急性紅白血病的生物學(xué)特征與臨床療效研究

1、急性紅白血病的生物學(xué)特征與臨床療效研究         【摘要】  本研究探討急性紅白血病（AMLM6）的生物學(xué)特征與臨床療效的關(guān)系。 對(duì)29例M6初治患者細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫表型和染色體核型進(jìn)行回顧性分析并觀察臨床化療效果，同時(shí)隨機(jī)抽取30例AMLM2（急性粒細(xì)胞白血病部分分化型）作為對(duì)照。結(jié)果表明： M6患者的外周血中均可見(jiàn)幼稚細(xì)胞（2-10）及有核紅細(xì)胞，骨髓穿刺細(xì)胞學(xué)檢查顯示19例伴有多系細(xì)胞發(fā)育異常，累及二系細(xì)胞或三系細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表明，M6 GlyA（血型糖蛋白A）的表達(dá)率高達(dá)（66.67&

2、#177;23.86），明顯高于其在M1，M2，M3，M4和M5中的陽(yáng)性表達(dá)率(P0.01)。M6高表達(dá)HLADR（60.00±24.79）%,CD34（40.00±24.79）%，CD38（33.33±23.86）%，髓系抗原主要表達(dá)CD13（66.67±23.86）%，MPO（33.33±23.86）%，CD33（46.67±25.25）%,CD15（33.33±23.86）%,CD117（46.67±25.25）%。部分病例伴有淋系抗原的表達(dá),如CD3、CD4、CD19，其中CD4的表達(dá)高達(dá)26.67。M6中

3、CD38、CD33、CD15、MPO的陽(yáng)性表達(dá)率低于M2患者。9例M6患者染色體的檢查顯示，4例存在核型異常，異常率達(dá)44.44，其中復(fù)雜核型異常1例。M6患者化療完全緩解率為29.41，低于M2患者化療完全緩解率（68.18， P0.01)。結(jié)論： GlyA是鑒別M6與其他亞型急性髓性白血病的一個(gè)重要標(biāo)志，M6有自己獨(dú)特的生物學(xué)表型，其化療效果不佳可能與其生物學(xué)特征有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  急性紅白血病 AMLM6 免疫表型 核型Biological Characteristics and Therapeutic Effect of Acute ErythoLeukemia 

4、  Abstract   The objective of this study was to investigate  the biological characteristics and the therapeutic effect in patients with acute erythroleukemia (AMLM6). Morphology, immunophenotype and cytogenetics were retrospectively analyzed  in 29 patients with AMLM6 and we

5、re compared with 30 AMLM2 patients. The results showed that there were immature cells (2%-10%) and erythroblast,  and puncture of bone marrow revealed myelodysplastic features involving multiple hemopoietic lineages in bone marrow of  19 patients. Flow cytometry indicated that the expressi

6、on frequency of GlyA  in M6   significantly increased (66.67±23.86)%  and higher than that  in M1, M2, M3, M4 and M5 (P0.01). The expression frequencies of HLADR (60.00±24.79), CD34 (40.00±24.79), CD38 (33.33±23.86) in M6 were high, and  the  fr

7、equencies of myeloid immunophenotypes CD13 (66.67±23.86), MPO (33.33±23.86), CD33 (46.67±25.25), CD15 (33.33±23.86), CD117 (46.67±25.25) were common as well  in M6. Lymphocytic immunophenotypes CD3, CD4, CD19 were detected  in  part of patients with M6, and th

8、e expression frequencies of CD4  was 26.67%. The expression frequences of CD38, CD33, CD15, MPO in M6 were less common than that  in M2 (P0.01). In 4 out of  9 M6  patients  the chromosomal  abnormatility   (44.44%)  was seen, in one of which complex chro

9、mosome abnormality   was found.  The complete remmision rate of M6 patients was 29.41%, and  lower than that of M2 patients (68.18%, P0.01).   It is concluded that  GlyA is a specific immunophenotype in M6, which can help to  distinguish  M6 from other

10、60; types of acute myeloid leukemia. Poor clinical therapeutic response may correlated with its  biological   characteristics.   Key words   acute erythroleukemia,   AMLM6,   immunophenotype, karyotype   J Exp Hematol 2007; 15(3):466-4

