HPLC法測定不同產(chǎn)地桃仁中苦杏仁苷的含量_葉晶晶

1、第 29卷 第 1期 2011年 1月中 華 中 醫(yī) 藥 學(xué) 刊CH I NESE ARCH I VES O F TRAD I T I O NAL CH I NESE M E D I C I NEVo. l 29No . 1Jan. 2011206 中 華 中 醫(yī) 藥 學(xué) 刊HPLC 法測定不同產(chǎn)地桃仁中苦杏仁苷的含量葉晶晶(浙江 中醫(yī)藥大學(xué) , 浙江 杭州 310053摘 要 :目的 :建立不同產(chǎn)地桃仁中苦杏仁苷含量的高效液相 測定方法 , 測定不同產(chǎn)地桃仁藥材中苦杏仁苷的含量 。 方法 :色譜柱 Hype rsil B D S C 18(250mm 4. 6mm, 5L m, 流動相 為乙

2、腈 -水 (17B 83 。 結(jié)果 :苦杏仁 苷在 4. 9480L g /mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好 , r=0. 9996, 平均回收率為 99. 87%, RSD =1. 01%。 含量測定結(jié)果表明 , 不同產(chǎn)地 桃仁藥材中苦杏仁苷含量存在差異 。 結(jié)論 :該方法簡便快捷 , 準確靈敏 , 重復(fù)性好 , 可用于桃仁藥材的質(zhì)量控制 。 關(guān)鍵詞 :桃 仁 ; 苦杏仁苷 ; HPLC 法 ; 含量測定中圖分類號 :R284. 1 文獻標識碼 :A 文章編號 :1673-7717(2011 01-0206-02D eter m i n ati o n of Am ygdal i n P runus

3、 p ersica l (L . Batsch Pr oduced i nD iffer ent A r eas by HPLCYE Ji ng-ji ng(Zhejiang C h i nes e M edica lUnivers it y , H angz hou 310053, Zhejiang , Ch i naA bstrac t :O b jecti ve :To de t e r m ine quan tita tively the conten t of a m ygda lin i n P runus pers ica l fo r m t hree differen t a

4、 reas (Y unnan , Shanx , i Shandong. M et hod:Chro m a t og rap colu mn H ype rsil BD S C 18(250mm 4. 6mm, 5L m w as used ,mobil e pha se w as A ce t onitrile :w a t e r(17:83. R esult :The linea r range of amygda lin w as 4. 94-80L g /m L , r =0. 9996. T he average recove ry o f sa m ple w as 99. 8

5、7%, RSD =1. 01%.The conten ts o f Amygdali n w ere differen t obv i ousl y i n sa mp l e s from d iffe rent areas . Concl usion :This me t hod is si mp l e , separated com plete l y and rep roducibility , and can be used a s quantity contro l standard .K ey w ords :P runu s pers ica (L . Ba tsch ; A

6、m ygda lin ; HPLC ; de ter m inati on 收稿日期 :2010-08-27:(-女 , , 師 , , 研桃仁為薔薇科植物桃 P runus persica (L . Bats eh 或山桃 P. davidiana (Carr . F ranch . 的干 燥成熟種 子。其味 苦、 甘 ,性平 , 具有活血化瘀、 潤腸通便等功效 , 主治經(jīng)閉、 痛經(jīng)、 腹部 腫塊、 跌打損傷、 肺癰、 腸癰等 癥。現(xiàn) 代研究表明 , 其主要 有 效成分為苦杏仁苷 1, 具有抗腫瘤、 抗?jié)儭?調(diào)節(jié)免疫和抗腦 缺血等作用 2-5。本文采用 HPLC 法 , 對不同產(chǎn)地的桃 仁

7、藥 材中苦杏仁苷的含量進行測定 , 旨在比較不同產(chǎn)地桃仁藥材 的品質(zhì)差異 , 為篩選優(yōu)質(zhì)桃仁種質(zhì)資源提供參考。1 儀器和試藥島津 LC -10AD 液 相色譜 儀 , LC -10A DV P 泵 , SPD -10A 紫外檢測器 , KQ -5200型超 聲波 清洗 器 (40k H z , 200W, 昆山超聲儀器 有限公司 , AB135-S 電子 分析天平 (梅 特勒 -托利多儀器有限公司 。苦杏仁苷對 照品 (中 國藥 品生 物制 品檢 定所 產(chǎn)品 , 供 含量測定用 , 批號 :110820-200403 。本 實驗桃 仁經(jīng) 本校 資源鑒 定 教 研 室 俞 冰 副 教 授 鑒 定

