生物化學(xué)思考題

1、1 氨基等電點(diǎn)(isoelctric point)：氨基酸溶液在某一定pH值時(shí)，使某特定氨基酸分子上所帶正負(fù)電荷相等，成為兩性離子，在電場(chǎng)中既不向陽(yáng)極也不向陰極移動(dòng)，此時(shí)溶液的pH值即為該氨基酸的等電點(diǎn)(isoelctric point)。2 肽平面：由于羰基碳-氧雙鍵的靠攏，允許存在共振結(jié)構(gòu)（resonance structure），碳與氮之間的肽鍵有部分雙鍵性質(zhì)，由CO-NH構(gòu)成的肽單元呈現(xiàn)相對(duì)的剛性和平面化，肽鍵中的4個(gè)原子和它相鄰的兩個(gè)-碳原子多處于同一個(gè)平面上。3 超二級(jí)結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)分子中，特別是球狀蛋白質(zhì)中，由若干相鄰的二級(jí)結(jié)構(gòu)單元（即螺旋、折疊片和轉(zhuǎn)角等）彼此相互作用組合在一起，

2、形成有規(guī)則、在空間上能辨認(rèn)的二級(jí)結(jié)構(gòu)組合體，充當(dāng)三級(jí)結(jié)構(gòu)的構(gòu)件單元，稱超二級(jí)結(jié)構(gòu)，已知的超二級(jí)結(jié)構(gòu)有3種基本組合形式：、。4 結(jié)構(gòu)域：二級(jí)結(jié)構(gòu)及超二級(jí)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，多肽鏈進(jìn)一步卷曲折疊，組裝成幾個(gè)相對(duì)獨(dú)立、近似球形的三維實(shí)體。結(jié)構(gòu)域是球狀蛋白的折疊單位，多肽鏈折疊的最后一步是結(jié)構(gòu)域間的締合。結(jié)構(gòu)域的概念有三種涵義:即獨(dú)立的結(jié)構(gòu)單位、獨(dú)立的功能單位和獨(dú)立的折疊單位。類型： -螺旋域； -折疊域； +域； /域；無規(guī)則卷曲+-回折域；無規(guī)則卷曲+ -螺旋結(jié)構(gòu)域，對(duì)于較小的蛋白質(zhì)分子或亞基來說，結(jié)構(gòu)域和三級(jí)結(jié)構(gòu)往往是一個(gè)意思，就是說這些蛋白質(zhì)是單結(jié)構(gòu)域的。 5 變性作用：白質(zhì)各自所特有的高級(jí)結(jié)構(gòu)，是

3、表現(xiàn)其物理性質(zhì)和化學(xué)特性以及生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。當(dāng)天然蛋白質(zhì)受到某些物理因素和化學(xué)因素的影響，使其分子內(nèi)部原有的高級(jí)構(gòu)象發(fā)生變化時(shí)，蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和生物學(xué)功能都隨之改變或喪失，但并未導(dǎo)致其一級(jí)結(jié)構(gòu)的變化，這種現(xiàn)象稱為變性作用（denaturation）變性的實(shí)質(zhì)：次級(jí)鍵（有時(shí)包括二硫鍵）被破壞，天然構(gòu)象解體。變性不涉及一級(jí)結(jié)構(gòu)的破壞。6 核酸變性指核酸雙螺旋區(qū)的氫鍵斷裂，變成單鏈，不涉及共價(jià)鍵斷裂。變性因素： 熱變性 酸堿變性（pH小于4或 大于11）變性劑（尿素、鹽酸 胍、甲醛） 變性后的理化性質(zhì)： 260nm吸收值升高。 粘度降低，浮力密度 升高。二級(jí)結(jié)構(gòu)改變，部分失活。 DNA的變性是爆

