原料藥中雜質(zhì)的控制與案例分析--中國藥品生物制品檢定所--胡昌勤

1、抗生素室抗生素室純度控制純度控制雜質(zhì)控制雜質(zhì)控制雜質(zhì)譜雜質(zhì)譜控制控制第一次飛躍第一次飛躍第二次飛躍第二次飛躍抗生素室頭孢泊肟酯有關(guān)物質(zhì)分析的頭孢泊肟酯有關(guān)物質(zhì)分析的HPLC色譜圖色譜圖1=頭孢泊肟，2=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，3=頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，4=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+3異構(gòu)體，5=頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+反式頭孢泊肟酯A，6=反式頭孢泊肟酯B，7=N-甲酰基頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，8=NAC-CPOD-PRX異構(gòu)體A，9=N-甲酰基頭孢泊肟酯異構(gòu)體B，10=N-乙?；^孢泊肟酯異構(gòu)體B，11=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體A，12=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體B抗生素室雜質(zhì)譜控制的整體解決方案雜質(zhì)譜控

2、制的整體解決方案抗生素室uQ3A： 新原料藥中的雜質(zhì)新原料藥中的雜質(zhì)uQ3B： 新藥制劑中的雜質(zhì)新藥制劑中的雜質(zhì)uQ3C： 殘留溶劑殘留溶劑化學(xué)藥品雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則化學(xué)藥品雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室（以原料藥的響應(yīng)因子計(jì)）抗生素室抗生素室抗生素室NSOHHOHNNSNOH2NCH3OCH3OCO2Na抗生素室HNOR1NSOCOOHR2HNOR1HNSOCOOHR2HNOR1H2CHNSR2COOHOHNSCOOHR2OR1CONHNSCOOHR2OR1CONHHHB:抗生素室NSCOOHR2OR1CONHHHNSCOOHR2OR1CONHHNSCOOHR2R

3、1CONHHNSCOOHR2OR1CONHHHO-抗生素室HNCOHCNH2R1NSOCOOHR2R1NHHNOO分子結(jié)構(gòu)中7位碳側(cè)鏈上有-氨基的頭孢菌素，如頭孢氨芐、頭孢羥氨芐、頭孢拉定、頭孢來星、頭孢克羅等藥物，還可發(fā)生分子內(nèi)親核反應(yīng)，生成哌嗪二酮衍生物的降解物 抗生素室NSCOOHRNHNH2OO6NHNH2O6OHN6NHO具有苯苷氨酸側(cè)鏈的-內(nèi)酰胺抗生素可以降解為2-羥基-3-苯基吡嗪衍生物，這種化合物具有熒光特性，頭孢克洛、氯碳頭孢均會產(chǎn)生這種降解產(chǎn)物。 抗生素室HNOR1NSOCOOHCH2OCOCH3HNOR1NSOCOOHCH2OHHNOR1NSOCH2OO當(dāng)3位碳上的取代基

4、為乙酰氧甲基時(shí)，易脫去乙酰基，形成脫乙?；到馕铩Ｔ诩訜?、酸性等條件下，可進(jìn)一步進(jìn)行分子內(nèi)部環(huán)和，此時(shí)生成的主要降解產(chǎn)物為內(nèi)酯。 抗生素室頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢它啶、頭孢地尼等有甲氧亞氨鍵的頭孢菌素均會產(chǎn)生E-異構(gòu)體，多數(shù)在光照的情況易發(fā)生此類反應(yīng)。 抗生素室HNOR1NSOCOOHCH2OCOCH3HNOR1NSOCOOHCH2OHHNOR1NSOCH2OO當(dāng)3位碳上的取代基為乙酰氧甲基時(shí)，易脫去乙?；?，形成脫乙酰基降解物。在加熱、酸性等條件下，可進(jìn)一步進(jìn)行分子內(nèi)部環(huán)和，此時(shí)生成的主要降解產(chǎn)物為內(nèi)酯。 1. 雜質(zhì)雜質(zhì)B、雜質(zhì)、雜質(zhì)E可以源于頭孢噻肟的降解可以源于頭孢噻肟的降解抗生素室抗生素

