淺談貧血病人的血液標本對配血方法的影響

1、淺談貧血病人的血液標本對配血方法的影響             【摘要】  為了比較貧血病人低紅細胞濃度對鹽水介質(zhì)配血及改良聚凝胺配血的影響，將30例貧血病人每人抽取的靜脈血4 ml，注入干試管2 ml，另外2 ml注入38%枸櫞酸鈉管作為交叉配血標本。干試管和枸櫞酸鈉管標本分別用離心機2500r/分鐘離心10分鐘，分離出血清盡量取足量的紅細胞50 l進行稀釋，病人紅細胞以鹽水稀釋成3%作為原液進行不同的稀釋并與O型血的血清作鹽水介質(zhì)配血及改良聚凝胺配血，測試兩種方

2、法出現(xiàn)凝集反應(yīng)。 結(jié)果表明： 從觀察結(jié)果看，鹽水配血法在紅細胞較高濃度時比聚凝胺的凝集結(jié)果難以觀察，紅細胞相對低濃度時聚凝胺配血比鹽水配血結(jié)果難以觀察。有2例在各個濃度的血球配血時都出現(xiàn)溶血，而干試管取血時，有部分標本沒辦法得到足量的紅細胞。結(jié)論： 由于貧血病人的標本紅細胞很少，紅細胞量不足會使配血結(jié)果難于觀察，容易造成配血假陰性。如果用干燥試管抽血樣，則血塊凝結(jié)，有時很難分離到紅細胞，如果用竹簽擠壓獲取紅細胞，則會造成標本溶血，同樣也會造成溶血性假陰性反應(yīng)。所以給貧血病人配血只能用枸椽酸鈉管采血。黃疸及溶血病人標本應(yīng)把紅細胞洗滌后再配血。 【關(guān)鍵詞】  貧血Influence of

3、  Blood Samples of Anemic Patients on Two Cross-matching MethodsDENG Guang-Quan Yuebei People Hospital.Shaoguan 512026，ChinaAbstrat To compare the influence between physiological saline cross-matching and modified polybrene cross-matching for low concentration erythrocytes in anemia patien

4、ts，4 ml venous blood was take out separately from each of 30  anaemia patients. 2 ml was injected to dry test tube，the other 2 ml to the tube with 38% of  sodium citrate for the sample of cross-matching.All samples had been centrifugated for 10 minutes at 2500r/min.The sera were separated&

5、#160; adn 50 ul of erythrocytes were aspirated. The erythrocytes of the patients were diluted to 3% with physiological saline as stock solution.After these solutions being diluted with serum of O blood group using physiological saline and polybrene as medium matching  blood，the occurrence of ag

6、glutination reaction would be tested.The results showed that reactionsof  physiological saline cross-matching is more difficult to be observed   than that of the polybrene cross-matching while erythrocytes with high concentration，however，it is opposite at low concentration of erythroc

7、ytes.Hemolysis appeared in two patients at cross-matching  erythrocytes with different concentrations.Some of samples could not reach to enough erythrocytes with dry tubes.It is concluded that  because of less erythrocytes in the sample of anaemia patients，it is more difficult to observe t

8、he results in cross-matching，and easy to  get  false negative reaction.Sometimes it is difficult to get enough erythrocytes by centrifugating as blood  sampting with dry tubes.There would be hemolysis and false negative reaction，if you take out erythrocytes by extruding with bamboo.Th

9、e only right way is using the tubes of sodium citrate for cross-matching of anemia patients.Key words  anaemia  modified polybrene cross-matching;  physiological saline cross-matching  hemolysis對貧血病人來說，輸血是非常重要的，配血自然也必不可少，如果配血中出現(xiàn)假陰性，則臨床輸血后會引起不堪設(shè)想的后果。假陰性的表現(xiàn)可以有凝集反應(yīng)不出現(xiàn)或觀察不到和溶血反應(yīng)不能反映，

10、因此要保證配血的質(zhì)量對標本的要求不容忽視?，F(xiàn)將我們對貧血病人的配血結(jié)果和應(yīng)注意環(huán)節(jié)報告如下。材料和方法試劑配血用的生理鹽水為本院藥廠生產(chǎn)的注射用生理鹽水；改良凝聚胺試劑盒，由中山市生科試劑儀器有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品標準號：YZB/國1262-2003。產(chǎn)品注冊號：國食藥監(jiān)械（準）2003第3400180號。枸椽酸鈉管是38%枸櫞酸鈉（使用時加病人靜脈血2 ml）。方法將30例貧血病人（男25人，女15人，年齡2-60歲；17例A型、10例B型、3例AB型；Hb: 40-60 g/L，RCT: 0.14-0.20 L/L），抽取靜脈血4 ml，2 ml注入干試管，另外2 ml注入含38%枸櫞酸鈉管作

11、為交叉配血標本，干試管和枸櫞酸鈉管標本分別用離心機2500r/分鐘離心10分鐘，分離出血清盡量取足量的紅細胞50 l稀釋，病人紅細胞(有3例病人的血液標本肉眼可以觀察到黃疸，經(jīng)過鹽水洗滌后吸取紅細胞)以鹽水稀釋成3%作為原液進行不同的稀釋并與O型異型血型的血清作鹽水配血及聚凝胺配血，測試兩種方法出現(xiàn)凝集反應(yīng)。本試驗全部在室溫20-28度下進行。鹽水介質(zhì)配血法是在1支試管中加入病人3%紅細胞懸液1滴及O型血清1滴混勻以1000r/分鐘離心1分鐘，輕搖試管觀察凝集反應(yīng)結(jié)果。改良凝聚胺配血方法是加受血者血細胞1滴及獻血者血清1滴，加低離子介質(zhì)3滴混勻靜置30秒鐘，加凝聚胺1滴混勻，以3500r/分鐘

