實(shí)驗(yàn)二通課-2013-4ppt課件

1、一、抗酸染色一、抗酸染色 (2.5(2.5學(xué)時(shí)學(xué)時(shí)) ) 每人一張玻片。每人一張玻片。二、腸道致病菌的分離培養(yǎng)二、腸道致病菌的分離培養(yǎng) (1.5(1.5學(xué)時(shí)學(xué)時(shí)) ) SS SS培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：8 8個(gè)個(gè) 糞便標(biāo)本：糞便標(biāo)本：8 8管管 糞便標(biāo)本：大腸桿菌和乙型副糞便標(biāo)本：大腸桿菌和乙型副傷寒沙門(mén)菌傷寒沙門(mén)菌第二次實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容第二次實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容3 3個(gè)）個(gè)）三、細(xì)菌的分布與消毒三、細(xì)菌的分布與消毒 (1學(xué)時(shí)學(xué)時(shí)) 手指消毒：酒精、碘酒、新潔爾滅手指消毒：酒精、碘酒、新潔爾滅1. 1. 空氣中細(xì)菌的檢查空氣中細(xì)菌的檢查 普通平板：普通平板：1 1個(gè)個(gè)2. 2. 咽喉部細(xì)菌的檢查咽喉部細(xì)菌的檢查 血平

2、板：血平板：2 2個(gè)個(gè) 3. 3. 手指消毒前后的細(xì)菌學(xué)檢查手指消毒前后的細(xì)菌學(xué)檢查 普通平板：普通平板：4 4個(gè)個(gè) 三三. . 細(xì)菌的分布與消毒細(xì)菌的分布與消毒 一一. . 抗酸染色抗酸染色 二二. . 腸道致病菌的分離培養(yǎng)腸道致病菌的分離培養(yǎng) 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握抗酸染色的操作方法。掌握抗酸染色的操作方法。2.熟悉抗酸染色的原理。熟悉抗酸染色的原理?？箍?酸酸 染染 色色 v分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，主要是分分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌枝菌酸，它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要通過(guò)加熱和延長(zhǎng)染色時(shí)間

3、來(lái)促一般不易著色，要通過(guò)加熱和延長(zhǎng)染色時(shí)間來(lái)促使其著色。但分枝菌酸與染料結(jié)合后，很難被酸使其著色。但分枝菌酸與染料結(jié)合后，很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色。性脫色劑脫色，故名抗酸染色。v齊齊- -尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅結(jié)合成牢固復(fù)合物，用石炭酸復(fù)紅結(jié)合成牢固復(fù)合物，用3%3%鹽酸酒精處鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再用堿性美藍(lán)復(fù)染后，分枝桿菌理也不脫色。當(dāng)再用堿性美藍(lán)復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其它細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為藍(lán)色。仍然為紅色，而其它細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為藍(lán)色。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 細(xì)菌：卡介苗 染液：石炭酸復(fù)紅液、3

4、%鹽酸酒精、堿性美藍(lán)溶液 其它：接種環(huán)、酒精燈、載玻片，玻片夾等三、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)材料1 1、細(xì)菌涂片的制備、細(xì)菌涂片的制備 涂片涂片 枯燥枯燥 固定固定 2 2、染色、染色1 1初染：用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅初染：用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅2-2-3 3滴，在火焰高處滴，在火焰高處2 210cm10cm徐徐加熱，切勿沸騰，徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時(shí)離開(kāi)，加熱出現(xiàn)蒸汽即暫時(shí)離開(kāi)，加熱3 35min5min，若染液蒸發(fā)，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，待標(biāo)本冷卻后用水減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。沖洗。2 2脫色：脫色：3%3%鹽酸酒精脫

