血脂康對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

1、血脂康對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用【摘要】 目的 探討血脂康對(duì)大鼠急性心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法 健康SD大鼠20只，隨機(jī)分為缺血再灌注組(MIR組)及血脂康組。血脂康組行心肌缺血再灌注處理前每天每只大鼠灌喂血脂康膠囊0.09 g/kg，連續(xù)7 d，MIR組灌胃等量生理鹽水;然后兩組結(jié)扎冠狀【摘要】 目的 探討血脂康對(duì)大鼠急性心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法 健康SD大鼠20只，隨機(jī)分為缺血再灌注組(MIR組)及血脂康組。血脂康組行心肌缺血再灌注處理前每天每只大鼠灌喂血脂康膠囊0.09 g/kg，連續(xù)7 d，MIR組灌胃等量生理鹽水;然后兩組結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，局部缺血30

2、min，后行120 min血液再灌注。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前伊文藍(lán)、四氮唑藍(lán)染色，測(cè)定梗死心肌的面積;腹主動(dòng)脈取血，測(cè)定肌酸激酶同工酶(CKMB)、肌紅蛋白(MYO)及肌鈣蛋白I(cTnI)的含量，同時(shí)檢測(cè)血清白細(xì)胞介素18(IL18)、白細(xì)胞介素10(IL10)、C反應(yīng)蛋白(CRP)的含量。結(jié)果 與MIR組相比，血脂康組心肌梗死面積明顯減小，CKMB、MYO、cTnI、IL18、CRP水平明顯降低，IL10水平顯著增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.5112.06,P0.05)。結(jié)論 血脂康通過(guò)減輕炎癥反應(yīng)降低急性心肌缺血再灌注損傷大鼠的心肌梗死面積，對(duì)缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。 【關(guān)鍵詞】 心肌;再灌

3、注損傷;炎癥;大鼠ABSTRACT Objective To investigate the protection of Xuezhikang capsules in rats with acute myocardial ischemial reperfusion injury (AMIRI). Methods Twenty healthy SD rats were randomly divided into two groups: myocardial ischemia reperfusion group (MIR group) and Xuezhikang group: the rats

4、in Xuezhikang group were treated with Xuezhikang (0.09 g/kg, gastric gavage) and those in MIR group were treated with the same amount of normal saline, for seven days. The rats of the two groups were subjected to 30 minutes of ischemia by ligating the left anterior descending branches and 120 minute

5、s of reperfusion. Before completion of the experiment, the infarct area were assessed after dyeing with Evans blue and triphenyltetrazolium chloride. Blood samples were taken from the abdominal aorta, and MYO, CKMB, cTnI, IL10, IL18 and CRP were detected. Results Compared with MIR group, infarct are

6、a and the levels of serum MYO,CKMB,cTnI, IL18 and CRP in Xuezhikang group decreased and the level of IL10 increased significantly (t=2.51-12.06,P0.05). Conclusion The protection of Xuezhikang capsulesagainst ischemial reperfusion injury of myocardium in rats is by lessening inflammatory reaction, de

7、creasing the area of myocardial infarction.KEY WORDS myocardium; ischemiareperfusion injury; inflammations; rats組織血液灌注量下降可導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生缺血性損傷，盡早恢復(fù)組織血液灌注是減輕缺血性損傷的根本措施。但隨著溶栓、動(dòng)脈旁路移植術(shù)、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈干預(yù)治療、器官移植等方法的應(yīng)用，組織獲取血供的同時(shí)卻出現(xiàn)再灌注損傷。研究表明，這與氧自由基生成增多、鈣超載、心肌纖維能量代謝障礙、血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)功能紊亂、一氧化氮(NO)合成減少、中性粒細(xì)胞被激活、引發(fā)炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡等過(guò)程密切相關(guān)1

