臨床微生物學(xué)檢驗

1、臨床微生物學(xué)檢驗I 高壓鍋使用的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP實(shí)驗室名稱項目編號制定日期檢驗科高壓鍋的使用檢驗科2006 年 06 月 06 日【目的】確保高壓效果的可靠性?！具m用范圍】蒸氣式高壓鍋?！驹?SO 吃動程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動，可由任一使用本 SOP 的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！静僮鞣椒ā? .將水加到高壓鍋內(nèi)至其刻度線，將欲滅菌物品放入鍋內(nèi)，關(guān)閉鍋門，擰緊螺絲并確認(rèn)已經(jīng)封閉。2 .打開排氣閥。3 .打開蒸汽開關(guān)，向鍋內(nèi)輸入蒸汽或接通電源，使產(chǎn)生蒸汽。4 .觀察排氣閥的排氣情況，待排出的氣體由冷氣變?yōu)檎羝?，壓力表達(dá)到 0.05mPa 時，關(guān)閉排氣閥。5 .觀

2、察壓力表，當(dāng)壓力升至 0.15mPa 時，開始計時。6 .壓力達(dá) 0.15mPa 后，可調(diào)節(jié)進(jìn)氣閥，減少進(jìn)氣量，維持壓力并使其穩(wěn)定在 0.15mPa 電加熱時，可切斷電源，維持壓力持續(xù) 15 分鐘，至多不超過 30 分鐘，否則營養(yǎng)物質(zhì)破壞。7 .關(guān)閉進(jìn)氣閥門或切斷電源，讓鍋內(nèi)物品自然冷卻，不可馬上打開排氣閥， 以免發(fā)生意外。8 .待鍋內(nèi)壓力降為零時，可打開鍋蓋，取出物品。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名唐玉貞檢驗科檢驗科日期 060606 日實(shí)驗室名稱項目編號制定日期檢驗科培養(yǎng)箱使用、維護(hù)與校準(zhǔn)檢驗科06 年 06 月 06 日【目的】確保培養(yǎng)箱溫度恒定【適用范圍】各種類型隔水式、溫度設(shè)定為 2

3、7C、35C、42C、56c 培養(yǎng)箱?！驹?SO 吃動程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動，可由任一使用本 SOP 的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！静僮鞣椒ā? .培養(yǎng)箱應(yīng)放置于水平地面（或堅固的水平臺）,電源電壓須匹配。2 .從注水口先將隔水箱內(nèi)的水注滿到浮標(biāo)要求的位置。3 .將溫度調(diào)節(jié)旋扭調(diào)至所需溫度，然后將電源開關(guān)撥至“開”處。4 .每次使用時應(yīng)在培養(yǎng)箱頂部插入標(biāo)準(zhǔn)溫度計，監(jiān)測實(shí)際溫度。5 .培養(yǎng)箱工作溫度波動范圍應(yīng)控制在10C 以內(nèi)。6 .培養(yǎng)箱正面貼有溫度記錄表，記錄每天上班和下班時溫度，如溫度超出正常范圍，指示該溫度的刻度應(yīng)劃上紅圈，并把修正溫度記錄下來。7,培養(yǎng)箱

4、內(nèi)外應(yīng)保持清潔。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名唐玉貞檢驗科檢驗科日期 060606田培養(yǎng)基制備的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP實(shí)驗室名稱項目編號1制定日期檢驗科培養(yǎng)基的制備檢驗科06 年 06 月 06 日【目的】保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。【適用范圍】使用成品培養(yǎng)基干粉制備各種分離培養(yǎng)基。【該 SO 吃動程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動，可由任一使用本 SOP 勺工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！静襟E】1 .在玻璃容器中加入所需蒸儲水的二分之一量，然后放入一定量培養(yǎng)基干粉，補(bǔ)足水量，輕輕攪拌以促進(jìn)溶解。2 .校正 pH:高壓滅菌前可用 pH 計或精密 pH 試紙校正培養(yǎng)基的 pH。3 .分裝：液