5、色鹽酸酒精脫色30s30s1min1min；用水沖洗。；用水沖洗。3 3復(fù)染：用堿性美藍(lán)溶液復(fù)染復(fù)染：用堿性美藍(lán)溶液復(fù)染1min1min；用水沖洗后用吸；用水沖洗后用吸水紙吸干。水紙吸干。四、方法與步驟與革蘭染色的區(qū)別）四、方法與步驟與革蘭染色的區(qū)別） 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 未染色未染色 初染后初染后 脫色后脫色后 復(fù)染后復(fù)染后初染初染脫色脫色復(fù)染復(fù)染石石炭炭酸酸復(fù)復(fù)紅紅鹽酸酒精鹽酸酒精堿性美藍(lán)堿性美藍(lán) 結(jié)核桿菌呈紅色，常堆積成團(tuán)，排列無(wú)序，偶呈分枝結(jié)核桿菌呈紅色，常堆積成團(tuán)，排列無(wú)序，偶呈分枝狀生長(zhǎng)。背景及非抗酸性細(xì)菌呈藍(lán)色。狀生長(zhǎng)。背景及非抗酸性細(xì)菌呈藍(lán)色。 六、本卷須知六、本卷須知

6、1 1、無(wú)菌操作、無(wú)菌操作2 2、染色時(shí)間要充分、染色時(shí)間要充分3 3、初染時(shí)加熱勿沸騰勿干涸、初染時(shí)加熱勿沸騰勿干涸二、腸道致病菌的分離培養(yǎng)二、腸道致病菌的分離培養(yǎng) （88頁(yè)）頁(yè)） 一一. .腸道桿菌的生物學(xué)性狀腸道桿菌的生物學(xué)性狀 二二.S-S.S-S培養(yǎng)基的特性及用途培養(yǎng)基的特性及用途 三三. .分離培養(yǎng)方法分離培養(yǎng)方法 主要內(nèi)容主要內(nèi)容一一. .腸道桿菌的生物學(xué)性狀腸道桿菌的生物學(xué)性狀 埃希菌屬：大腸埃希菌埃希菌屬：大腸埃希菌沙門(mén)菌屬：傷寒沙門(mén)菌沙門(mén)菌屬：傷寒沙門(mén)菌 甲型、乙型副傷寒沙門(mén)菌甲型、乙型副傷寒沙門(mén)菌志賀菌屬：痢疾志賀菌志賀菌屬：痢疾志賀菌腸桿菌科重要菌屬及代表菌種腸桿菌科重

7、要菌屬及代表菌種1 1、相似的形態(tài)染色、相似的形態(tài)染色從形態(tài)上無(wú)法區(qū)別從形態(tài)上無(wú)法區(qū)別 乳糖發(fā)酵試驗(yàn)乳糖發(fā)酵試驗(yàn) 初步鑒別腸道致病菌和腸道非致病菌初步鑒別腸道致病菌和腸道非致病菌 腸道致病菌腸道致病菌 腸道非致病菌腸道非致病菌 多數(shù)不發(fā)酵乳糖多數(shù)不發(fā)酵乳糖 多數(shù)發(fā)酵乳糖多數(shù)發(fā)酵乳糖 2 2、活潑的生化反應(yīng)、活潑的生化反應(yīng) -/+ - +傷寒桿菌傷寒桿菌 - - +痢疾桿菌痢疾桿菌 - 大腸桿菌大腸桿菌 硫化氫硫化氫 乳糖乳糖 葡萄糖葡萄糖 菌名菌名 三種細(xì)菌的生化反應(yīng)三種細(xì)菌的生化反應(yīng) v膽鹽抑制膽鹽抑制G+,G+,枸櫞酸鈉和枸櫞酸鈉和煌綠能部分抑制大腸桿菌煌綠能部分抑制大腸桿菌, ,致病的沙

8、門(mén)菌和志賀菌能致病的沙門(mén)菌和志賀菌能大量生長(zhǎng)。大量生長(zhǎng)。v中性紅指示劑和乳糖中性紅指示劑和乳糖, ,中中性紅遇酸變粉紅。性紅遇酸變粉紅。v常用于腸道致病菌的分離常用于腸道致病菌的分離培養(yǎng)。培養(yǎng)。 二、二、S-SS-S培養(yǎng)基的特性及用途培養(yǎng)基的特性及用途細(xì)菌細(xì)菌 SSSS平板平板大腸桿菌大腸桿菌 粉紅色大菌落粉紅色大菌落痢疾桿菌痢疾桿菌 無(wú)色細(xì)小無(wú)色細(xì)小 半透明菌落半透明菌落傷寒桿菌傷寒桿菌 無(wú)色細(xì)小無(wú)色細(xì)小 半透明菌落半透明菌落 S-SS-S培養(yǎng)基中菌落特點(diǎn)：培養(yǎng)基中菌落特點(diǎn)： 大腸桿菌大腸桿菌痢疾桿菌痢疾桿菌v 將糞便標(biāo)本以平板分區(qū)劃線法接種到SS培v 養(yǎng)基。v (每個(gè)實(shí)驗(yàn)室8個(gè)SS平板，每