8、。血脂康是從特制的中藥紅曲中提煉精制而成的，主要成分是他汀類2，能夠使膽固醇合成下降，臨床多用于高膽固醇血癥的治療。近期研究結(jié)果顯示，他汀類藥物有改善急性心肌缺血再灌注損傷的作用，其作用主要是通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)實(shí)現(xiàn)的3。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察血脂康對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，為臨床治療提供依據(jù)。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。1 對(duì)象與方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組普通級(jí)健康SD大鼠40只，雌雄各半,體質(zhì)量(207.514.8)g，購(gòu)自青島市動(dòng)物檢疫所。所有大鼠實(shí)驗(yàn)前均在25 恒溫環(huán)境中飼養(yǎng)，充足供應(yīng)飼料和飲水。隨機(jī)分為缺血再灌注組(MIR組)及血脂康組。1.2 主要儀器及試劑生物功能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟科技有限工

9、程公司生產(chǎn))，HX300動(dòng)物呼吸機(jī)(北京亞泰科隆實(shí)驗(yàn)科技開發(fā)中心)，酶標(biāo)儀(美國(guó)MD公司)，伊文藍(lán)、四氮唑藍(lán)(NBT)(上海源葉生物科技有限公司生產(chǎn))，白細(xì)胞介素18(IL18)、白細(xì)胞介素10(IL10)(Adlittteram Diagnostic Laboratories 生產(chǎn))，C反應(yīng)蛋白(CRP)試劑盒(上海源葉生物科技有限公司)。1.3 兩組動(dòng)物處理及缺血再灌注模型的建立血脂康組行心肌缺血再灌注處理前每天每只大鼠灌喂血脂康(北京大學(xué)維信生物科技有限公司生產(chǎn))0.09 g/kg，MIR組大鼠灌喂等量生理鹽水，均連續(xù)7 d。然后，兩組建立缺血再灌注模型，具體方法見文獻(xiàn)4。以心電圖J點(diǎn)抬

10、高與高聳T融合呈弓背向上的單相曲線及心肌酶增高為造模成功標(biāo)志。1.4 檢測(cè)指標(biāo)1.4.1 心肌酶的測(cè)定 再灌注后，打開腹腔從腹主動(dòng)脈取血35 mL，放置12 h，然后2 000 r/min離心15 min，提取上清液，檢測(cè)肌酸激酶同工酶(CKMB)、肌紅蛋白(MYO)和肌鈣蛋白I(cTnI)的水平。1.4.2 心肌壞死面積的測(cè)定 實(shí)驗(yàn)結(jié)束前結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈，以0.1 g/L的伊文藍(lán)注入左心室內(nèi)，取出心臟，用緩沖液沖洗，冷凍后將其橫斷面切成厚1 mm的切片，0.25 mmol/L的NBT染色10 min。測(cè)定伊文藍(lán)未染區(qū)心肌組織質(zhì)量，代表心肌缺血危險(xiǎn)區(qū)質(zhì)量;同時(shí)測(cè)定NBT區(qū)心肌組織質(zhì)量，代表梗死區(qū)

11、質(zhì)量。以梗死區(qū)心肌與心肌缺血危險(xiǎn)區(qū)心肌質(zhì)量的百分比表示心肌梗死范圍。1.4.3 IL18、IL10和CRP的測(cè)定 自大鼠腹主動(dòng)脈取血3 mL，放置0.5 h，然后以3 000 r/min離心5 min。取血清置于-20 的冰箱備檢。IL18、IL10、CRP檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附 (ELISA) 法。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 1.6及PPMS 1.5統(tǒng)計(jì)軟件5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料以s表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn),P0.05為差異有顯著性。2 結(jié) 果2.1 兩組心肌梗死面積及心肌酶的變化與MIR組比較,血脂康組大鼠心肌梗死面積、MYO、CKMB及cTnI水平明顯下降，差異有顯著意義(t=2.