12、離心15秒鐘，扣搖，肉眼見明顯凝集，再加1滴假凝集清除液于管底，輕搖，凝集1分鐘內(nèi)消失呈均勻懸液，再倒于玻片顯微鏡觀察鏡下墻角凝集紅細胞為陰性，1分鐘內(nèi)凝集不能消除為陽性。鹽水配血的方法和凝集反應(yīng)判讀陽性的結(jié)果是根據(jù)全國臨床檢驗操作規(guī)程的標準1。統(tǒng)計學處理由于在檢測過程中不同病人標本紅細胞出現(xiàn)陽性反應(yīng)的稀釋度不同，把稀釋度數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標準差表示表示，應(yīng)用SPSS 10.0軟件進行數(shù)據(jù)處理。結(jié) 果貧血病人3%鹽水稀釋紅細胞作為原液后，再以不同鹽水稀釋度的鹽水配血法(A)和改良聚凝胺配血法(B)凝集反應(yīng)的結(jié)果兩種配血方法的結(jié)果見表1。Table.Results of two cooss

13、-matching methods（略）討論改良凝聚胺法中由于凝聚胺是一種多價陽離子溴化己二甲胺多聚物，具有中和肝素的作用，溶解后產(chǎn)生許多正電荷，能中和紅細胞表面唾液酸所帶的負電荷，使紅細胞的Zeta電位降低，紅細胞相互間容易接近，外加離心力的作用易誘發(fā)紅細胞產(chǎn)生可逆的非特異性凝集，反應(yīng)體系中的低離子介質(zhì)能大大促進抗原抗體反應(yīng)，若反應(yīng)過程中有IgG分子直接與紅細胞搭橋，則當非特異性的紅細胞凝聚消散后，只有由抗原抗體反應(yīng)引起的特異性凝聚仍存在。該法既能檢測IgM抗體，又能檢測IgG抗體，比酶法、抗球蛋白法的靈敏度要高出2-250倍，并且假陽性少，能檢出單純IgG型冷自身抗體，而在鹽水介質(zhì)中無反應(yīng)

14、2。貧血標本對凝聚胺方法和鹽水介質(zhì)配血方法有著部分不同的影響，我們平時配血時沒有準確地稀釋紅細胞，而是憑經(jīng)驗判斷紅細胞的稀釋比例，本研究中用準確的稀釋方法做配血試驗。在相關(guān)的資料1和改良凝聚胺試劑盒操作說明書上都標明配血用的抗體是用血清而不是血漿。如果采用血清配血，只有用干試管試驗，這樣一來，會有部分的標本根本不能取得足夠的紅細胞，配血所需用的紅細胞濃度就會降低，觀察配血結(jié)果時，鹽水介質(zhì)配血的結(jié)果呈現(xiàn)出比較均勻的凝集塊，而凝聚胺方法就顯得比較大塊的凝集塊，相對好觀察；但如果紅細胞濃度太低，凝聚胺法由于加了低離子介質(zhì)、凝聚胺和假凝集清除液，自然就會稀釋紅細胞凝集塊，這樣就會造成觀察配血結(jié)果困難。

15、所以，不管是鹽水介質(zhì)配血還是凝聚胺方法配血都必須有足夠的紅細胞濃度，為了取得紅細胞的濃度，本研究采取的是枸椽酸鈉管方法，因為有試驗證明枸椽酸鈉對配血無干擾3。枸櫞酸鈉抗凝劑能與血漿中的鈣離子形成螯合物，從而阻止血液凝固，它不影響交叉配血中抗原與抗體間結(jié)合4。    配血檢查因為要做ABO血型檢查、Rh血型檢查及配血用的3%紅細胞懸液，因此紅細胞量至少也要50 l滿足配血檢查的需要。用干試管試驗時要把上面的血清吸出，然后輕輕攪動血塊吸取下面的紅細胞。30例中有4例用棉簽擠壓才能取得足量的紅細胞，其余2例根本沒辦法得到足量的紅細胞。本試驗中枸椽酸鈉管的標本配血中有2例病人標本出現(xiàn)溶血，說明其中有溶血的抗原抗體反應(yīng)。而4例采取擠壓方式獲取紅細胞的配血試驗中有不同程度的溶血現(xiàn)象，其他沒有擠壓取紅細胞的標本除2例病人標本（與枸椽酸鈉管抽血的標本一致）出現(xiàn)不同程度的溶血外沒有溶血現(xiàn)象。如果靠擠壓取得紅細胞，勢必容易造成標本溶血，影響配血結(jié)果的觀察，即使是由于配血不合造成的溶血也不易看出，這樣也會造成假陰性反應(yīng)，臨床輸血的會產(chǎn)生不堪設(shè)想后果。所以只能用枸椽酸鈉管，這樣才能得到需要量的紅細胞，保證交叉配血的進行。此外在取紅細胞的過程中不能過于激烈地攪動，以免造成溶血。如果病人標本出現(xiàn)黃疸、溶血的現(xiàn)象，應(yīng)將病人紅細胞進行洗滌后才能進行配血?！緟⒖嘉墨I】