臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)

1、臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)I 高壓鍋使用的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期檢驗(yàn)科高壓鍋的使用檢驗(yàn)科2006 年 06 月 06 日【目的】確保高壓效果的可靠性?！具m用范圍】蒸氣式高壓鍋?！驹?SO 吃動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本 SOP 的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！静僮鞣椒ā? .將水加到高壓鍋內(nèi)至其刻度線，將欲滅菌物品放入鍋內(nèi)，關(guān)閉鍋門，擰緊螺絲并確認(rèn)已經(jīng)封閉。2 .打開(kāi)排氣閥。3 .打開(kāi)蒸汽開(kāi)關(guān)，向鍋內(nèi)輸入蒸汽或接通電源，使產(chǎn)生蒸汽。4 .觀察排氣閥的排氣情況，待排出的氣體由冷氣變?yōu)檎羝?，壓力表達(dá)到 0.05mPa 時(shí)，關(guān)閉排氣閥。5 .觀

2、察壓力表，當(dāng)壓力升至 0.15mPa 時(shí)，開(kāi)始計(jì)時(shí)。6 .壓力達(dá) 0.15mPa 后，可調(diào)節(jié)進(jìn)氣閥，減少進(jìn)氣量，維持壓力并使其穩(wěn)定在 0.15mPa 電加熱時(shí)，可切斷電源，維持壓力持續(xù) 15 分鐘，至多不超過(guò) 30 分鐘，否則營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)破壞。7 .關(guān)閉進(jìn)氣閥門或切斷電源，讓鍋內(nèi)物品自然冷卻，不可馬上打開(kāi)排氣閥， 以免發(fā)生意外。8 .待鍋內(nèi)壓力降為零時(shí)，可打開(kāi)鍋蓋，取出物品。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名唐玉貞檢驗(yàn)科檢驗(yàn)科日期 060606 日實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期檢驗(yàn)科培養(yǎng)箱使用、維護(hù)與校準(zhǔn)檢驗(yàn)科06 年 06 月 06 日【目的】確保培養(yǎng)箱溫度恒定【適用范圍】各種類型隔水式、溫度設(shè)定為 2

3、7C、35C、42C、56c 培養(yǎng)箱?！驹?SO 吃動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本 SOP 的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！静僮鞣椒ā? .培養(yǎng)箱應(yīng)放置于水平地面（或堅(jiān)固的水平臺(tái)）,電源電壓須匹配。2 .從注水口先將隔水箱內(nèi)的水注滿到浮標(biāo)要求的位置。3 .將溫度調(diào)節(jié)旋扭調(diào)至所需溫度，然后將電源開(kāi)關(guān)撥至“開(kāi)”處。4 .每次使用時(shí)應(yīng)在培養(yǎng)箱頂部插入標(biāo)準(zhǔn)溫度計(jì)，監(jiān)測(cè)實(shí)際溫度。5 .培養(yǎng)箱工作溫度波動(dòng)范圍應(yīng)控制在10C 以內(nèi)。6 .培養(yǎng)箱正面貼有溫度記錄表，記錄每天上班和下班時(shí)溫度，如溫度超出正常范圍，指示該溫度的刻度應(yīng)劃上紅圈，并把修正溫度記錄下來(lái)。7,培養(yǎng)箱

4、內(nèi)外應(yīng)保持清潔。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名唐玉貞檢驗(yàn)科檢驗(yàn)科日期 060606田培養(yǎng)基制備的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)1制定日期檢驗(yàn)科培養(yǎng)基的制備檢驗(yàn)科06 年 06 月 06 日【目的】保證培養(yǎng)基的質(zhì)量?！具m用范圍】使用成品培養(yǎng)基干粉制備各種分離培養(yǎng)基?！驹?SO 吃動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本 SOP 勺工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！静襟E】1 .在玻璃容器中加入所需蒸儲(chǔ)水的二分之一量，然后放入一定量培養(yǎng)基干粉，補(bǔ)足水量，輕輕攪拌以促進(jìn)溶解。2 .校正 pH:高壓滅菌前可用 pH 計(jì)或精密 pH 試紙校正培養(yǎng)基的 pH。3 .分裝：液

5、體培養(yǎng)基一般在滅菌前分裝，分裝時(shí)應(yīng)注意每管的分裝量不應(yīng)高于試管的 2/3。瓊脂平板是在培養(yǎng)基高壓滅菌后冷至 50-600C 時(shí)再傾注平板。4 .質(zhì)量檢查1無(wú)菌試驗(yàn)：將制好的培養(yǎng)基在 350C 孵育過(guò)夜，判定是否滅菌合格。2效果檢驗(yàn)：按不同的培養(yǎng)要求，接種相應(yīng)的菌種，觀察細(xì)菌的發(fā)育、菌落形態(tài)、色素、溶血等特征，判斷培養(yǎng)基是否符合要求。5 .保存：液體培養(yǎng)基及瓊脂平板須在 4C 保存，一般不超過(guò) 7 天，如用塑料袋密封至多保存 2 周。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名唐玉貞檢驗(yàn)科檢驗(yàn)科日期06 年 06 月 06 日IV 革蘭染色的標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期檢驗(yàn)科革蘭染色檢驗(yàn)科06 年