8、 為 桃 仁 Prunus pers ica (L . Batseh 。乙腈 (色 譜純 , 天津 四友 精細 化學(xué) 品有 限公 司 , 其它試劑均為分析純。 2 方法和結(jié)果2. 1 色 譜條 件及 系統(tǒng) 適應(yīng) 性試 驗 色 譜柱 :Hypersil BD SC 18(250mm 4. 6mm , 5L m ; 流動相 :乙腈 -水 (17B 83; 流 速 :1. 0m L #m i n -1, 檢 測波 長 為 210n m; 柱 溫 :25e ; 進 樣 量 :10L L 。在此色譜條件下 , 測定 對照品 溶液、 供試品 溶液 的色譜圖 , 結(jié)果見 圖 1。理論 塔板 數(shù)以 苦杏 仁苷

9、 峰計 均在 3000以上。2. 2 對照品溶液 的制備 精 密稱 取苦杏 仁苷 對照 品 4. 0m g , 置 25mL 量瓶中 , 加甲 醇溶液稀釋 至刻度 , 定 容 , 混 勻 , 即得苦杏仁苷含量為 0. 16m g /m L 的對照品溶液。 2. 3 供試品溶液的 制備 精 密稱 取桃 仁粗 粉 0. 5g, 置索 氏提取器中 , 用乙醚提 取 2h , 棄去 乙醚 , 再用 甲醇 提取 6h , 提取液轉(zhuǎn)移至 50m L 量瓶 中 , 用 50%的甲 醇溶液 稀釋 至制 度 , 搖 勻 , 超 聲 提 取 15m in , 放 至 室 溫 后 , 0. 45L m 微 膜 濾

10、過 6-7, 得供試品溶液。 2. 4標準曲線的 繪制 精密 稱取 苦杏 仁苷 對照 品溶 液 , 對半稀釋 , 用 50%的 甲醇稀 釋至刻 度 , 取 10L L 進 樣 , 測定 峰面積。以苦杏仁苷 濃度 為橫坐 標 (X , 峰 面積 值 (Y 為 縱坐標 , 得回歸方程 Y =6. 9504X +0. 4711, r =0. 9996, 結(jié) 果表明苦杏仁苷在 4. 9480L g /mL 范圍內(nèi) 線性關(guān)系良好。 2. 5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液 10L L , 平行進樣 6次 , 按 /2. 10項色譜條件測定苦杏仁苷峰面積 , 結(jié)果 RSD 為 0. 72%, 表明儀器的精

11、密度良好。. 6 , 30項方 法制備供 5份 , , 結(jié)果第 29卷 第 1期2011年 1月中 華 中 醫(yī) 藥 學(xué) 刊CH I NESE ARCH I VES O F TRAD I T I O NAL CH I NESE M E D I C I NEVo. l 29No . 1Jan. 2011 207 中 華 中 醫(yī) 藥 學(xué) 刊RSD 為 2127%。圖 1苦杏仁苷對照品 (A 和桃仁樣品 (B 的 HPL C 色譜圖2. 7 穩(wěn)定性試 驗 取 同一 供試 品溶 液 , 依次 在 0、 2、 4、 8、 12、 24h 進 樣 10L L , 按上述色譜條件測定峰面 積 , 得 RSD

12、為2. 51%, 表明供試品溶液在 24h 內(nèi)穩(wěn)定。 2. 8加樣回收試驗 精 密稱取已知含 量的同一桃 仁粗粉 6份 , 每份約 0. 1g, 分別 加入等 量的 苦杏仁 苷對 照品 溶液 , 按 /2. 30項制備供試品溶液 , 按上述色 譜條件 測定峰 面積 , 計算加 樣 回 收 率 , 結(jié) 果 平 均 回 收 率 為 99. 87%, RSD 為 1. 01%。 2. 9 樣 品的測定 分別精 密稱取不同 產(chǎn)地的桃 仁藥材各 0. 5g , 按 /2. 30項方法制 備供試 品溶液 , 按 上述色譜 條件測 定峰面積 , 計算苦杏 仁苷的含量 , 結(jié)果見表 1。 表 1不同產(chǎn)地桃仁中