5、體培養(yǎng)基一般在滅菌前分裝，分裝時應(yīng)注意每管的分裝量不應(yīng)高于試管的 2/3。瓊脂平板是在培養(yǎng)基高壓滅菌后冷至 50-600C 時再傾注平板。4 .質(zhì)量檢查1無菌試驗：將制好的培養(yǎng)基在 350C 孵育過夜，判定是否滅菌合格。2效果檢驗：按不同的培養(yǎng)要求，接種相應(yīng)的菌種，觀察細(xì)菌的發(fā)育、菌落形態(tài)、色素、溶血等特征，判斷培養(yǎng)基是否符合要求。5 .保存：液體培養(yǎng)基及瓊脂平板須在 4C 保存，一般不超過 7 天，如用塑料袋密封至多保存 2 周。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名唐玉貞檢驗科檢驗科日期06 年 06 月 06 日IV 革蘭染色的標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒炇颐Q項目編號制定日期檢驗科革蘭染色檢驗科06 年

6、06 月 06 日【目的】確保染色結(jié)果清晰可靠?！驹?SO 喳動程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動， 可由任一使用本 SO 用勺工作人員提出， 并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！驹噭? .結(jié)晶紫溶液A 液：結(jié)晶紫 2g95%乙醇 20mlB 液：草酸俊 0.8g蒸儲水 80ml使用前 24 小時將 A 液 B 液混合后，過慮后裝入試劑瓶內(nèi)備用。2 .碘液碘 1g碘化鉀 2g蒸儲水 300ml3 .脫色液：95 叱醇4 .復(fù)染液儲存液：沙黃 2.5g95%乙醇 100ml應(yīng)用液：儲存液 10ml蒸儲水 90ml【方法】1 .待檢標(biāo)本用無菌生理鹽水涂片，經(jīng)自然干燥或火焰固定。2 .加結(jié)晶紫液染

7、 1 分鐘，清水沖去染液。3 .加碘液染 1 分鐘，清水沖去染液。4 .加 95%L 醇脫色液，不時搖動約 10-30 分鐘，至紫色已脫落為至，水沖洗。5 .加復(fù)染液（伊紅），染 30 分鐘，水沖洗。6 .待涂片自然干燥后，油鏡鏡檢。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名唐玉貞檢驗科檢驗科日期06 年 06 月 06 日V 抗酸染色的標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒炇颐Q項目編號制定日期檢驗科抗酸染色檢驗科,06 年 06 月 06 日 1【目的】確保染色結(jié)果清晰可靠?！痉椒ā浚ㄒ唬A性復(fù)紅染色法【試劑】1、萋納石炭酸復(fù)紅溶液堿性復(fù)紅乙醇飽和溶液 10ml5 面炭酸溶液 90ml2、脫色劑濃鹽酸 3ml95%97ml

8、3、復(fù)染液（呂弗勒美藍(lán)液）美藍(lán)乙醇飽和溶液 30ml10%R 氧化鉀 0.1ml蒸儲水 100ml【染色步驟】1、涂片經(jīng)自然干燥或火焰固定后，加石炭酸復(fù)紅溶液，徐徐加熱至有蒸汽出現(xiàn)，切不可沸騰。染 5 分鐘（若染色奴卡菌需要加長時間），水洗。2、加脫色劑，不時搖動坡片至無紅色脫落為至，水洗。3、加復(fù)染液，染 0.5-1 分鐘。4、干后鏡檢。分枝桿菌呈紅色，背景為藍(lán)色。注：奴卡菌、放線菌標(biāo)本染色時，脫色劑改用 2%（酸水溶液。（二）金胺 O-羅丹明 B 染色法【染劑】1、羅丹明 B 液：羅丹明 B0.1g 加蒸儲水 100ml;2、0.1%金月OO 液：金胺 O0.1g 加蒸儲水 95ml,再加

9、入純石炭酸 5ml,混勻。3、3%fc 酸酒精。4、稀釋美藍(lán)液：呂弗勒美藍(lán)液 10ml,加蒸儲水 90ml,混勻?！痉椒ā?、涂片固定后加第 1 液 30-90 分鐘。2、棄去第 1 液后加第 2 液染 15 分鐘。3、用第 3 液脫色 1-2 分鐘，水洗。4、滴加第 4 液染 30 分鐘，水洗，待干，熒光鏡檢?！窘Y(jié)果】抗酸菌在暗背景中呈現(xiàn)金黃色熒光。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名唐玉貞檢驗科檢驗科日期06 年 06 月 06 日VI 血培養(yǎng)標(biāo)本采集的標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒炇颐Q項目編號制定日期檢驗科血培養(yǎng)標(biāo)本的米集檢驗科06 年 06 月 06 日【目的】指導(dǎo)血液標(biāo)本的正確采集。【該 SO 吃動程