6、06 月 06 日【目的】確保染色結(jié)果清晰可靠。【該 SO 喳動(dòng)程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)， 可由任一使用本 SO 用勺工作人員提出， 并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！驹噭? .結(jié)晶紫溶液A 液：結(jié)晶紫 2g95%乙醇 20mlB 液：草酸俊 0.8g蒸儲(chǔ)水 80ml使用前 24 小時(shí)將 A 液 B 液混合后，過(guò)慮后裝入試劑瓶?jī)?nèi)備用。2 .碘液碘 1g碘化鉀 2g蒸儲(chǔ)水 300ml3 .脫色液：95 叱醇4 .復(fù)染液儲(chǔ)存液：沙黃 2.5g95%乙醇 100ml應(yīng)用液：儲(chǔ)存液 10ml蒸儲(chǔ)水 90ml【方法】1 .待檢標(biāo)本用無(wú)菌生理鹽水涂片，經(jīng)自然干燥或火焰固定。2 .加結(jié)晶紫液染

7、 1 分鐘，清水沖去染液。3 .加碘液染 1 分鐘，清水沖去染液。4 .加 95%L 醇脫色液，不時(shí)搖動(dòng)約 10-30 分鐘，至紫色已脫落為至，水沖洗。5 .加復(fù)染液（伊紅），染 30 分鐘，水沖洗。6 .待涂片自然干燥后，油鏡鏡檢。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名唐玉貞檢驗(yàn)科檢驗(yàn)科日期06 年 06 月 06 日V 抗酸染色的標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期檢驗(yàn)科抗酸染色檢驗(yàn)科,06 年 06 月 06 日 1【目的】確保染色結(jié)果清晰可靠?！痉椒ā浚ㄒ唬A性復(fù)紅染色法【試劑】1、萋納石炭酸復(fù)紅溶液堿性復(fù)紅乙醇飽和溶液 10ml5 面炭酸溶液 90ml2、脫色劑濃鹽酸 3ml95%97ml

8、3、復(fù)染液（呂弗勒美藍(lán)液）美藍(lán)乙醇飽和溶液 30ml10%R 氧化鉀 0.1ml蒸儲(chǔ)水 100ml【染色步驟】1、涂片經(jīng)自然干燥或火焰固定后，加石炭酸復(fù)紅溶液，徐徐加熱至有蒸汽出現(xiàn)，切不可沸騰。染 5 分鐘（若染色奴卡菌需要加長(zhǎng)時(shí)間），水洗。2、加脫色劑，不時(shí)搖動(dòng)坡片至無(wú)紅色脫落為至，水洗。3、加復(fù)染液，染 0.5-1 分鐘。4、干后鏡檢。分枝桿菌呈紅色，背景為藍(lán)色。注：奴卡菌、放線菌標(biāo)本染色時(shí)，脫色劑改用 2%（酸水溶液。（二）金胺 O-羅丹明 B 染色法【染劑】1、羅丹明 B 液：羅丹明 B0.1g 加蒸儲(chǔ)水 100ml;2、0.1%金月OO 液：金胺 O0.1g 加蒸儲(chǔ)水 95ml,再加

9、入純石炭酸 5ml,混勻。3、3%fc 酸酒精。4、稀釋美藍(lán)液：呂弗勒美藍(lán)液 10ml,加蒸儲(chǔ)水 90ml,混勻。【方法】1、涂片固定后加第 1 液 30-90 分鐘。2、棄去第 1 液后加第 2 液染 15 分鐘。3、用第 3 液脫色 1-2 分鐘，水洗。4、滴加第 4 液染 30 分鐘，水洗，待干，熒光鏡檢?！窘Y(jié)果】抗酸菌在暗背景中呈現(xiàn)金黃色熒光。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名唐玉貞檢驗(yàn)科檢驗(yàn)科日期06 年 06 月 06 日VI 血培養(yǎng)標(biāo)本采集的標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期檢驗(yàn)科血培養(yǎng)標(biāo)本的米集檢驗(yàn)科06 年 06 月 06 日【目的】指導(dǎo)血液標(biāo)本的正確采集?！驹?SO 吃動(dòng)程

