤作對(duì)照。標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：吸取50.00 ml KNO3標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1 mg/ml )于瓷蒸發(fā)皿中，同 上在沸水浴上蒸干，加入 2ml酚二磺酸溶解處理 10min，加去離子水定容至50ml，此時(shí)溶液中NO3 -N的含量為0.01 mg/ml

25、.吸取此溶液540ml于50ml容量瓶中，用10% NaOH調(diào)至微黃色，定容后在分光光度計(jì)上于 400500nm處 比色。5、結(jié)果計(jì)算：土壤硝酸還原酶活性mgNO3f-N/(g 24h) = c V f /dvet式中：c為樣品溶液中NO3_-N， mg/ml ;V為待測液體積，取50 ml ;f為分取倍數(shù)；dvet為烘干土壤質(zhì)量，g。土壤速效磷的測定 0.5 molNaHCOs法1、方法原理：石灰性土壤由于大量游離碳酸鈣存在， 不能用酸溶液來提取有效磷。一般用碳酸 鹽的堿溶液。由于碳酸根的同離子效應(yīng)，碳酸鹽的堿溶液降低碳酸鈣的溶解度， 也就降低了溶液中鈣的濃度，這樣就有利于磷酸鈣鹽的提取。同

26、時(shí)由于碳酸鹽的 堿溶液，也降低了鋁和鐵離子的活性，有利于磷酸鋁和磷酸鐵的提取。此外，碳 酸氫鈉堿溶液中存在著0H 一、HCO3 一、C03?一等陰離子，有利于吸附態(tài)磷的置換， 因此NaHCO3不僅適用石灰性土壤，也適應(yīng)于中性和酸性土壤中速效磷的提取。待測液中的磷用鉬銻抗試劑顯色，進(jìn)行比色測定。2、主要儀器：往復(fù)振蕩機(jī)、分光光度計(jì)或比色計(jì)。3、試劑：（1）0.5 mol L浸提液溶解 NaHCO3 42.0 g 于 800ml 水中，以 0.5 mol LJ NaOH溶液調(diào)節(jié)浸提液的pH至8.5。此溶液曝于空氣中可因失去 CO2而使pH增高，可 于液面加一層礦物油保存之。此溶液貯存于塑料瓶中比在

27、玻璃瓶中容易保存， 若 貯存超過1個(gè)月，應(yīng)檢查pH是否改變。（2）無磷活性炭：活性炭常含有磷，應(yīng)做空白試驗(yàn)，檢驗(yàn)有無磷存在。如含磷較多，須先用2 mol L4 HCl浸泡過夜，用蒸餾水沖洗多次后，在用 0.5 mol LJNaHCO3浸泡過夜，在平瓷漏斗上抽氣過濾，每次用少量蒸餾水淋洗 多次，并檢查到無磷為止。如含磷較少，則直接用NaHCOs處理即可。（3）鉬銻抗試劑：A、5g L4酒石酸氧銻鉀溶液：取酒石酸氧銻鉀K（SbO）C4H4O60.5 g,溶解于 100ml水中。B、鉬酸銨-硫酸溶液：稱取鉬酸銨（NH4）6MO7O24 4H2O10g，溶于450ml水 中，緩慢地加入153ml濃硫酸

28、，邊加邊攪。再將上述A溶液加入到B溶液中，最后加水至1L。充分搖勻，貯于棕色瓶中， 此為鉬銻混合液。臨用前（當(dāng)天），稱取左旋抗壞血酸（。6出。5，化學(xué)純）1.5 g，溶于100ml鉬銻混合液中，混勻，此即為鉬銻抗試劑。有效期24小時(shí)，如藏于冰箱中則有效期較長。此試劑中H2SO4為5.5 mol（H ,鉬酸銨為10g，酒石酸氧銻鉀為0.5 g LJ，抗壞血酸為15g LJ。（4）磷標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取在105C烘箱中烘干的磷酸二氫鉀（KH2PO4，分析 純）0.2195g，溶解在400ml水中，加濃硫酸5ml （加H 2SO4防長霉菌，可使溶 于長期保存），轉(zhuǎn)入1 L容量瓶中，加水至刻度。此溶液為

29、50ug ml J P標(biāo)準(zhǔn)溶液。 吸取上述磷標(biāo)準(zhǔn)溶液25 ml，稀釋至250ml，即為5ug mlJ P標(biāo)準(zhǔn)溶液（此溶液 不宜久存）。4、操作步驟：稱取通過20目篩子的風(fēng)干土樣2.5 g （精確到0.001 g ）于150ml三角瓶（或大 試管）中，加入0.5 mol LJ NaHCOs溶液50ml，再加一勺無磷活性炭，塞緊瓶 塞，在振蕩機(jī)上振蕩30min，立即用無磷濾紙過濾，濾液承接于100ml三角瓶中，吸取濾液10 ml （含磷量高時(shí)吸取2.55.0 ml，同時(shí)應(yīng)補(bǔ)加 0.5 molNaHCOs溶液至10ml ）于150ml三角瓶中，再用滴定管準(zhǔn)確加入蒸餾水35ml，然后移液管加入鉬銻抗試