5、室抗生素室2. 雜質(zhì)雜質(zhì)E可以源于起始原料可以源于起始原料3. 雜質(zhì)雜質(zhì)E可以源于合成中的可以源于合成中的任一中間過程任一中間過程抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室加替沙星及其十種雜質(zhì)對照品的色譜圖加替沙星及其十種雜質(zhì)對照品的色譜圖加替沙星注射液雜質(zhì)譜分析加替沙星注射液雜質(zhì)譜分析 色譜條件：以三乙胺磷酸溶液 三乙胺溶液（1100），用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.30.05-乙腈（87：13）為流動相，檢測波長為325nm，柱溫為30，流速為每分鐘1ml。 色譜柱:SHISEIDO CAPCELL PAK C18抗生素室加替沙星及加替沙星及10個(gè)已知雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)式個(gè)已知雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)式 抗生素室主要雜質(zhì)

6、是雜質(zhì)主要雜質(zhì)是雜質(zhì)3和雜質(zhì)和雜質(zhì)8生產(chǎn)工藝雜質(zhì)生產(chǎn)工藝雜質(zhì)原料的雜質(zhì)譜分析原料的雜質(zhì)譜分析抗生素室光照穩(wěn)定性評價(jià)光照穩(wěn)定性評價(jià) 比較光照前后各雜質(zhì)含量的變化比較光照前后各雜質(zhì)含量的變化 按隨機(jī)取按隨機(jī)取19批樣品批樣品 UV燈下照射燈下照射10天天 雜質(zhì)雜質(zhì)2、雜質(zhì)雜質(zhì)4是與光照穩(wěn)定性密切相關(guān)的雜質(zhì)是與光照穩(wěn)定性密切相關(guān)的雜質(zhì) 大多數(shù)喹喏酮類抗生素對光不穩(wěn)定，什么是光降解雜質(zhì)？大多數(shù)喹喏酮類抗生素對光不穩(wěn)定，什么是光降解雜質(zhì)？抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室如何驗(yàn)證？如何驗(yàn)證？抗生素室JCPS，2010，19（4）：285292抗生素室抗生素室抗生素室藥物分析雜志，待

7、發(fā)表抗生素室抗生素室抗生素室JPBA，2009, 49(5): 11921202抗生素室抗生素室 抗生素室抗生素室JPBA，2008, 46(3):431-441抗生素室藥物雜質(zhì)的可能來源藥物雜質(zhì)的可能來源抗生素室抗生素室1.原料：原料：紅霉素 A、紅霉素 B、紅霉素 C、紅霉素D、紅霉素 E、紅霉素 F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F2.中間體：中間體：紅霉素A肟（Z）、6，9-亞胺醚、氮紅霉素A、紅霉素A肟（E）、紅霉素 C肟（E）、9，11-亞胺醚、紅霉素C 6，9-亞胺醚、紅霉素A內(nèi)酰胺 3.副產(chǎn)物：副產(chǎn)物：紅霉素-N-氧化物、N-去甲基紅霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、

8、氨基阿奇霉素A、N-甲?；?N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺?；⑵婷顾?、阿奇霉素N-氧化物、3-去（二甲氨基）- 3,4-去氫阿奇霉素、 O-甲苯磺?；t霉素肟、紅霉素Z肟重排物、氮紅霉素11，12-硼酸酯、 N，N-去二甲基N-甲?；⑵婷顾谹、丙基阿奇霉素、3-N， N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯4.降解產(chǎn)物：降解產(chǎn)物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮紅霉素、紅霉素8， 9-脫水-6，9-半縮酮、紅霉素6，9：9，12-螺縮酮阿奇霉素中可能存在的雜質(zhì)：阿奇霉素中可能存在的雜質(zhì)：37種種抗生素室模擬色譜圖色譜圖實(shí)際色譜圖實(shí)際色譜圖抗生素室抗生素室

9、抗生素室抗生素室抗生素室樣品樣品對照對照Kav=0抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室頭孢地嗪鈉頭孢地嗪鈉 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯 TSKgel G2000HHR 頭孢丙烯頭孢丙烯 TSKgel G2500PWXL 法羅培南法羅培南 TSKgel G2000HHR TSKgel G2000SWXL TSKgel G2000SWXL 抗生素室Sephadex G10 與TSK柱比較62G10柱結(jié)果與TSK柱結(jié)果的相關(guān)性13.70014.67815.54617.33420.11022.26026.973AU0.000.020.040.060.080.100.120.14分鐘0.002.004.006.0

