系膜增殖性腎炎白細(xì)胞介素6表達(dá)與細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生的研究

1、系膜增殖性腎炎白細(xì)胞介素6表達(dá)與細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生的研究關(guān)鍵詞系膜增殖性腎炎白細(xì)胞介素6細(xì)胞外基質(zhì) 系膜細(xì)胞增生、細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）聚積和擴(kuò)張是系膜增殖性腎小球腎炎（MsPGN）發(fā)生發(fā)展的重要病理基礎(chǔ)1。研究表明，系膜細(xì)胞可分泌具有生物活性的白細(xì)胞介素6(IL-6)，IL-6又可促進(jìn)系膜細(xì)胞生長(zhǎng)2。人類MsPGN中IL-6的表達(dá)及其與ECM之間的關(guān)系國(guó)內(nèi)外研究較少，我們觀察了MsPGN患者腎小球內(nèi)IL-6基因及蛋白表達(dá)狀況，分析其與系膜擴(kuò)張，系膜基質(zhì)成分型膠原（CIV）和纖維連接蛋白（FN）之間的關(guān)系。1材料和方法1.1腎組織標(biāo)本制備3MsPGN組12例，男9例、女3例，平均年齡26.8歲。所選

2、病例經(jīng)腎活檢、按1982年WHO制定的腎小球疾病形態(tài)學(xué)分類確診為MsPGN。對(duì)照組8例，為男性移植腎供腎者，腎活檢證實(shí)為正常腎組織。腎組織按參考文獻(xiàn)3處理備用。1.2IL-6 mRNA原位雜交參照參考文獻(xiàn)4制備IL-6 cDNA探針（寡核苷酸特異探針序列由上海細(xì)胞生物研究所合成，DIG寡核苷酸3?末端標(biāo)記試劑盒購(gòu)自BM公司）4。按蔡文琴法3將4多聚甲醛固定后的冰凍切片常規(guī)處理后行原位雜交，陰性對(duì)照以不加探針的雜交液同法操作。1.3IL-6、CIV和FN免疫組化染色按參考文獻(xiàn)3進(jìn)行。兔抗人IL-6多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)SantaGruze公司，鼠抗人FN、鼠抗人CIV以及三抗、二抗均購(gòu)自北京中山生物

3、試劑公司。1.4ECM嗜銀染色按常規(guī)進(jìn)行。1.5半定量分析采用EIG綜合象分析系統(tǒng)(重慶大學(xué)ICT中心)對(duì)照片上的陽(yáng)性雜交信號(hào)或染色信號(hào)進(jìn)行半定量分析。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPMP醫(yī)用統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)和相關(guān)分析。數(shù)據(jù)以s表示。2結(jié)果詳見(jiàn)表1表4。表1MsPGN腎小球與正常腎小球內(nèi)IL-6 mRNA表達(dá)的比較(陽(yáng)性信號(hào)面積占腎小球總面積百分比)組別nIL-6 mRNA（）MsPGN組124.10.5*正常對(duì)照組82.60.6 *P0.01與正常對(duì)照組比較 表2MsPGN組與正常對(duì)照組腎小球內(nèi)IL-6、CIV和FN蛋白表達(dá)結(jié)果比較(陽(yáng)性信號(hào)面積占腎小球總面積百分比)組別nIL-6(%)CIV(%)

4、FN(%)MsPGN組129.40.80.9*正常對(duì)照組 P0.01，*P0.05與對(duì)照組比較 表3MsPGN與正常腎組織腎小球ECM擴(kuò)張程度比較(ECM面積占腎小球總面積百分比)組別nECM面積占腎小球總面積百分比(%)MsPGN組1225.22.7正常對(duì)照組88.72.1 P0.001與對(duì)照組比較 表4IL-6表達(dá)與CIV、FN表達(dá)以及ECM擴(kuò)張的相關(guān)性（r）CIVFNECMIL-6蛋白表達(dá)IL-6 mRNA表達(dá)0.680.620.820.78IL-6蛋白表達(dá)0.690.600.81 P0.01 3討論系膜細(xì)胞可分泌IL-62，IL

5、-6反過(guò)來(lái)又可刺激系膜細(xì)胞增生，表明在腎臟局部IL-6可能以自分泌和旁分泌的方式影響系膜細(xì)胞的生物特性和ECM的變化。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在生理和病理狀態(tài)下，腎小球系膜細(xì)胞均可表達(dá)IL-6(在分子和蛋白水平表達(dá)一致，二者顯著正相關(guān))，但在MsPGN中的表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組，且在MsPGN中CIV和FN的表達(dá)也明顯增高，ECM擴(kuò)張明顯；CIV、FN的表達(dá)和ECM的擴(kuò)張與IL-6在分子和蛋白水平的表達(dá)都有顯著正相關(guān)。提示腎小球系膜細(xì)胞異常自分泌的IL-6，可能是刺激系膜基質(zhì)成分過(guò)度增生和聚積的重要介質(zhì)之一，從而導(dǎo)致了ECM的異常擴(kuò)張，形成了腎小球硬化的病理基礎(chǔ)5。作者單位：第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究

6、所腎內(nèi)科(重慶，400042)參考文獻(xiàn)1FogoA.Internephronheterogeneityofgrowthfactorandsclerosis.KidneyInt，1994，45（Suppl 45）：S-242HoriiY，MuraguchiA，IwanoMetal.InvolvementofIL-6inmeasangialproliferativeglomerulonephritis.JImmunol，1989，143：39493蔡文琴，王伯云主編.實(shí)用免疫細(xì)胞化學(xué)與核酸分子雜交技術(shù).重慶：四川科技出版社，19944譚駿主編.DNA重組技術(shù).第三軍醫(yī)大學(xué)分子遺傳學(xué)教研室，19935吳小