4、發(fā)式的，變性作用發(fā)生在一個(gè)很窄的溫度范圍內(nèi)。7 亞基一般是一條多肽鏈，有時(shí)也稱單體。本身具有球狀三級(jí)結(jié)構(gòu)。8 等電點(diǎn)：在某一pH，它所帶的正電荷與負(fù)電荷相等。蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和它所含的酸性氨基酸殘基和堿性氨基酸殘基的比例有關(guān)。 等離子點(diǎn)：沒有其它鹽類干擾時(shí)，蛋白質(zhì)質(zhì)子供體解離出的質(zhì)子數(shù)與質(zhì)子受體結(jié)合的質(zhì)子數(shù)相等時(shí)的pH值稱等離子點(diǎn)，是每種蛋白質(zhì)的特征常數(shù)。 9 增色效應(yīng)：核酸發(fā)生變性時(shí)，摩爾磷吸光系數(shù)（P）升高約25%，此現(xiàn)象為增色效應(yīng)；減色效應(yīng): 復(fù)性后摩爾磷吸光系數(shù)（P）又降低的現(xiàn)象。原因雙螺旋結(jié)構(gòu)使堿基對(duì)的電子云發(fā)生重疊，減少了對(duì)紫外光的吸收。10 分子雜交 來源的DNA單鏈間或單鏈DNA

5、與RNA之間只要有堿基配對(duì)的區(qū)域，在復(fù)性時(shí)可形成局部雙螺旋區(qū)，稱核酸分子雜交(hybridization)。11 熔解溫度（Tm）DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)失去一半時(shí)對(duì)應(yīng)的溫度稱為熔解溫度（Tm）。 影響DNA的Tm值的因素DNA均一性 均一性高，變性的溫度范圍越窄，據(jù)此可分析DNA的均一性 。G-C含量與Tm值成正比測(cè)定Tm，可推知G-C含量。G-C%=(Tm-69.3)×2.44介質(zhì)中離子強(qiáng)度14活性中心：酶分子中結(jié)合底物并起催化作用的少數(shù)氨基酸殘基，包括底物結(jié)合部位（決定酶的專一性）、催化部位（決定酶所催化反應(yīng)的性質(zhì)）。.15別構(gòu)效應(yīng) 別構(gòu)部位與配體的結(jié)合可影響其他亞基，使這些亞基構(gòu)象

6、改變，增強(qiáng)或減弱對(duì)底物的結(jié)合 酶分子的非催化部位與某些化合物可逆地非共價(jià)結(jié)合后導(dǎo)致酶分子發(fā)生構(gòu)象改變，進(jìn)而改變酶的活性狀態(tài)，稱為酶的別構(gòu)調(diào)節(jié)同工酶 存在于同一種屬或不同種屬，同一個(gè)體的不同組織或同一組織、同一細(xì)胞，具有不同分子形式但卻能催化相同的化學(xué)反應(yīng)的一組酶，稱之為同工酶（isoenzyme）。轉(zhuǎn)換數(shù)（turnover number）的概念：一定條件下，每秒鐘每微摩爾酶分子能催化底物發(fā)生變化的微摩爾數(shù)，用kcat表示。K3代表酶被底物飽和時(shí)每秒鐘每個(gè)酶分子轉(zhuǎn)換底物的分子數(shù)，稱為轉(zhuǎn)換數(shù)（或催化常數(shù)，Kcat）， 表明酶的最大催化效率。18競(jìng)爭(zhēng)性抑制（Competitive inhibitio

7、n）抑制劑具有與底物類似的結(jié)構(gòu)，競(jìng)爭(zhēng)酶的活性中心，并與酶形成可逆的EI復(fù)合物，阻止底物與酶結(jié)合?？梢酝ㄟ^增加底物濃度而解除此種抑制。 19非競(jìng)爭(zhēng)性抑制（noncompetitive inhibition）.底物和抑制劑可以同時(shí)與酶結(jié)合，但是，中間的三元復(fù)合物ESI不能進(jìn)一步分解為產(chǎn)物，因此，酶的活性降低。抑制劑與酶活性中心以外的基團(tuán)結(jié)合，其結(jié)構(gòu)可能與底物無關(guān)。不能通過增加底物濃度的辦法來消除非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用。20反競(jìng)爭(zhēng)性抑制 .酶只有在與底物結(jié)合后，才能與抑制劑結(jié)合。E+SES+I ESI P常見于多底物的酶促反應(yīng)中 激素是生物體內(nèi)特殊組織或腺體產(chǎn)生的，直接分泌到體液中(若是動(dòng)物，則指血液、淋