10、序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動，可由任一使用本 SOP 勺工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！静襟E】1 .選擇一適當(dāng)?shù)撵o脈穿刺處，先以 70%酉精擦拭。2 .再用棉簽沾取 2%*酊涂于欲作靜脈穿刺處，讓其干后再用 70%酉精擦拭。3 .全部手續(xù)再作一此（如必要）4 .用一支無菌的 21 號針頭與 10ml 針筒抽空（成人約抽取 10ml 血液，小孩約抽取 1-5ml）05 .血液抽出后，立即注入血液培養(yǎng)瓶，馬上充分混勻后，再送入檢驗。操作人員部門主管姓名唐玉貞檢驗科檢驗科日期06 年 06 月 06 日vn 血液及骨髓微生物學(xué)檢驗的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP實(shí)驗室名稱項目編號制定日期檢

11、驗科血液及骨髓微生物學(xué)檢驗檢驗科06*年 06 月 06 日【目的】保證血（骨髓）培養(yǎng)結(jié)果的正確性?！驹揝O吃動程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動，可由任一使用本SOP勺工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！緦?shí)驗條件】培養(yǎng)箱或厭氧培養(yǎng)箱（或厭氧罐）或全自動血培養(yǎng)儀?！静僮鞒绦? 1（一）標(biāo)本采集嚴(yán)格無菌技術(shù)取血液 10ml（兒童血液 1-5ml）、骨髓 0.5-1ml 注入血培養(yǎng)瓶后立即送實(shí)驗室，注入?yún)捬跗繒r要注意勿將注射器內(nèi)的空氣注入瓶內(nèi)，培養(yǎng)瓶在送試驗室前，不可放冰箱暫存。（二）培養(yǎng)1 .實(shí)驗室接到血培養(yǎng)瓶后，放 350C 孵育。2 .經(jīng)過 12-18 小時，350C 孵育后，在

12、血平板或巧克力平板上盲傳一次。3 .盲傳后繼續(xù)孵育，每日早晨觀察有無細(xì)菌生長，直至第 7 天。4 .無細(xì)菌生長表現(xiàn)的培養(yǎng)瓶，在觀察的 7 天中，最少應(yīng)做 2 次盲目傳種。5 .全自動血培養(yǎng)儀培養(yǎng)時，待其儀器報警，涂片、接種；若儀器未報警，5 天后盲種，仍為陰性，才能報告。（三）分離鑒定1 .盲傳陽性或肉眼可見生長現(xiàn)象，直接涂片做革蘭染色，所見結(jié)果應(yīng)及時報告臨床醫(yī)師。2 .根據(jù)涂片結(jié)果，如為一種細(xì)菌生長，則直接以增菌液做鑒定實(shí)驗；如有兩種或多種細(xì)菌同時生長，則必須經(jīng)過分離培養(yǎng)，以獲得純菌種后做鑒定。3 .細(xì)菌鑒定要做到種的鑒定。（四）藥敏實(shí)驗1 .根據(jù)涂片結(jié)果，直接以培養(yǎng)瓶內(nèi)的增菌液做直接藥物敏

13、感性測試，爭取在較短時間內(nèi)得出初步結(jié)果，供臨床醫(yī)師作為治療的參考。2 .標(biāo)本經(jīng)平板分離純培養(yǎng)后，做標(biāo)準(zhǔn)化藥敏實(shí)驗正式報告給臨床?！窘Y(jié)果的判斷】1 .疑有細(xì)菌生長者，經(jīng)涂片、革蘭染色鏡檢后，電話通知主管醫(yī)師。2 .任何時候平板上長出單個菌落，應(yīng)立即完成鑒定就及標(biāo)準(zhǔn)化藥敏實(shí)驗，并發(fā)出報告，報告形式為“XXXffl 菌生長”，藥敏實(shí)驗報告形式為“XXXS 感”等。3 .培養(yǎng) 3 天為陰性的標(biāo)本，應(yīng)電話通知臨床醫(yī)師，培養(yǎng) 7 天仍為陰性者，應(yīng)報告“經(jīng) 7 日培養(yǎng)無細(xì)菌生長”。部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名唐玉貞檢驗科檢驗科06*0606保證質(zhì)量評價的準(zhǔn)確可靠【作用】即藥敏試驗的標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒炇颐Q項目編號制

