不同培養(yǎng)體系對(duì)白木香成熟胚叢芽誘導(dǎo)的影響研究

1、不同培養(yǎng)體系對(duì)白木香成熟胚叢芽誘導(dǎo)的影響研究    【摘要】  目的初步篩選出最適合白木香胚愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基，為白木香胚的繼代培養(yǎng)和植物再生研究打下基礎(chǔ)，為展開(kāi)白木香的種質(zhì)保存和繼代培養(yǎng)的研究提供參考依據(jù)。方法通過(guò)各種激素成分的正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以白木香成熟胚為材料，誘導(dǎo)愈傷組織和叢芽。結(jié)果發(fā)現(xiàn)以1/2MS0：1/2MS培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率最高，為100；而誘導(dǎo)效果則以MIZ：MS+IAA 0.1 mg/L+ZT 0.5 mg/L培養(yǎng)基為最佳。結(jié)論綜合考慮各種因素，以MIZ培養(yǎng)基為最適合誘導(dǎo)白木香胚愈傷組織的培養(yǎng)基。 【關(guān)鍵詞】  白木香；

2、 成熟胚； 叢芽Abstract：ObjectiveTo select the fittest culture mediums for inducing calluses from embryo of Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg.MethodsThrough orthogonal design for the component of several kinds of hormone, the embryo was cultured to induced calluses in eleven culture mediums. ResultsInduction

3、 rate on 1/2MS0 culture medium was the highest, coming up to 100%, while the best effect was on MIZ culture medium. ConclusionMIZ culture medium was most suitable for inducing calluses from embryo of Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg.Key words：Aquilaria senensis (Lour.) Gilg;   Culture mediu

4、ms;   Calluses    白木香1Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg又名土沉香，來(lái)源于瑞香科沉香屬植物。白木香是我國(guó)特有的藥用植物，也是我國(guó)生產(chǎn)中藥沉香的唯一植物資源1。白木香以含有帶棕黑色樹(shù)脂的干燥心材入藥，具行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘功效，用于治療胸腹脹痛、胃寒嘔吐、心腹疼痛、禁口毒痢、大腸虛閉、氣逆、喘息等癥。沉香是中國(guó)、日本、印度及其它東南亞國(guó)家的傳統(tǒng)名貴藥材和名貴天然香料，也是廣東道地藥材，十大廣藥之一1。    近年來(lái)，由于人們對(duì)沉香的大量采挖，白木香原始林遭到嚴(yán)

5、重破壞，白木香野生資源量不斷減少，被列為國(guó)家二級(jí)保護(hù)野生植物，已載入中國(guó)植物紅皮書(shū)和廣東省珍稀瀕危植物圖譜。白木香種子為頑拗型，含油率高，極易變質(zhì)及喪失萌發(fā)力，天然更新能力弱。白木香的繁殖方式主要為種子繁殖。隨采隨播的發(fā)芽率可高達(dá)80以上；貯存15 d后，發(fā)芽率降至50以下；貯存3個(gè)月的種子完全喪失發(fā)芽率2。本研究通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)，探討白木香離體再生的不同培養(yǎng)條件，以期為白木香種質(zhì)資源的保存和優(yōu)質(zhì)種苗的離體快繁生產(chǎn)及選育奠定基礎(chǔ)。1  材料與儀器1.1  材料 為采自電白縣白木香種植基地新鮮的成熟種子。1.2  培養(yǎng)基 以MS或1/2MS為基本

6、培養(yǎng)基，并在其基礎(chǔ)上添加不同種類、不同劑量的生長(zhǎng)激素、無(wú)機(jī)鹽等。表1 不同培養(yǎng)基配方（略）所有培養(yǎng)基均加入3的蔗糖和0.75的瓊脂條固化，pH值為5.8±0.1。而后將配制好的培養(yǎng)基分裝于玻璃瓶中，每瓶約10 ml，進(jìn)行高壓滅菌。1.3  接種方法 將種子用洗潔精輕輕蕩洗一遍后，在自來(lái)水下流動(dòng)沖洗2030 min，材料經(jīng)上述處理后，在無(wú)菌條件下，用75的酒精浸泡消毒810 s，然后置于0.1的升汞溶液中滅菌消毒58 min，再用無(wú)菌水洗滌710次。在接種時(shí)，將白木香種子的種殼及附屬物剖去，取出胚，接種到培養(yǎng)基中，每瓶培養(yǎng)基接種34個(gè)胚。1.4  培養(yǎng)條件

7、置于培養(yǎng)室中進(jìn)行培養(yǎng)，光照強(qiáng)度2 500 Lx，每日光照810h，培養(yǎng)溫度（26±0.2）。2  結(jié)果    實(shí)驗(yàn)操作如上所述，60 d后結(jié)果記錄見(jiàn)表2。表2  不同培養(yǎng)基對(duì)白木香胚愈傷組織誘導(dǎo)率的影響（略）    由表2可以看出，1/2MS0培養(yǎng)基的愈傷組織誘導(dǎo)率最高（100），其次為1/2MB0.2和MIZ培養(yǎng)基（90）；1/2MB0.5、MB0.5及MB0.05等培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率一般（6075）；而MBD、1/2MBN、MBN、IB1和1/2MKI等培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率極低（約為0），不適于白木香胚愈傷組織