8、巴液、腦脊液、腸液)，通過體液運(yùn)送到特定作用部位，從而引起特殊激動(dòng)效應(yīng)(調(diào)節(jié)控制各種物質(zhì)代謝或生理功能)的一群微量的有機(jī)化合物。因此也可以把這類化學(xué)物質(zhì)看作是生物體內(nèi)的“化學(xué)訊息”。內(nèi)分泌：內(nèi)分泌細(xì)胞分泌激素，進(jìn)入血液循環(huán)，轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞，產(chǎn)生激動(dòng)效應(yīng)。旁分泌：部分細(xì)胞分泌激素，通過擴(kuò)散，作用于鄰近的細(xì)胞。自分泌：細(xì)胞分泌的激素對(duì)自身或同類細(xì)胞發(fā)揮作用。cAMP被稱為第二信使。含氮激素與受體結(jié)合，引發(fā)結(jié)合在受體上的G蛋白生成Gs蛋白GTP，Gs蛋白活化膜上的腺苷酸環(huán)化酶，腺苷酸環(huán)化酶催化ATP轉(zhuǎn)化成cAMP。cAMP自由擴(kuò)散到整個(gè)細(xì)胞，激活依賴cAMP的蛋白激酶（蛋白激酶A、PKA），蛋白激酶A

9、催化一些蛋白質(zhì)的Ser、Thr的羥基磷酸化，從而改變這些酶的活性，調(diào)節(jié)代謝。級(jí)聯(lián)放大作用腎上腺素在促進(jìn)糖原分解中的級(jí)聯(lián)放大作用： 當(dāng)腎上腺素到達(dá)肝細(xì)胞表面時(shí)，迅速與肝細(xì)胞表面的-腎上腺素受體結(jié)合，受體構(gòu)象變化，激活與受體偶連的G蛋白，G蛋白激活膜上的腺苷酸環(huán)化酶，產(chǎn)生cAMP。一旦腎上腺素停止分泌：結(jié)合在肝細(xì)胞膜上的腎上腺素就解離下來。cAMP不再生成，遺留的cAMP被磷酸二酯酶分解。蛋白激酶A的兩種亞基又聯(lián)結(jié)成無活性的復(fù)合體（催化亞基和調(diào)節(jié)亞基）。有活性的磷酸化酶激酶的磷酸化形式遭到脫磷酸作用，變成無活性形式。磷酸化酶a受到磷酸酶作用，脫去磷酸變成無活性的磷酸化酶b，糖原分解停止。無活性的磷

10、酸化形式的糖原合成酶經(jīng)過脫磷酸作用，又變得活躍起來，繼續(xù)合成糖原。在整個(gè)過程中，雖然開始只合成了極少量的腎上腺素，但到最后卻引起了極強(qiáng)烈的效應(yīng)，信號(hào)逐級(jí)放大了300萬倍，稱為級(jí)聯(lián)放大作用。27皂化作用堿水解脂肪的作用為皂化作用。表示皂化所需的堿量數(shù)值稱皂化價(jià)。皂化價(jià)為皂化1g油脂所需的KOH的mg數(shù)。28.29疏水作用是蛋白質(zhì)分子中疏水性較強(qiáng)的一些氨基酸(如纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸等)的側(cè)鏈避開水相自相粘附聚集在一起，形成孔穴，對(duì)維持蛋白質(zhì)分子的三維結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性起一定作用。 30鹽溶：低鹽濃度時(shí)，蛋白質(zhì)溶解度增加。鹽析：高鹽濃度時(shí)，使蛋白質(zhì)溶解度降低析出。鹽析多用溶解度大的中性鹽，如(

11、NH4)2SO4、NaCl、MgCl2、NH4Cl、KCl等的飽和溶液。酶活力：用在一定條件下，酶催化某一反應(yīng)的反應(yīng)速率表示。反應(yīng)速率快，活力就越高。 酶的活力單位（酶的含量）酶的比活力（酶的純度）酶酸堿催化 酶分子的一些功能基團(tuán)起瞬時(shí)質(zhì)子供體或質(zhì)子受體的作用 影響酸堿催化反應(yīng)速度的兩個(gè)因素酸堿強(qiáng)度(pK值）。給出質(zhì)子或結(jié)合質(zhì)子的速度。酶共價(jià)催化 又稱親核催化或親電子催化。在催化時(shí)，親核催化劑或親電子催化劑能分別放出電子或汲取電子并作用于底物的缺電子中心或負(fù)電中心，迅速形成不穩(wěn)定的共價(jià)中間復(fù)合物，降低反應(yīng)活化能，使反應(yīng)加速。酶共價(jià)修飾 某些酶可以通過其它酶對(duì)其多肽鏈上某些基團(tuán)進(jìn)行可逆的共價(jià)修飾