13、苦杏仁苷的含量測定結(jié)果 (n =3產(chǎn)地 苦杏仁苷含量 (%RSD (% 云南 0. 791. 12河北 11. 060. 96河北 20. 821. 36河北 30. 880. 61安徽 1. 281. 97山東 10. 691. 62山東 20. 631. 11陜西 11. 380. 86陜西 21. 651. 333 討 論(1 本實驗研 究結(jié)果 表明 , 不 同產(chǎn) 地桃 仁藥 材中 苦杏 仁苷的含量具有一定差 異 , 陜西產(chǎn) 桃仁藥材 中苦杏 仁苷含 量普遍較高 , 為山東產(chǎn)桃仁的 2倍多 , 而同一產(chǎn)地的藥材則 在含量差異上較小 , 這可能與其生長環(huán)境和栽培技術(shù)有關(guān)。(2 苦杏仁苷的含

14、量測定方 法有多 種 , 如 薄層掃 描法、 掃描法測定苦杏仁苷含量 , 操 作繁瑣、 對較差 ; 采用硝酸銀滴定法間接測定苦杏仁苷含量 , 樣品前處理條件較為困 難 , 且滴 定條 件影 響因 素較 多 , 重 復(fù)性 較 差 ; 而分光光度法等 , 同樣存 在中藥 多組分 干擾等 問題 , 適 用性亦差 8-10。而高效液相色譜法具有 適應(yīng)范 圍廣、 分離 效能高、 重復(fù)性良好等優(yōu)點 , 是目前含量測定的主要方法之 一 , 已經(jīng)在中藥研究 中得 到了廣 泛的 應(yīng)用。本實 驗根 據(jù)苦 杏仁苷的 結(jié)構(gòu)特點及性 質(zhì) , 結(jié)合 HPLC 法 對苦杏 仁苷 的研 究基礎(chǔ) , 采用 HPLC 法測定不同

15、產(chǎn)地桃仁中 苦杏仁苷含 量 , 為開發(fā)利 用桃仁、 苦杏仁苷及評價桃仁質(zhì)量、 臨床合理用藥 提供科學(xué)依據(jù)。 參考文獻1 邢國秀 , 李楠 , 楊美燕 , 等 . 天然苦 杏仁苷的 研究進展 J .中成藥 , 2003, 25(12:1007-1009.2 連彥軍 , 陳道達 , 黃韜 , 等 . B -葡萄糖苷酶激活苦杏仁苷誘導(dǎo)Lo V o 細胞凋亡及活性對 B ax 與 bcl 22基因表 達和 C aspas e -23的影響 J .腫瘤防治雜志 , 2005, 12(6:413-416. 3 蔡瑩 , 李運 曼 , 鐘 流 , 等 . 苦 杏仁 苷對 實 驗性 胃 潰瘍 的 作用J .

16、中國藥科大學(xué)學(xué)報 , 2003, 34(3:254-256.4 方偉蓉 , 李運曼 , 鐘林霖 , 等 . 苦杏仁 苷對佐劑 性炎癥影 響的實驗研究 J .中國臨床藥 理學(xué)與治 療學(xué) , 2004, 9(3:289-293.5 楊小平 , 張春梅 , 馮霞 . 苦杏仁苷口服制劑臨床療效初探 J .中藥材 , 2006, 29(6:636-637.6 國家藥典委員會 . 中華 人民共和 國藥典 #1部 S.北 京 :化學(xué)工業(yè)出版社 , 2005:196.7 吳巧鳳 , 文欣欣 , 余陳歡 , 等 . 桃核承 氣湯中桃 仁單煎與 桃仁甘草合煎的苦杏仁苷含 量變化研 究 J .浙 江中醫(yī)藥 大學(xué)學(xué)

17、報 , 2009, 33(5:738-740.7 李吉來 , 于留榮 . 苦杏仁 和桃仁中 苦杏仁苷 的薄層掃 描測定J . 中藥材 , 1992, 15(1:31.8 C air n s T , Froberg J , Gonzal es S , et a. l An al ytical Che m istry ofAmygdalin J .Anal ytica lChe m istry , 1978, 50(2:317. 9 楊玲 玲 , 常 軍民 , 姚軍 . HPLC 測定 天山 花楸 中 的苦 杏 仁苷J . 華西藥學(xué)雜志 , 2007, 22(5:589-590.兩種與皮膚基細胞癌相關(guān)的遺傳變異被發(fā)現(xiàn)冰島 研究人員日前宣布 , 他們新發(fā)現(xiàn)兩種遺傳變異 , 體 內(nèi)同時存在這兩種變異的人患皮膚基細胞癌的風(fēng)險比常人 要高出近 3倍。冰島 /遺傳解碼 0公司的研究人 員在新一 期英國 5自然 遺