30、劑 5ml，搖勻，放置30min后，用880nm 或700nm波長進(jìn)行比色。以空白液的吸收值為 0,讀出待測液的吸收值（A ）。 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：分別準(zhǔn)確吸取5ug ml4 P磷標(biāo)準(zhǔn)溶液1、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml于150ml 三角瓶中，再加入 0.5 mol LJ NaHCO3 10ml，準(zhǔn)確加水使各瓶的總體積達(dá)到 45ml，搖勻；最后加入鉬銻抗試劑 5ml，混勻顯色。同待測液一樣進(jìn)行比色， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。最后溶液中磷的濃度分別為0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 ug ml P。5、結(jié)果計(jì)算：土壤中有效磷（P）含量（mg kg'） = ： V 3 ts 1

31、000m 103 k式中：一從工作曲線上查得P的質(zhì)量濃度，ugml，；V 顯色時(shí)定容體積，ml ;ts 為分取倍數(shù)（即浸提液總體積與顯色對(duì)吸取浸提液體積之比）m 風(fēng)干土質(zhì)量，mg ;k將風(fēng)干土換算成烘干土質(zhì)量的系數(shù);103 將ug換算成mg ；1000換算成每kg含P量土壤速效磷mg kg P 等級(jí)<5低HOAc510中>10咼土壤速效鉀的測定 一一NH4OAC浸提，火焰光度法1、方法原理：以NH4OAC作為浸提劑與土壤膠體上陽離子起交換作用如下:HMg土壤+n NH4OAc =+(n-6) NH4OAc+HOAc +Ca丿NH4KNH4Ca(OAc)2 + Mg (OAc)2 +

32、 KOAcNH4土壤NH4OAC浸出液常采用火焰光度計(jì)直接測定。為了抵消NH4OAC的干擾影響，標(biāo)準(zhǔn)鉀溶液也需要用1 mol L4 NH4OAc配制?；鹧婀舛确ǖ幕驹怼．?dāng)樣品溶液噴成霧狀以氣 -液溶膠形式進(jìn)入火焰后，溶 劑蒸發(fā)掉而留下氣-固溶膠中的固體顆粒在火焰中被熔化、蒸發(fā)為氣體分子，繼 續(xù)加熱即又分解為中性原子（基態(tài)），更進(jìn)一步供給處于基態(tài)原子以足夠能量， 即可使基態(tài)原子的一個(gè)外層電子移至更高的能級(jí)（激發(fā)態(tài)），當(dāng)這種電子回到低能級(jí)時(shí)，即有特定波長的光發(fā)射出來，成為該元素的特征之一。例如，鉀原子線 波長是766.4 nm、769.8 nm ;鈉原子線波長是589 nm。用單色器或干涉型濾

33、光 片把元素所發(fā)射的特定波長的光從其余輻射譜線中分離出來，直接照射到光電池或光電管上，把光能變?yōu)楣怆娏鳎儆蓹z流計(jì)量出電流的強(qiáng)度。用火焰光度法進(jìn) 行定量分析時(shí)，若激發(fā)的條件（可燃?xì)怏w和壓縮氣體的供給速度，樣品溶液的流速，溶液中其他物質(zhì)的含量等）保持一定，則光電流的強(qiáng)度與被測元素的濃度成 正比。即可用下式表示之，即I二acb，由于用火焰作為激發(fā)光源時(shí)較為穩(wěn)定，式 中a是個(gè)常數(shù)，當(dāng)濃度很低時(shí)，自吸收現(xiàn)象可忽略不計(jì)，此時(shí)b=1，于是譜線強(qiáng)度與試樣中欲測元素的濃度成正比關(guān)系：I二ac。把測得的強(qiáng)度與一種標(biāo)準(zhǔn)或一 系列標(biāo)準(zhǔn)的強(qiáng)度比較，即可直接確定待測元素的濃度而計(jì)算出未知溶液含鉀量。2、主要儀器：火焰光