12、，使其處于活性與非活性的互變狀態(tài)，從而調(diào)節(jié)酶活性。這類酶稱為共價(jià)修飾酶。 同促效應(yīng) 物分子本身對(duì)別構(gòu)酶的調(diào)節(jié)作用稱為同促效應(yīng)；異促效應(yīng)非底物分子的調(diào)節(jié)物對(duì)別構(gòu)酶的調(diào)節(jié)作用，稱為異促效應(yīng)。可逆的抑制作用 抑制劑與酶蛋白非共價(jià)鍵結(jié)合，可以用透折、超濾等物理方法除去抑制劑而使酶復(fù)活。不可逆的抑制作用抑制劑與酶活性中心（外）的必需基團(tuán)共價(jià)結(jié)合，使酶的活性下降，無法用透析、超濾等物理方法除去抑制劑而使酶復(fù)活。 2天然脂肪酸的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)高等動(dòng)、植物的脂肪酸有以下共性：(1)脂肪酸鏈長(zhǎng)為14一20個(gè)碳原子的占多數(shù)且都是偶數(shù)。最常見的是16或18個(gè)碳原子酸。(2)飽和脂肪酸中最普遍的是軟脂酸和硬脂酸。不飽和脂肪

13、酸中最普遍的是油酸。(3)在高等植物和低溫生活的動(dòng)物中，不飽和脂肪酸的含量高于飽和脂肪酸含量。(4)不飽和脂肪酸的熔點(diǎn)比同等鏈長(zhǎng)的飽和脂肪酸的熔點(diǎn)低。(5)高等動(dòng)、植物的單不飽和脂肪酸酌雙鍵位置一般在第910碳原子之間，多不飽和脂肪酸中的一個(gè)雙鍵一般也位于第9-10碳原子之間。(6)高等動(dòng)、植物的不飽和脂肪酸，幾乎都具有相同的幾何構(gòu)型，而且都用于順式(cis)。(7)細(xì)菌所含的脂肪酸種類比高等動(dòng)、植物的少得多。細(xì)菌的不飽和脂肪酸只帶有一個(gè)雙鍵。非極性烴鏈?zhǔn)窃斐芍舅嵩谒腥芙舛鹊偷脑?，烴鏈越長(zhǎng)，溶解度越低。不飽和脂肪酸的熔點(diǎn)比相同鏈長(zhǎng)的飽和脂肪酸低，雙鍵越多，熔點(diǎn)越低。順式異構(gòu)體的熔點(diǎn)又比反

14、式異構(gòu)體的低。4白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)指多肽鏈中的氨基酸序列。蛋白質(zhì)測(cè)序的策略 (1)測(cè)定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈的數(shù)目。 (2)拆分蛋白質(zhì)分子的多肽鏈。 (3)斷裂多肽鏈內(nèi)的二硫鍵。 (4)測(cè)定多肽鏈的氨基酸組成。 (5)分析多肽鏈的N末端和C末端殘基。 (6)多肽鏈斷裂成肽段。 (7)測(cè)定各個(gè)肽段的氨基酸順序。 (8)確定肽段在多肽鏈中的次序。(9)確定原多肽鏈中二硫鍵的位置。5二硫橋位置的確定一般采用胃蛋白酶處理含有二硫鍵的多肽鏈(切點(diǎn)多；酸性環(huán)境下防止二硫鍵發(fā)生交換)。將所得的肽段利用Brown及Hartlay的對(duì)角線電泳技術(shù)進(jìn)行分離。9典型的螺旋特征：  二面角：= -57&#

15、176;, = - 47°，是一種右手螺旋； 每圈螺旋：3.6個(gè)aa殘基，  高度：0.54nm  每個(gè)殘基繞軸旋轉(zhuǎn)100°，沿軸上升0.15nm； 氨基酸殘基側(cè)鏈向外； 相鄰螺圈之間形成鏈內(nèi)氫鏈，氫鍵的取向幾乎與中心軸平行。 肽鍵上N-H氫與它后面（N端）第四個(gè)殘基上的C=0氧間形成氫鍵。這種典型的螺旋用3.613螺旋表示。-折疊兩條或多條幾乎完全伸展的多肽鏈（或同一肽鏈的不同肽段）側(cè)向聚集在一起，相鄰肽鏈主鏈上的NH和C=0之間形成氫鏈，這樣的多肽構(gòu)象就是-折疊片。-折疊中所有的肽