14、定日期檢驗科藥敏試驗檢驗科06 年 06 月 06 日、K 一 B 法【目的】保證紙片擴(kuò)散法藥敏結(jié)果的可靠性?！静牧稀浚ㄒ唬┡囵B(yǎng)基Mueller-Hinton 瓊脂平板，只適合腸桿菌科、銅綠假單胞菌、不動桿菌、葡萄球菌、腸球菌、霍亂弧菌；HTM脂，只適合嗜血桿菌；GC 瓊脂+1%特定的生長因子，只適合淋病奈瑟菌；Mueller-Hinton 瓊脂+5%羊血，只適合鏈球菌。（二）藥敏紙片抗菌藥物紙片直徑約為 6.0-6.35mm,每片的吸水量約 20ml。（三）質(zhì)控菌株K-B 法質(zhì)量控制用菌株常規(guī)用：金黃色葡萄球菌 ATCC25923 大腸埃希菌ATCC25922 銅綠假單胞菌 ATCC2785

15、3（四）菌液比濁管接種菌液濃度為 1.5x108/ml,相當(dāng)于 0.5 的麥?zhǔn)媳葷峁??！痉椒ā? .制備接種菌液：挑選瓊脂平板上，形態(tài)相同的菌落移種于 M-H 液體培養(yǎng)基中，置 350C 溫箱中孵育 4 小時，校正濁度，或用接中環(huán)挑取菌落，置浮于生理鹽水中振蕩混勻后與標(biāo)準(zhǔn)化濁管比濁，調(diào)整濁度與比濁管相同。2 .接種平板：用無菌棉簽蘸取已制備好的接種好的菌液，在管壁上旋轉(zhuǎn)擠壓九次，去掉過多的菌液，涂布整個 M-H 培養(yǎng)基表面，并將平板旋轉(zhuǎn) 60C,反復(fù)幾次，最后沿平皿周邊繞兩圈，保證涂布均勻。3 .貼紙片：待平板上的水分被瓊脂完全吸收后（約 15 分鐘），用無菌銀子取紙片貼在瓊脂平板表面，并用銀

16、尖輕壓一下，使其貼平。每張紙片間距不少于 24mm 紙片中心距平皿邊緣不少于 15mm4 .孵育：把貼好藥敏紙片的平皿放進(jìn) 350C 孵平板，最好單獨(dú)擺放，不超過 2 個疊在一起，孵育 18-24 小時后，讀取結(jié)果。5 .判定結(jié)果：培養(yǎng)后取出平板，用游標(biāo)卡尺測量抑菌環(huán)的直徑，抑菌環(huán)的邊緣以肉眼見不到細(xì)菌明顯生長為限，然后根據(jù)抑菌環(huán)直徑大小、NCCLSJ 斷細(xì)菌的敏感性，并加以記錄。二、稀釋試驗【目的】1 .為了決定抗生素的最低抑菌濃度（MIC）。2 .為了決定抗生素殺菌能力，或?qū)嶒瀮煞N以上抗生素對細(xì)菌的協(xié)同作用或?qū)棺饔??！痉椒ā浚ㄒ唬┤鉁♂屧囼? .適用情況：1血液培養(yǎng)。2病人對適當(dāng)治療方

17、法無效。3免疫機(jī)能障礙病人4病人經(jīng)治療后復(fù)發(fā)者。2 .培養(yǎng)基的選擇：一般細(xì)菌用調(diào)節(jié)好陽離子的 M-H 肉湯（CAMRB 如腸桿菌科、銅綠假單胞菌、不動桿菌、葡萄球菌、腸球菌、霍亂弧菌；某些挑剔性細(xì)菌則根據(jù)其生長的營養(yǎng)需要，向 M-H 肉湯中加入適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)物進(jìn)行實(shí)驗，如 HTM湯，只適合嗜血桿菌；CAMHB2-5%凍融馬血，適合肺炎鏈球菌以及以外的鏈球菌。3 .肉湯的連續(xù)稀釋：1將各種抗微生物藥物庫存液稀釋成 200ug/ml 或 200u/ml。2取 10 支無菌試管，寫上編號 1-10,為一組每種抗生素需一種。3自第 2 管至 10 管各加入無菌肉湯 1。04將各實(shí)驗藥分別加 1.0ml 至