34、度計(jì)、往返式振蕩機(jī)3、試劑：（1）1 mol L中性 NH4OAC（ pH 7.0 ）溶液。稱取化學(xué)純 CH3COONH477.09 g 加水稀釋，定容至近1 L。用HOAc或NH4OH調(diào)至pH 7.0，然后稀釋至1 L。具 體方法如下：取出1mol LJ NH4OAC溶液50ml，用溴百里酚藍(lán)作指示劑，以 1:1 NH4OH或稀HOAc調(diào)至綠色即為pH 7.0 （也可以在酸度計(jì)上調(diào)節(jié)）。根據(jù)50 ml所有NH4OH或HOAc的毫升數(shù)，算出所配溶液大概需要量，最后調(diào)至pH 7.0。（2） 鉀的標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。稱取 KCI （二級(jí)，110C烘干2h ） 0.1907 g溶于1mol LNHqOA

35、c溶液中，定容至1L，即為含100ug mlK的NH4OAC溶液。 同時(shí)分別準(zhǔn)確吸取此 100ug ml JK 標(biāo)準(zhǔn)液 0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、40.0 ml 放入100 ml容量瓶中，用1mol L4 NH4OAc溶液定容，即得0、2.5、5、10、 15、20、40ug ml 4K標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。4、操作步驟：稱取通過1 mm篩孔的風(fēng)干土 5.00 g于100 ml三角瓶或大試管中，加入1 mol L 中性NH4OAc溶液50ml，塞緊橡皮塞，振蕩30min ，用干的普通定性濾紙過濾。 濾液盛于小三角瓶中，同鉀標(biāo)準(zhǔn)系列溶液一起在火焰光度計(jì)上測定。記錄其檢流 計(jì)上的讀

36、數(shù)，然后從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得其濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：將配制的鉀標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，以濃度最大的一個(gè)定到火焰光度計(jì) 上檢流計(jì)為滿度（100）然后從稀到濃依序進(jìn)行測定，記錄檢流計(jì)的讀數(shù)。以檢 流計(jì)讀數(shù)為縱坐標(biāo)，鉀（K ）的濃度ugmlJ為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5、結(jié)果計(jì)算：土壤速效鉀（mg kg J,K）=待測液（ug ml，K） Vm式中：V 加入浸提劑ml數(shù)；m 烘干土樣品的質(zhì)量，g。1 .溫度是影響緩控釋肥料養(yǎng)分釋放的主要因素。對(duì)于熱塑性樹 脂包膜尿素、熱塑性樹脂包膜復(fù)合肥、熱固性樹脂包膜復(fù)合肥、硫包 衣尿素、異丁叉二脲來說，溫度越高，養(yǎng)分釋放速率就越快，釋放期 就相對(duì)越短。聚合物包膜控釋肥在水中的釋

37、放曲線多為“ S”型，SCU為“破裂式釋放”，IBDU的釋放曲線呈倒“ L”型。在不同培養(yǎng)溫度 條件下氮素釋放率與時(shí)間的關(guān)系可用一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程N(yùn)t二No(1-e-kt)、Elovich方程N(yùn)t二a+blnt和拋物線方程N(yùn)t二a+bt0.5表征，在25C和40C 時(shí)，以一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程擬合效果最好。 定量描述氮素養(yǎng)分釋放的動(dòng)力 學(xué)方程中以一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程更具有實(shí)效性。聚合物包膜復(fù)合肥的養(yǎng)分 釋放規(guī)律為氮素釋放速率最快，其次是鉀、磷素釋放速率較慢。2. 包膜控釋肥料的養(yǎng)分釋放是由包膜內(nèi)外水蒸汽壓差引起的，其釋放速率常數(shù)k隨著水蒸汽壓差的增大而增大。蒸汽壓差越大，養(yǎng) 分釋放率越大，反之越小。在同一水蒸汽

38、壓下，包膜肥料的養(yǎng)分釋放 率隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長而增大；相同的培養(yǎng)時(shí)間，養(yǎng)分累積釋放率表 現(xiàn)為H2O>KH2PO4飽和溶液>KCl飽和溶液。包膜控釋肥料膜內(nèi)外水 蒸汽壓差是控制養(yǎng)分釋放速率快慢的根本因素。3. 土壤含水量對(duì)緩控釋肥料養(yǎng)分釋放速率有較大的影響。當(dāng)土壤含水量在田間持水量之內(nèi)，隨著土壤含水量的增加，養(yǎng)分釋放加快。 包膜尿素在不同土壤含水量下擬合曲線的相關(guān)系數(shù)在0.97400.9772之間，標(biāo)準(zhǔn)誤在0.00150.0022之間，達(dá)極顯著水平(p =0.0001)。對(duì) 于包膜復(fù)合肥來說，供試樣品CRF1和CRF2在各培養(yǎng)時(shí)期內(nèi)氮素釋 放率均隨著土壤含水量的增大而增大。對(duì)于硫包衣尿素來說，SCU在土