16、鏈都參于鏈間氫鍵的形成，氫鍵與肽鏈的長(zhǎng)軸接近垂直。多肽主鏈呈鋸齒狀折疊構(gòu)象，側(cè)鏈R基交替地分布在片層平面的兩側(cè), -碳原子位于折疊線上。 平行折疊片中疏水側(cè)鏈分布在折疊片平面的兩側(cè)，而反平行折疊片中通常所有疏水側(cè)鏈都排列在折疊片的一側(cè)。 從能量上看，反平行折疊比平行的更穩(wěn)定，前者的氫鍵NH-O幾乎在一條直線上，此時(shí)氫鍵最強(qiáng)。29影響螺旋形成的因素氨基酸組成與側(cè)鏈R基的大小和帶電性決定了能否形成螺旋以及形成的螺旋的穩(wěn)定性：  多肽鏈上連續(xù)出現(xiàn)帶同種電荷基團(tuán)的氨基酸殘基,(如Lys，或Asp，或Glu)，則由于靜電排斥，不能形成鏈內(nèi)氫鍵，從而不能形成穩(wěn)定的螺旋。如多聚Lys、多聚Glu。

17、而當(dāng)這些殘基分散存在時(shí)，不影響螺旋穩(wěn)定。 Gly的角和角可取較大范圍，在肽中連續(xù)存在時(shí)，使形成螺旋所需的二面角的機(jī)率很小，不易形成螺旋。絲心蛋白含50%Gly，不形成螺旋。  R基大（如Ile）不易形成螺旋  ProPro中止螺旋。C-N鍵和C-N肽鍵都不能旋轉(zhuǎn)，而且多聚Pro的肽鍵不具酰胺氫，不能形成鏈內(nèi)氫鍵。 R基較小，且不帶電荷的氨基酸利于螺旋的形成。如多聚丙氨酸在pH7的水溶液中自發(fā)卷曲成螺旋。 轉(zhuǎn)角的特征：由多肽鏈上4個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基組成。主鏈骨架以180°返回折疊。第一個(gè)aa殘基的C=O與第四個(gè)aa殘基的N-H生成氫鍵。C1與C4

18、之間距離小于0.7nm多數(shù)由親水氨基酸殘基組成。 Gly缺少側(cè)鏈，在轉(zhuǎn)角中能很好地調(diào)整其他氨基酸殘基的空間阻礙；Pro具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)和固定的角，在一定程度上迫使轉(zhuǎn)角的形成-螺旋，-轉(zhuǎn)角，-折疊在拉氏圖上有固定位置，而無規(guī)卷曲的、二面角可存在于所有允許區(qū)域內(nèi)。 10.狀蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的特征· 含多種二級(jí)結(jié)構(gòu)單元；· 有明顯的折疊層次；· 是緊密的球狀或橢球狀實(shí)體；· 分子表面有一空穴(活性部位)；· 疏水側(cè)鏈埋藏在分子內(nèi)部，親水側(cè)鏈暴露在分子表面。11蛋白質(zhì)變性后，往往出現(xiàn)下列現(xiàn)象：結(jié)晶及生物活性喪失是蛋白質(zhì)變性的主要特征。疏水側(cè)鏈基團(tuán)外露。理化性

19、質(zhì)改變，粘度增加，分子伸展，溶解度降低、沉淀 。生理化學(xué)性質(zhì)改變。分子結(jié)構(gòu)伸展松散，易被蛋白酶水解。核酸變性指核酸雙螺旋區(qū)的氫鍵斷裂，變成單鏈，不涉及共價(jià)鍵斷裂。變性因素： 熱變性 酸堿變性（pH小于4或 大于11）變性劑（尿素、鹽酸 胍、甲醛） 變性后的理化性質(zhì)： 260nm吸收值升高。 粘度降低，浮力密度 升高。二級(jí)結(jié)構(gòu)改變，部分失活。 DNA的變性是爆發(fā)式的，變性作用發(fā)生在一個(gè)很窄的溫度范圍內(nèi)。13變性機(jī)理：熱變性（往往是不可逆的）：多肽鏈?zhǔn)艿竭^分的熱振蕩，引起氫鏈破壞。酸堿變性：破壞了鹽鏈。有機(jī)溶劑：破壞水化膜，降低蛋白質(zhì)溶液介電常數(shù)。 變性劑：尿素和鹽酸胍，與多肽主鏈竟?fàn)帤滏I。破壞蛋