18、第 1 管及第 2 管，將第 2 管混勻后移取 0.1ml 至第 3 管，同樣操作，倍比稀釋至第 9 管，第 10 管不加抗生素作為陽性生長對照。5另外準(zhǔn)備僅含肉湯的試管，作為陰性對照。4 .細(xì)菌的接種1每支試管接種 1.0ml 菌液 （約 105-106個細(xì)菌/ml） ,也可將細(xì)菌調(diào)至 0.5 個麥?zhǔn)蠞岫仍儆萌鉁?1:200 然后接種 1.0ml 至每支試管內(nèi)。2接種后每支試管含混合液，抗生素濃度為 512ug（u）-O.125ug（u）。3若細(xì)菌對某種抗生素特別敏感，可把操作液先稀釋 10 倍，再予連續(xù) 2 倍稀釋，最后的濃度為 10;5;2.5;0.6;0.3;0.15;0.08;及

19、0.04ug/ml。5 .培養(yǎng)和結(jié)果的判斷在 350C 溫箱中培養(yǎng) 16-20 小時后，肉眼觀察生長情況，陽性對照管可見渾濁生長，陰性對照管則應(yīng)清澈。以抗生素能抑制細(xì)菌生長管的最低濃度為其 MIC 值。6 .測量最低殺菌濃度（MBC把無菌生長的每一試管吸 0.1ml 加到 500C 的胰蛋白凍肉湯（Trypticsoybroth,TSA）20ml 混合均勻后分別倒平板，培養(yǎng) 48-72 小時后計算菌落數(shù)，和 1:200 稀釋原菌液作傾注獲得的細(xì)菌數(shù)相比，減少 99.9%,其最小抑菌濃度為可得到抗生素的 MBCS。一般在實(shí)際運(yùn)用中，采用定量接種環(huán)（0.001 毫升）涂化平板，孵育后，平板菌落計數(shù)

20、小于 5 個，其抑菌濃度為最小殺菌濃度。7 .質(zhì)控：利用 NCCLSt 議的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行質(zhì)控。（二）微量肉湯稀釋敏感實(shí)驗手工法：原理與試管稀釋方法相同。具體操作是在含有 96 小孔的小塑料培養(yǎng)盤進(jìn)行，每一孔可裝 0.1ml 量，每一盤可同時作數(shù)種抗生素的數(shù)種不同濃度，另 2 孔作為陽性與陰性對照。儀器法：配制儀器 Minidiluter 或 MIC-2000（美國）Dynatechlabortories,Alexandria,YA自配或購買現(xiàn)成的實(shí)驗培養(yǎng)基。（三）瓊脂稀釋法1 此法與肉湯稀釋實(shí)驗原理相同，但又有其優(yōu)點(diǎn)：可同時實(shí)驗許多菌株，利用多點(diǎn)接種儀可同時接種多個菌株到一系列含有各種不同抗生

21、素濃度的平板。可檢測是否污染：由細(xì)菌在平板上生長的特性判斷。可對肉湯稀釋實(shí)驗結(jié)果不佳的挑剔性細(xì)菌進(jìn)行實(shí)驗。2 .瓊脂培養(yǎng)基的選擇：一般使用 M-H 瓊脂，它適合腸桿菌科、銅綠假單胞菌、不動桿菌、葡萄球菌、腸球菌、霍亂弧菌；對挑剔的細(xì)菌可加入相應(yīng)的營養(yǎng)物，如巧克力、動物血、5%兌纖維血或冷凍動物血等，如 HTM脂，只適合嗜血桿菌；GC 瓊脂+1%特定的生長因子，只適合淋病奈瑟菌；Mueller-Hinton 瓊脂+5%羊血，只適合肺炎鏈球菌以外的鏈球菌。3 .抗生素稀釋與平板的配制。4 .平板的接種：1每一試驗菌株需調(diào)整濃度至 0.5 麥?zhǔn)蠞岫取?平板點(diǎn)接種可用定量接種杯（0.001ml）、毛細(xì)