10、08.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.00Sephadex G10 TSK聚合物其他聚合物二聚物抗生素室抗生素室頭孢泊肟酯有關(guān)物質(zhì)分析的頭孢泊肟酯有關(guān)物質(zhì)分析的HPLC色譜圖色譜圖1=頭孢泊肟，2=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，3=頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，4=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+3異構(gòu)體，5=頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+反式頭孢泊肟酯A，6=反式頭孢泊肟酯B，7=N-甲?；^孢泊肟酯異構(gòu)體A，8=NAC-CPOD-PRX異構(gòu)體A，9=N-甲?；^孢泊肟酯異構(gòu)體B，10=N-乙?；^孢泊肟酯異構(gòu)體B，11=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體頭孢泊肟

11、酯開環(huán)二聚體A，12=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體B抗生素室中國新藥雜志 ,2008,17(24):23抗生素室中國藥學(xué)雜志, 2009，44（23）：1821抗生素室抗生素室Sephadex G-10系統(tǒng)系統(tǒng)TSK-Gel G2000swxl系統(tǒng)系統(tǒng) 柱切換技術(shù)柱切換技術(shù)0.8ml/minTSK系統(tǒng)系統(tǒng)0.5ml/minC18系統(tǒng)系統(tǒng)抗生素室抗生素室抗生素室批次及批量批次及批量生產(chǎn)日期生產(chǎn)日期生產(chǎn)地點(diǎn)生產(chǎn)地點(diǎn)生產(chǎn)工藝生產(chǎn)工藝產(chǎn)品中單個(gè)雜質(zhì)含量及雜質(zhì)總量產(chǎn)品中單個(gè)雜質(zhì)含量及雜質(zhì)總量批次用途批次用途使用的分析方法使用的分析方法抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室利用色譜相關(guān)光譜法追蹤色利

12、用色譜相關(guān)光譜法追蹤色譜峰不同色譜系統(tǒng)中的位置譜峰不同色譜系統(tǒng)中的位置抗生素室抗生素室抗生素室u根據(jù)雜質(zhì)來源，產(chǎn)生條件，結(jié)合根據(jù)雜質(zhì)來源，產(chǎn)生條件，結(jié)合母核母核的質(zhì)譜裂解規(guī)律的質(zhì)譜裂解規(guī)律推斷雜質(zhì)的可能結(jié)構(gòu)推斷雜質(zhì)的可能結(jié)構(gòu)抗生素室頭孢菌素類抗生素質(zhì)譜裂解的一頭孢菌素類抗生素質(zhì)譜裂解的一般規(guī)律般規(guī)律 青霉素類抗生素質(zhì)譜裂解的一青霉素類抗生素質(zhì)譜裂解的一般規(guī)律般規(guī)律 抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室ACA，535：89-99, 2005抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室抗生素室Figure 4. Effects of MMTD and TDA on

13、the zebrafish embryonic development (3-dpf). A-D: The embryos treated with MMTD at 10 g/ml (A), 100 g/ml (B), 300 g/ml (C) and at 500 g/ml (D). E-H: the embryos treated with TDA at 100 g/ml (E,F), 300 g/ml (G) and at 500 g/ml (H); I,J: normal embryos as controls at a lateral view (I) and a dorsal vi

14、ew (J). Hemorrhage of brain areas is indicated by white arrow, opaque yolk and YE by red arrow, deficient eyes are by slight-blue arrows, colorless and cord-like hearts and enlarged pericardial sacs by yellow arrows, ripple-like notochords by orange arrows.抗生素室抗生素室抗生素室 (A) 5dpf 幼體頭部側(cè)面，示 眼窩上 (SO1 and SO2), 耳囊(O1) 和枕部的 (OC1)的神經(jīng)丘；(B) O1神經(jīng)丘毛細(xì)胞雙染色FM 1-43(紅) 和 Yo-Pro-1 (綠). (C) FM 1-43染色； (D). Yo-Pro-1 染色。 Scale bar = 50 um (A); 10 um (BD).Hearing Research 213 (2006) 2533抗生素室藥物耳毒性檢測藥物耳毒性檢測利用一種特殊染料對斑馬魚幼體頭部耳蝸區(qū)神經(jīng)丘毛細(xì)胞的染色，檢測毛細(xì)胞的存活狀態(tài)，來判斷檢測物的耳毒性。下圖中紅色圈示耳蝸區(qū)域；給藥組