20、白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)。變性劑增加非極性側(cè)鏈在水中的溶解度，降低了維持蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)的疏水作用。SDS能破壞蛋白質(zhì)分子內(nèi)的疏水相互作用使非極性基團(tuán)暴露于介質(zhì)水中。15酶作為生物催化劑的特點(diǎn)（1） 催化效率高：酶催化反應(yīng)速度是相應(yīng)的無催化反應(yīng)的108-1020倍，并且至少高出非酶催化反應(yīng)速度幾個(gè)數(shù)量級(jí)。（2）專一性高：酶對(duì)反應(yīng)的底物和產(chǎn)物都有極高的專一性，幾乎沒有副反應(yīng)發(fā)生。（3）反應(yīng)條件溫和：溫度低于100，正常大氣壓，中性pH環(huán)境。（4）活性可調(diào)節(jié)：根據(jù)據(jù)生物體的需要，許多酶的活性可受多種調(diào)節(jié)機(jī)制的靈活調(diào)節(jié)，包括：酶量的調(diào)節(jié)、激素調(diào)節(jié)、反饋抑制、別構(gòu)調(diào)節(jié)、酶的共價(jià)修飾、酶的合成、活化與降解

21、等。（5） 有些酶的催化活性離不開輔酶、輔基、金屬離子。16中間絡(luò)合物學(xué)說 S+E ES P+E 在低底物濃度時(shí), 反應(yīng)速度與底物濃度成正比，表現(xiàn)為一級(jí)反應(yīng)特征。當(dāng)?shù)孜餄舛冗_(dá)到一定值，反應(yīng)速度達(dá)到最大值（Vmax），此時(shí)再增加底物濃度，反應(yīng)速度不再增加，表現(xiàn)為零級(jí)反應(yīng)。 17米氏方程:米氏常數(shù):（1）米氏常數(shù)的意義a.不同的酶具有不同Km值，它是酶的一個(gè)重要的特征物理常數(shù),只與酶的性質(zhì)有關(guān)，而與其濃度無關(guān)。b.Km值只是在固定的底物，一定的溫度和pH條件下，一定的緩沖體系中測(cè)定的，不同條件下具有不同的Km值。 c.Km值表示酶與底物之間的親和程度：Km值大表示親和程度小，酶的催化活性

22、低; Km值小表示親和程度大,酶的催化活性高。（同一種酶有幾種底物就有幾個(gè)Km值，其中Km值最小的底物一般稱為該酶的最適底物或天然底物） 一般情況下，1/Km可以近似地表示酶對(duì)底物的親和力大小， 1/Km愈大，表明親和力愈大。d.Km與Ks Km不等于Ks。在K3<<K2時(shí)， Km看作Ks，也只有此時(shí)1/Km 才可以近似表示酶與底物結(jié)合的難易程度。 e.Km與Km¢ 無抑制劑時(shí)，ES的分解速度與形成速度的比值符合米氏方程，為Km; 而有抑制劑時(shí)發(fā)生變化，則不符合米氏方程，為Km¢ 。f.Km和米氏方程的實(shí)際應(yīng)用 若已知某個(gè)酶的Km值，可以計(jì)算在某一個(gè)底物濃度時(shí)，

23、反應(yīng)速度相當(dāng)于最大反應(yīng)速度的百分率。g.Km可以幫助推斷某一反應(yīng)的方向和途徑:催化可逆反應(yīng)的酶，對(duì)正逆兩向底物的Km值往往是不同的。Ø 在可逆反應(yīng)中，兩個(gè)Km值中最小的反應(yīng)方向是該酶促反應(yīng)的主要方向。Ø 如果代謝途徑各酶的Km值已知，Km值最大的酶是限速酶。18酶活性部位的特點(diǎn)：（1）活性部位在酶分子的總體中只占相當(dāng)小的部分， 往往只占整個(gè)酶分子體積的1%-2% ；（2）酶的活性部位是一個(gè)三維實(shí)體，具有三維空間結(jié) 構(gòu)。 活性中心的空間構(gòu)象不是剛性的，在與底物 接觸時(shí)表現(xiàn)出一定的柔性和運(yùn)動(dòng)性。（鄒承魯研究酶變性的工作） （3）通過誘導(dǎo)契合酶和底物結(jié)合；（4）酶的活性部位是位于

