腦心康片對大鼠腦缺血再灌注損傷后凋亡相關基因細胞間黏附分子表

1、腦心康片對大鼠腦缺血再灌注損傷后凋亡相關基因細胞間黏附分子表         作者：蘇云明 張學會 李環(huán) 李卉 孟妍 【摘要】 目的觀察腦心康片對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用，進一步探討其作用機制。方法Wistar大鼠雄性70只，按照體重隨機分為7組，每組10只。即腦心康片高劑量組、中劑量組、低劑量組，尼莫地平組，銀杏葉片組，模型組和假手術              

2、0;            作者：蘇云明張學會李環(huán)李卉孟妍 【摘要】  目的觀察腦心康片對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用，進一步探討其作用機制。方法Wistar大鼠雄性70只，按照體重隨機分為7組，每組10只。即腦心康片高劑量組、中劑量組、低劑量組，尼莫地平組，銀杏葉片組，模型組和假手術組。各組均連續(xù)灌胃給藥7 d（模型組和假手術組予等體積生理鹽水）。末次給藥30 min后，除假手術組外各組采用大鼠大腦中動脈線栓法制備不完全腦缺血模型，觀察腦心康片給藥前后大腦中動脈

3、阻塞(MCAO)大鼠神經(jīng)功能缺損導致的行為學變化；免疫組織化學法檢測腦心康片對腦缺血后24，48，72 h腦組織細胞間黏附分子-1（ICAM-1）蛋白表達的影響。結果腦心康片能明顯改善腦缺血大鼠的神經(jīng)功能缺損癥狀，抑制ICAM-1蛋白的表達。結論腦心康片對腦缺血具有保護作用，遵循一定的時-效關系和量-效關系，其機理可能與腦心康片通過抑制凋亡相關基因的表達，進而抑制神經(jīng)元細胞凋亡有關。 【關鍵詞】  腦心康片；腦缺血；再灌注損傷；細胞凋亡； 細胞間黏附分子-1Abstract:ObjectiveTo study the protective effect of Naoxinkang-t

4、ablet on cerebral ischemia reperfusion injury in rats and its mechanism.MethodsThe model of incomplete cerebral ischemia were induced by occluding the middle cerebral artery occlusion (MCAO). The protein expression of ICAM-1 was immunohistochemical method at 24 h, 48 h and 72 h after cerebral ischem

5、ia.ResultsNaoxinkang-tablet could obviously improve detected by symptoms of the neurological deficit in cerebral ischemia rats, inhibit the expression of ICAM-1. ConclusionNoxinkang-tablet has protective effect on cerebral ischemia reperfusion injury in time and dose dependent manners by inhibiting

6、ICAM-1 expression and anti-inflammation.Key words:Naoxinkang-tablet；Cerebral Ischemia；Reperfusion injury；Cell Apoptosis；  ICAM-1    腦血管疾病是神經(jīng)系統(tǒng)的常見病、多發(fā)病，是目前引起人類死亡的三大疾病之一。缺血性腦卒中是多種原因引起的一種臨床病理狀態(tài),其腦組織損害是產(chǎn)生臨床征象的病理基礎。在本病的預防、治療和康復方面，中醫(yī)藥具有較為顯著的療效和優(yōu)勢。臨床應用腦心康片治療腦缺血，取得滿意療效1。本實驗通過對大鼠腦神經(jīng)損傷的行為學

7、改變、凋亡相關基因ICAM-1蛋白表達的觀察，探討腦心康片對腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護作用及其作用機制?，F(xiàn)報道如下。1  材料與儀器1.1  動物Wistar大鼠，雄性，體重（200±20）g，由黑龍江中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，動物許可證號：黑動字P00101006。大鼠自由進食、飲水，同等條件下飼養(yǎng)，手術前12 h禁食，不禁水。1.2 藥品與試劑腦心康片由蝙蝠葛酚性堿50%、水蛭素50%組成，黑龍江中醫(yī)藥大學實驗中心制備；尼莫地平片，天津中央藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號0701001；銀杏葉片，唐山榮大藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號050304。Rabbit Anti CD

8、54（ICAM-1）（BA2189），稀釋度：1100（武漢博士德生物工程有限公司）。HRP標記的鏈霉卵白素-親和素SP試劑盒、 S/P三步法檢測試劑盒（批號50881774）、PV6001二步法檢測試劑盒（批號1360）、兔抗山羊IgG/HRP（批號C0206）、 山羊抗鼠IgG/HRP（批號N045036）、 DAB顯色試劑盒  （批號60882801），均有北京中杉金橋生物技術有限公司生產(chǎn)。1.3 儀器生物組織攤烤片機、生物組織包埋機（湖北孝感）；電熱鼓風干燥箱（上海福瑪）；光學顯微鏡（Olympus Japan BH-2）；Q500IW圖像分析儀（ 德國Leica）；醫(yī)用圖像

9、分析處理系統(tǒng)（華海電子有限公司）。2 方法2.1 分組及給藥方法清潔級雄性Wistar大鼠70只，體重（200±20）g，按照體重隨機分為7組，每組10只。即腦心康片高劑量組（100 mg/kg），腦心康片中劑量組（50 mg/kg），腦心康片低劑量組（25 mg/kg），尼莫地平治療組（21.6 mg/kg），銀杏葉片組（135 mg/kg），模型對照組和假手術組（分別給等體積生理鹽水）。各組均連續(xù)灌胃給藥7 d，末次給藥30 min后手術。2.2 大鼠腦缺血再灌注模型制備采用大鼠大腦中動脈線栓法制備不完全腦缺血模型，末次給藥30 min 后，用10%水合氯醛350 mg·kg-1行腹腔注射麻醉，分離并結扎雙側頸總動脈及迷走神經(jīng)45 min，然后松開再灌注2 h。假手術組只暴露血管不結扎，其余組均按照上述過程操作。2.3 實驗指標的檢測方法在造模手術完成35 h，待大鼠蘇醒后，能夠完全自主活動時，進行第1次神經(jīng)功能評分；分別于末次給藥后24，48，72 h進行第2次神經(jīng)功能評分。行為學評分后處死部分動物，快速開胸暴露心臟，剪開右心耳，經(jīng)左心室插管至升主動脈內(nèi)，于5 mi