11、69   M6是一種異質(zhì)性血液系統(tǒng)惡性腫瘤，可同時(shí)累及多個(gè)細(xì)胞系，臨床預(yù)后較差。由于該亞型急性白血病相對(duì)少見(jiàn)，對(duì)其生物學(xué)表型了解不多，為進(jìn)一步探討M6的生物學(xué)特征與化療效果的關(guān)系，我們對(duì)29例M6初治病例的臨床資料進(jìn)行了分析，現(xiàn)報(bào)告如下。   材料和方法   病例選擇   29例M6患者均為我院1995-2005年初治住院病人，符合2001年WHO造血組織腫瘤分類診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中男19例，女10例，年齡7-68歲，中位年齡43歲。隨機(jī)抽取我院1995-2005年進(jìn)行免疫學(xué)分型的初治M2住院病例30例作為對(duì)照。為進(jìn)一步

12、比較GlyA抗原的變化，另選擇M1 20例，M3 15例，M4和M5共15例進(jìn)行免疫分型作為對(duì)照。   中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志  J Exp Hematol 2007; 15(3)急性紅白血病的生物學(xué)特征與臨床療效研究形態(tài)學(xué)檢查   骨髓及外周血片經(jīng)瑞氏染色分類，同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞化學(xué)染色，包括髓過(guò)氧化物酶，非特異性酯酶、糖原染色的細(xì)胞學(xué)檢查。   免疫學(xué)分型   治療前采取患者骨髓，肝素抗凝，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。所用的單克隆抗體包括HLADR、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD10、CD11b、

13、CD13、CD14、CD15、CD16、CD19、CD20、CD22、CD33、CD34、CD36、CD38、CD56、CD71、CD117、MPO、GlyA、cCD79a。陽(yáng)性病例判斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)EGIL標(biāo)準(zhǔn)：淋系抗原陽(yáng)性細(xì)胞20，髓系抗原陽(yáng)性細(xì)胞20，MPO10。   染色體核型分析   治療前采取骨髓，直接法或24小時(shí)培養(yǎng)法處理標(biāo)本，用G帶或R帶法顯帶，根據(jù)國(guó)際人類染色體（ISCN 1995）命名核型。   治療方法   M6病例及對(duì)照組M2病例多采用標(biāo)準(zhǔn)D(H)A方案化療，僅2例M6采用CAG方案（D：柔紅霉素

14、，H：高三尖杉酯堿，C：阿克拉霉素，A：阿糖胞苷，G：粒細(xì)胞刺激因子）。   療效判斷標(biāo)準(zhǔn)   參照參考文獻(xiàn)1判斷完全緩解（CR）,未緩解（NR）。   統(tǒng)計(jì)學(xué)方法   F檢驗(yàn)，抗原陽(yáng)性率估計(jì)95的可信區(qū)間。   結(jié)   果   外周血涂片   29例M6患者外周血片中均可見(jiàn)外周血幼稚細(xì)胞，幼稚細(xì)胞所占比例不一，原始粒細(xì)胞早幼粒細(xì)胞為2-10，但均可見(jiàn)有核紅細(xì)胞。   骨髓穿刺細(xì)胞學(xué)檢查   除1

15、例骨髓增生減低外，其余28例增生明顯活躍或極度活躍。所有病例非紅系原始細(xì)胞記數(shù)（NEC）20，紅系細(xì)胞記數(shù)50，19例存在多系發(fā)育異常，紅系以細(xì)胞巨幼變?yōu)橹?，巨核系以淋巴樣小巨核?xì)胞為主，粒系可見(jiàn)PelgerHeüt畸形及Auer小體，幼紅細(xì)胞PAS呈 。            免疫學(xué)分型   本組M6病例GlyA的陽(yáng)性表達(dá)率為（66.67±23.86）%，明顯高于其在M2、M1、M3、M4及M5中的陽(yáng)性表達(dá)率（P0.01）。GlyA在M1、M2、M3、M

16、4和M5、M6中的陽(yáng)性表達(dá)率具體見(jiàn)表1。   本組 M6病例除表達(dá)上述抗原外，髓系抗原主要表達(dá)CD13、CD33、CD117、CD15、MPO，其中CD13、CD117的陽(yáng)性表達(dá)率在M6和M2之間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。CD33、CD15、MPO在M6中的陽(yáng)性表達(dá)率低于M2（P0.01），以上抗原在M6與M2中的陽(yáng)性表達(dá)率具體見(jiàn)表2。本組M6病例不伴CD14表達(dá)。部分M6病例伴有淋系抗原的表達(dá)，如CD3、CD4、CD7、CD19，其中CD4陽(yáng)性表達(dá)率較高達(dá)26.67,一般僅伴有單一淋系抗原表達(dá)。M6與M2免疫表型比較具體見(jiàn)表2。   核型