8、的誘導(dǎo)。生長(zhǎng)在1/2MS0上胚的愈傷組織顏色淺綠，質(zhì)地較為致密，出愈率高（100），但是生長(zhǎng)速度慢，而且愈傷組織在生長(zhǎng)的過(guò)程中容易發(fā)生褐化的現(xiàn)象，導(dǎo)致愈傷組織的出苗率不高（54）。1/2MB0.2培養(yǎng)基上的愈傷組織顏色較綠，質(zhì)地酥脆，玻璃化現(xiàn)象比較嚴(yán)重，因此，愈傷組織的出苗率也不高（43.48）。而生長(zhǎng)在MIZ培養(yǎng)基上的愈傷組織顏色深綠，質(zhì)地致密，不容易褐化也不容易玻璃化，出苗率較高（87.64）。1/2MB0.5、MB0.5愈傷組織為紅綠色，生長(zhǎng)能力比較強(qiáng)，亦不會(huì)導(dǎo)致褐化的現(xiàn)象，因此，出苗率也比較高（86.67%和85.07%）。胚的愈傷組織情況和出苗情況見(jiàn)圖14。3  結(jié)論

9、60;   1/2MS0培養(yǎng)基配方為1/2MS，不加任何生長(zhǎng)激素，而愈傷組織的誘導(dǎo)率高達(dá)100。1/2MB0.2，MIZ等培養(yǎng)基生長(zhǎng)激素含量較低，其誘導(dǎo)率大于80。而其他培養(yǎng)基如1/2MB0.05，MB0.5，MBN0.05等，生長(zhǎng)激素濃度偏高，則誘導(dǎo)率在6075之間。在MBD、1/2MBN和MBN等培養(yǎng)基中的誘導(dǎo)率幾乎為0，說(shuō)明2，4D及NAA這些激素的存在，并不適合愈傷組織的誘導(dǎo)，這與蘭芹英2等的研究結(jié)果有所出入，其研究指出胚軸在1/2MBN的誘導(dǎo)率為54.17，而在MBN中的誘導(dǎo)率為80。    在MIZ培養(yǎng)基中，添加了玉米素（ZT），愈

10、傷組織誘導(dǎo)率高（89），而且愈傷組織質(zhì)地致密，顏色鮮綠，出苗數(shù)多（87.64）。在1/2MS0培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)率雖然極高（100），但其愈傷組織易褐化，而在1/2MB0.2培養(yǎng)基中愈傷組織則易玻璃化。1/2MB0.5，MB0.5及MB0.05培養(yǎng)基的出苗率雖然也比較高（70），但是由于其愈傷組織的出愈率不高（75），因此，也不是誘導(dǎo)白木香胚愈傷組織的理想培養(yǎng)基。而在其他培養(yǎng)基上形成的愈傷組織質(zhì)地都較疏松，而且出苗的數(shù)量較少。綜上所述，添加了玉米素（ZT）的MIZ培養(yǎng)基，從出愈率，愈傷組織的情況和出苗率來(lái)考察，是在本實(shí)驗(yàn)所采用的眾多培養(yǎng)基中，效果最好，最適合用于白木香胚愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基。

11、60;   關(guān)于白木香的組織培養(yǎng)，葉勤法3曾用白木香嫩枝的葉片和莖段誘導(dǎo)愈傷組織，產(chǎn)生不定芽，再進(jìn)行生根誘導(dǎo)，形成完整植株。蘭芹英等4曾對(duì)白木香成熟胚的組織培養(yǎng)及植株再生進(jìn)行研究，結(jié)果表明，白木香胚軸接種在MS + BA 0.1 mg/L + NAA 0.01 mg/L和1/2MS + BA 0.1 mg/L + NAA 0.01 mg/L培養(yǎng)基上，愈傷組織誘導(dǎo)率分別為80.00 和83.33。2，4-D2 mgL加BA0.52 mgL和ZT1 mgL加1AA01 mgL有利于子葉誘導(dǎo)愈傷組織，誘導(dǎo)率為100 。1/2MS + BA 2 mg/L + NAA 0.5 mg/

12、L + 蔗糖3有利叢芽的誘導(dǎo)，但苗易玻璃化，而1/2MS + KT 2 mg/L + LAA 0.02mg/L對(duì)側(cè)芽的誘導(dǎo)和生長(zhǎng)較有利。杜勤等5探討了不同外植體、光照條件、激素對(duì)誘導(dǎo)白木香愈傷組織產(chǎn)生的影響。本實(shí)驗(yàn)在前人研究的基礎(chǔ)上，通過(guò)各種激素成分的正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以白木香成熟胚為材料，誘導(dǎo)出愈傷組織和叢芽，從而篩選出適宜白木香叢芽誘導(dǎo)的最佳配方組合。    本實(shí)驗(yàn)初步篩選出最適合白木香胚愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基，為白木香胚的繼代培養(yǎng)和植物再生研究打下了很好的基礎(chǔ)。同時(shí)，為今后展開(kāi)白木香的種質(zhì)保存和繼代培養(yǎng)的研究提供了參考依據(jù)。【參考文獻(xiàn)】  1林偉強(qiáng), 賀立靜, 謝正生. 一種值得推廣的優(yōu)良園林樹(shù)種白木香J.廣東園林，2002，4:38.2劉軍民