12、5112.06,P0.05)。見表1。2.2 兩組IL10、IL18及CRP水平比較與MIR組相比較，血脂康組大鼠IL10含量明顯增加，IL18、CRP明顯下降，差異均有顯著意義(t=2.592.71,P0.05)。見表2。表1 兩組大鼠心肌梗死面積及MYO、CKMB及cTnI水平比較(s)分 組心肌梗死面積表2 兩組大鼠IL10、IL18及CRP水平比較3 討 論 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用血脂康膠囊預(yù)處理大鼠7 d，然后實(shí)施在體缺血再灌注損傷。與MIR組相比,血脂康組心肌梗死面積縮小,差異具有顯著性(P0.01)，這表明血脂康膠囊有改善心肌缺血的作用。心肌酶是反映心肌缺血、低氧的敏3 討 論本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用血脂

13、康膠囊預(yù)處理大鼠7 d，然后實(shí)施在體缺血再灌注損傷。與MIR組相比,血脂康組心肌梗死面積縮小,差異具有顯著性(P0.01)，這表明血脂康膠囊有改善心肌缺血的作用。心肌酶是反映心肌缺血、低氧的敏感指標(biāo)。cTnI、 CKMB及MYO是反映心肌梗死的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)觀察到兩組大鼠MYO、CKMB、cTnI水平增加，但應(yīng)用血脂康膠囊預(yù)處理的大鼠cTnI、CKMB及MYO值升高幅度低于MIR組(P0.05)，提示血脂康能減輕心肌再灌注損傷，對(duì)心臟有保護(hù)作用，其結(jié)果與他汀類其他藥物的效果一致6。眾多研究結(jié)果表明,缺血組織再灌注時(shí)會(huì)產(chǎn)生急性炎癥反應(yīng),導(dǎo)致缺血組織、細(xì)胞的損傷,炎癥細(xì)胞釋放細(xì)胞因子通過(guò)不同的致

14、炎和抗炎途徑參與缺血再灌注損傷的病理過(guò)程7。CRP是炎癥標(biāo)志物，也是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化(AS)及其發(fā)展的致病因子，IL10為公認(rèn)的抗炎細(xì)胞因子,它可通過(guò)抑制多種細(xì)胞因子的合成及作用、調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)重塑、抑制血栓形成等來(lái)增加AS斑塊的穩(wěn)定性，以阻止缺血再灌注損傷的發(fā)生，是降低AS形成危險(xiǎn)的因子之一。同時(shí)，IL18是體內(nèi)重要的促炎因子之一,其能夠促進(jìn)多種細(xì)胞因子參與的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，減弱心肌收縮功能，誘導(dǎo)心肌損傷8，在急性心肌梗死的早期炎癥反應(yīng)中起保護(hù)性作用9。本研究中,與MIR組相比，血脂康組IL18、CRP明顯降低(P0.05)，IL10顯著增高(P0.05)，與國(guó)內(nèi)其他學(xué)者研究結(jié)果一致10，證明

15、血脂康預(yù)處理可減輕炎癥反應(yīng)，預(yù)防心肌損傷。綜上所述，血脂康作為一種調(diào)脂藥物，還可減少心肌缺血，減輕炎癥反應(yīng)，改善內(nèi)皮功能。另外，血脂康副作用少，費(fèi)用較低，病人容易接受，尤其適合農(nóng)村貧困地區(qū)低收入病人，因此更值得推廣應(yīng)用于心血管疾病的高危人群中。【參考文獻(xiàn)】 1鄭波,張奇惠,李躍榮. 心肌缺血再灌注損傷機(jī)制研究進(jìn)展J. 濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2008,31(2):121123.2張茂良,段震,謝申猛. 血脂康有效成分研究J. 中國(guó)新藥雜志, 1998,7(3)：213214.3唐朝樞,林麗. 血管內(nèi)皮的保護(hù)策略J. 中華醫(yī)學(xué)雜志, 2003,83(2):8990.4劉付平,姚宏偉,李俊. 大鼠心肌缺血再灌注損傷模型的改進(jìn)J. 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2003,38(3):234236.5周曉彬,紀(jì)新強(qiáng),徐莉. 醫(yī)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件PPMS 1.5的組成和應(yīng)用特點(diǎn)J. 齊魯醫(yī)學(xué)雜志, 2009,24(1):2932.6戴淑華, 蔣學(xué)俊,李建軍. 氟伐他汀對(duì)正常血脂兔心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用J. 中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志, 2005,13(2)：183185.7李巧汶,邱健.炎癥標(biāo)記物與冠心病關(guān)系的研究進(jìn)展J. 心臟雜志, 2008,20(3)：359362.8CAIN B S, MELDRUM D R, D INARELLO C A, et al. Tumor necrosisfactoral