17、60;  本組29例M6病例中進(jìn)行染色體核型分析9例，4例（44.44）患者具有染色體核型異常，染色體核型異常分別為46,xy,cht(6)40%；46,xy,c(87%),+mar(13%)；4647,xx,+21320%；49,xy,dup(1)(q3241),+4,+5,+8,其中1例為復(fù)雜染色體核型異常（i3處染色體數(shù)量異常和或結(jié)構(gòu)異常）(cht:染色單體；mar:母源；dup:重復(fù))。   療效   本組M6病例化療21例，其中17例的療效可以進(jìn)行判斷?；熗耆徑?CR)5例，CR率為29.41；對(duì)照組M2病例中化療26例，其中22

18、例的療效可以判斷，化療完全緩解(CR)15例，CR率為68.18。兩者相比較，M6化療CR率低于M2化療CR率(P0.01)。對(duì)伴有多系發(fā)育異常的的M6病例化療，結(jié)果無(wú)1例緩解。   討   論   M6作為造血系統(tǒng)的腫瘤性疾病3，除存在原始細(xì)胞數(shù)量異常，骨髓細(xì)胞學(xué)檢查往往存在多系發(fā)育異常，累及二系或三系，形態(tài)學(xué)表現(xiàn)復(fù)雜，給M6的診斷帶來(lái)一定的困難，易與MDS混淆。此時(shí)原始細(xì)胞計(jì)數(shù)成為辨別的要點(diǎn)，有核紅細(xì)胞PAS ，特別是強(qiáng)陽(yáng)性也可以輔助診斷M6，而M6化療效果不佳可能也與這個(gè)特點(diǎn)有關(guān)。   AML由于細(xì)胞發(fā)生克隆

19、增殖的階段不同, 存在某些系列多樣性和異質(zhì)性，單一依據(jù)細(xì)胞形態(tài)學(xué)及組織化學(xué)染色診斷急性白血病已顯得不足。隨著MICM分型的提出，用單克隆抗體分析白血病細(xì)胞表面的免疫標(biāo)志, 從而進(jìn)一步明確白血病細(xì)胞的起源及分化程度,為臨床診斷及治療，判斷預(yù)后提供了重要的依據(jù)。本研究中M6的GlyA的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于M2（P0.01）。Kemmitz等4用40種單克隆抗體分析了136例AML病例的免疫表型，5例診斷為M6的病例GlyA均為陽(yáng)性，而其他亞型表達(dá)均為陰性。SanMiguel等5回顧性研究了98例AML病例，其中5例M6病例4例GlyA陽(yáng)性表達(dá)，其他病例表達(dá)陰性。然而，以上研究中的M6病例數(shù)較少，而本

20、研究中M6病例數(shù)達(dá)29例，進(jìn)一步證明M6特征性表達(dá)GlyA是鑒別M6與髓性白血病其他亞型的一個(gè)重要指標(biāo)6。   本研究中M6除特征性表達(dá)GlyA外，HLADR、CD34、CD38陽(yáng)性表達(dá)率也較高，部分病例伴有淋系抗原的表達(dá),如CD3、CD4、CD19，其中CD4的表達(dá)高達(dá)26.67，且一般僅伴有單一淋系抗原表達(dá)。通過(guò)分析這些抗原的表達(dá)，可以探知M6的起源。過(guò)去很多學(xué)者認(rèn)為CD34是造血干細(xì)胞的標(biāo)志，認(rèn)為白血病起源于造血干細(xì)胞；可是最新的研究表明，并非所有CD34陽(yáng)性的細(xì)胞均是造血干細(xì)胞，相反其中98以上是早期和晚期的造血祖細(xì)胞，所以CD34+是造血干/祖細(xì)胞的標(biāo)志7。造血干細(xì)胞白血病具有髓淋兩系同時(shí)或先后受累，或白血病細(xì)胞表型跨越髓淋兩系的特點(diǎn)，此類白血病在臨床上極為少見(jiàn)，而大多數(shù)的白血病僅累及髓系或淋巴系或某一個(gè)細(xì)胞系，甚至某一系的某一個(gè)分化階段。因此，M6