24、酶表面的一個(gè)裂隙內(nèi)，裂隙內(nèi)是一個(gè)相當(dāng)疏水的環(huán)境，從而有利于同底物的結(jié)合；（5）底物通過次級(jí)鍵較弱的力結(jié)合到酶上。酶催化反應(yīng)的獨(dú)特性質(zhì)（1）酶反應(yīng)分為兩類：僅涉及電子轉(zhuǎn)移和涉及電子和質(zhì)子兩者或者其他基團(tuán)的轉(zhuǎn)移。（2）催化作用是以氨基酸側(cè)鏈上的功能基團(tuán)和輔酶 為媒介。（3）酶催化反應(yīng)的最適pH范圍通常狹小。（4）酶分子很大，而活性部位通常只比底物稍大一些，一個(gè)巨大的酶結(jié)構(gòu)對(duì)穩(wěn)定活性部位的構(gòu)象是必要的。（5）酶具有復(fù)雜的折疊結(jié)構(gòu)。19Chargaff 規(guī)律 1） 所有生物的DNA中，A=T，G=C，A+C=G+T，且A+G=C+T。（2） DNA的堿基組成具有種的特異性。（3） DNA堿基組成沒有組

25、織和器官的特異性。（4） 年齡、營(yíng)養(yǎng)狀況、環(huán)境等因素不影響DNA的堿基組成。 20DNA的雙螺旋模型特點(diǎn)（1）兩條反向平行的多聚核苷酸鏈沿一個(gè)假設(shè)的中心軸右旋相互盤繞而形成。（2）磷酸和脫氧核糖單位作為不變的骨架組成位于外側(cè)，作為可變成分的堿基位于內(nèi)側(cè)，鏈間堿基按AT，GC配對(duì)（堿基配對(duì)原則，Chargaff定律）（3）螺旋直徑2nm，相鄰堿基平面垂直距離0.34nm,螺旋結(jié)構(gòu)每隔10個(gè)堿基對(duì)（base pair, bp）重復(fù)一次，間隔為3.4nm。大溝：寬1.2nm ，深0.85nm；小溝 ：寬0.6nm，深0.75nm。大溝和小溝分別指雙螺旋表面凹下去的較大溝槽和較小溝槽。小溝位于雙螺旋的

26、互補(bǔ)鏈之間,而大溝位于相毗鄰的雙股之間。堿基平面與縱軸垂直，糖環(huán)平面與縱軸平行；兩條核苷酸鏈之間依靠堿基間的氫鏈結(jié)合在一起；螺圈之間主要靠堿基平面間的堆積力維持。穩(wěn)定雙螺旋結(jié)構(gòu)的因素堿基堆積力形成疏水環(huán)境（主要因素） 。堿基配對(duì)的氫鍵。GC含量越多，越穩(wěn)定。磷酸基上的負(fù)電荷與介質(zhì)中的陽(yáng)離子或組蛋白的正離子之間形成離子鍵，中和了磷酸基上的負(fù)電荷間的斥力，有助于DNA穩(wěn)定。堿基處于雙螺旋內(nèi)部的疏水環(huán)境中，可免受水溶性活性小分子的攻擊。21影響DNA的Tm值的因素DNA均一性 均一性高，變性的溫度范圍越窄，據(jù)此可分析DNA的均一性 。G-C含量與Tm值成正比測(cè)定Tm，可推知G-C含量。G-C%=(Tm-69.3)×2.44介質(zhì)中離子強(qiáng)度離子強(qiáng)度高，Tm高,熔解過程發(fā)生在一個(gè)較小的溫度范圍內(nèi)。因此，DNA一般在含鹽緩沖液保存較為穩(wěn)定。24。細(xì)胞膜受體途徑 含氮激素及前列腺素 這種作用反應(yīng)速度快（幾分鐘），通過生成cAMP而立刻作用于機(jī)體組織。含氮激素與受