9、組做好標(biāo)記，班長(zhǎng)用膠布按班級(jí)綁好)v 放入37溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)。取出放4冰 箱中保存?zhèn)溆?。三、分離培養(yǎng)方法三、分離培養(yǎng)方法三、細(xì)菌的分布與消毒三、細(xì)菌的分布與消毒1.1.細(xì)菌在自然界的分布細(xì)菌在自然界的分布 2.2.化學(xué)因素對(duì)細(xì)菌的影響化學(xué)因素對(duì)細(xì)菌的影響 1. 1. 空氣中細(xì)菌的檢查：空氣中細(xì)菌的檢查： （4242頁(yè)，每個(gè)班頁(yè)，每個(gè)班1 1個(gè)普通瓊脂培養(yǎng)基）個(gè)普通瓊脂培養(yǎng)基） 原理：空氣中攜帶有微生物的氣溶膠粒子在地心引力的作用原理：空氣中攜帶有微生物的氣溶膠粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到瓊脂培養(yǎng)基上。下，以垂直的自然方式沉降到瓊脂培養(yǎng)基上。 方法：在室內(nèi)選擇一處放一個(gè)平皿

10、。打開(kāi)皿蓋，使培養(yǎng)基面方法：在室內(nèi)選擇一處放一個(gè)平皿。打開(kāi)皿蓋，使培養(yǎng)基面向上暴露在空氣中向上暴露在空氣中15min15min，即蓋上皿蓋，即蓋上皿蓋，3737倒置培養(yǎng)倒置培養(yǎng)2424小小時(shí)，觀察結(jié)果。時(shí)，觀察結(jié)果。每個(gè)班每個(gè)班2 2個(gè)血液瓊脂培養(yǎng)基個(gè)血液瓊脂培養(yǎng)基取血瓊脂平板取血瓊脂平板1 1塊，打開(kāi)平皿蓋，將培養(yǎng)基面置于口腔前塊，打開(kāi)平皿蓋，將培養(yǎng)基面置于口腔前10cm10cm處，受試者用力咳嗽幾次；處，受試者用力咳嗽幾次；蓋上平皿蓋，置蓋上平皿蓋，置3737溫箱中倒置培養(yǎng)溫箱中倒置培養(yǎng)24h24h后取出觀察結(jié)果。后取出觀察結(jié)果。2. 2. 咽喉部細(xì)菌的檢查咽喉部細(xì)菌的檢查 方法：取一普通瓊脂培養(yǎng)基，方法：取一普通瓊脂培養(yǎng)基，一部分寫(xiě)上一部分寫(xiě)上“前前”，另一部分，另一部分寫(xiě)上寫(xiě)上“后后”，然后將手指在寫(xiě)，然后將手指在寫(xiě) 有有“前的部分按一下，再將前的部分按一下，再將 手指用酒精進(jìn)行消毒，待干手指用酒精進(jìn)行消毒，待干 后，在寫(xiě)有后，在寫(xiě)有“后的部分按一后的部分按一 下。放入下。放入3737溫箱培養(yǎng)溫箱培養(yǎng)2424小小時(shí)后觀察。時(shí)后觀察。 （4646頁(yè)，每個(gè)班頁(yè)，每個(gè)班4 4個(gè)平皿）個(gè)平皿） 3. 3.手指皮膚消毒前后的細(xì)菌學(xué)檢查手指皮膚消毒前后的細(xì)菌學(xué)檢查實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容：抗酸染色內(nèi)容：抗酸染色一、原理一