22、吸管或自動接種儀器進(jìn)行。同時作 5 個對照菌株作為質(zhì)控：大腸埃希菌 ATCC25922 大腸埃希菌 ATCC35218 金黃色葡萄球菌 ATCC29213 糞腸球菌 ATCC292125 .待接種菌液被完全吸收后，倒置培養(yǎng)在 350C 溫箱內(nèi)。6 .結(jié)果的判斷：16-20 小時后，首先看不含抗生素的對照平板，必須有一株生長，然后看各實(shí)驗平板，凡能完全抑制細(xì)菌生長的抗生素最低濃度即為 MIC 值。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名唐玉貞檢驗科檢驗科日期 06 年 06 月 06 日K 藥敏實(shí)驗室內(nèi)質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)操作實(shí)驗室名稱項目編號制定日期檢驗科藥敏實(shí)驗室內(nèi)質(zhì)量控制檢驗科06 年 06 月 06 日

23、【目的】保證藥敏報告的準(zhǔn)確性，可靠性及重現(xiàn)性。【該 SO 吃動程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動，可由任一使用本 SOP 勺工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。【適用范圍】瓊脂紙片擴(kuò)散法。【方法】一故關(guān)苴、夕口仆是紙片擴(kuò)散實(shí)驗必須使用 M-H 瓊脂培養(yǎng)基，因為它不含抑制磺胺藥物，而其他種類培養(yǎng)基可能含有與磺胺藥拮抗的物質(zhì)，使其抑菌環(huán)變小。1 .培養(yǎng)基的制作過程必須統(tǒng)一，無論是培養(yǎng)基或添加物的劑量、PH 值、高溫滅菌的時間或溫度都需遵照規(guī)定，2 .新的粉狀脫水培養(yǎng)基打開時，要附廠商、編號、日期、及打開者的姓名。3 .無菌實(shí)驗：每一批配好的培養(yǎng)基其中抽取 5%勺量在 350C 或其他適合

24、的溫度下隔夜培養(yǎng)，觀察有無菌落生長。4 .若是新購的培養(yǎng)基必須觀察其顏色與透明度， 若有沉淀、 渾濁或脫水的現(xiàn)象都必須丟棄，新配好的 M-H 培養(yǎng)基，用塑料袋包好，儲藏于 40C 的水箱內(nèi)，防水蒸5 .平板所含培養(yǎng)基的量太多或太少均不宜，如 MuellerHintonagar 的高度不可超過 4mm 否則會影響抑菌環(huán)的直徑（變?。?。6 .定期檢測培養(yǎng)基的有效性，并對結(jié)果加以記錄，以便能隨時發(fā)現(xiàn)問題。7 .培養(yǎng)基要在有效期內(nèi)使用。二、試劑鑒定細(xì)菌實(shí)驗所用的紙條或紙片，儲藏于冰箱時，須附干燥劑，且須注意所標(biāo)明的有效期限。紙片購入時須作陽性與陰性對照以檢查其是否有效，以后可每周做一次。三、抗生素粉末

25、與抗生素紙片檢查室診斷過程中所用抗生素粉末必須保持干燥，置冰箱儲藏，若其制成高濃度的庫存溶液，應(yīng)該采取少量分裝于各小瓶，貯存于-140C 或-140C 以下，一旦取出解凍，未用完的就應(yīng)丟棄。若抗生素粉末用于稀釋試驗時，須限已知 MIC 的微生物作對照。作藥敏用的抗生素紙片應(yīng)放干燥劑并貯存于-140C 或-140C 以下，若情況不允許，除了penicillins、cephalosporins 及 oxacillin 紙片仍必須冰凍外，其余可置冰箱貯存。從冰箱取出裝抗生素紙片的容器，須待其復(fù)溫至室溫后才能打開使用。每天在作藥敏試驗時，最好同時取已知敏感的微生物質(zhì)控菌株作對照，來測驗紙片的功效。四、裝備1 .培養(yǎng)箱、冰箱等裝備于每天早上上班時須記錄溫度并校正，使用過程中應(yīng)注意溫度有無變化。2 .CO 培養(yǎng)箱，要確保其所含的 CO 量。3 .厭氧缸在使用時，催化劑要先在 1600c 干燥箱中加熱 1-2 小時，使其恢復(fù)功能，且同時于缸中放入生物指示劑可確定是否絕對無氧。五、操作人員素質(zhì)操作者應(yīng)熟悉藥敏試驗的規(guī)范步驟，尤其要注意其影響因素，如：接種菌的濃度不能太高或太低，應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化；接種要用無菌棉拭子，