10、序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本 SOP 勺工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！静襟E】1 .選擇一適當(dāng)?shù)撵o脈穿刺處，先以 70%酉精擦拭。2 .再用棉簽沾取 2%*酊涂于欲作靜脈穿刺處，讓其干后再用 70%酉精擦拭。3 .全部手續(xù)再作一此（如必要）4 .用一支無(wú)菌的 21 號(hào)針頭與 10ml 針筒抽空（成人約抽取 10ml 血液，小孩約抽取 1-5ml）05 .血液抽出后，立即注入血液培養(yǎng)瓶，馬上充分混勻后，再送入檢驗(yàn)。操作人員部門主管姓名唐玉貞檢驗(yàn)科檢驗(yàn)科日期06 年 06 月 06 日vn 血液及骨髓微生物學(xué)檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期檢

11、驗(yàn)科血液及骨髓微生物學(xué)檢驗(yàn)檢驗(yàn)科06*年 06 月 06 日【目的】保證血（骨髓）培養(yǎng)結(jié)果的正確性?！驹揝O吃動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本SOP勺工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！緦?shí)驗(yàn)條件】培養(yǎng)箱或厭氧培養(yǎng)箱（或厭氧罐）或全自動(dòng)血培養(yǎng)儀?！静僮鞒绦? 1（一）標(biāo)本采集嚴(yán)格無(wú)菌技術(shù)取血液 10ml（兒童血液 1-5ml）、骨髓 0.5-1ml 注入血培養(yǎng)瓶后立即送實(shí)驗(yàn)室，注入?yún)捬跗繒r(shí)要注意勿將注射器內(nèi)的空氣注入瓶?jī)?nèi)，培養(yǎng)瓶在送試驗(yàn)室前，不可放冰箱暫存。（二）培養(yǎng)1 .實(shí)驗(yàn)室接到血培養(yǎng)瓶后，放 350C 孵育。2 .經(jīng)過(guò) 12-18 小時(shí)，350C 孵育后，在

12、血平板或巧克力平板上盲傳一次。3 .盲傳后繼續(xù)孵育，每日早晨觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，直至第 7 天。4 .無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)表現(xiàn)的培養(yǎng)瓶，在觀察的 7 天中，最少應(yīng)做 2 次盲目傳種。5 .全自動(dòng)血培養(yǎng)儀培養(yǎng)時(shí)，待其儀器報(bào)警，涂片、接種；若儀器未報(bào)警，5 天后盲種，仍為陰性，才能報(bào)告。（三）分離鑒定1 .盲傳陽(yáng)性或肉眼可見(jiàn)生長(zhǎng)現(xiàn)象，直接涂片做革蘭染色，所見(jiàn)結(jié)果應(yīng)及時(shí)報(bào)告臨床醫(yī)師。2 .根據(jù)涂片結(jié)果，如為一種細(xì)菌生長(zhǎng)，則直接以增菌液做鑒定實(shí)驗(yàn)；如有兩種或多種細(xì)菌同時(shí)生長(zhǎng)，則必須經(jīng)過(guò)分離培養(yǎng)，以獲得純菌種后做鑒定。3 .細(xì)菌鑒定要做到種的鑒定。（四）藥敏實(shí)驗(yàn)1 .根據(jù)涂片結(jié)果，直接以培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的增菌液做直接藥物敏

13、感性測(cè)試，爭(zhēng)取在較短時(shí)間內(nèi)得出初步結(jié)果，供臨床醫(yī)師作為治療的參考。2 .標(biāo)本經(jīng)平板分離純培養(yǎng)后，做標(biāo)準(zhǔn)化藥敏實(shí)驗(yàn)正式報(bào)告給臨床?！窘Y(jié)果的判斷】1 .疑有細(xì)菌生長(zhǎng)者，經(jīng)涂片、革蘭染色鏡檢后，電話通知主管醫(yī)師。2 .任何時(shí)候平板上長(zhǎng)出單個(gè)菌落，應(yīng)立即完成鑒定就及標(biāo)準(zhǔn)化藥敏實(shí)驗(yàn)，并發(fā)出報(bào)告，報(bào)告形式為“XXXffl 菌生長(zhǎng)”，藥敏實(shí)驗(yàn)報(bào)告形式為“XXXS 感”等。3 .培養(yǎng) 3 天為陰性的標(biāo)本，應(yīng)電話通知臨床醫(yī)師，培養(yǎng) 7 天仍為陰性者，應(yīng)報(bào)告“經(jīng) 7 日培養(yǎng)無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)”。部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名唐玉貞檢驗(yàn)科檢驗(yàn)科06*0606保證質(zhì)量評(píng)價(jià)的準(zhǔn)確可靠【作用】即藥敏試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制

14、定日期檢驗(yàn)科藥敏試驗(yàn)檢驗(yàn)科06 年 06 月 06 日、K 一 B 法【目的】保證紙片擴(kuò)散法藥敏結(jié)果的可靠性?！静牧稀浚ㄒ唬┡囵B(yǎng)基Mueller-Hinton 瓊脂平板，只適合腸桿菌科、銅綠假單胞菌、不動(dòng)桿菌、葡萄球菌、腸球菌、霍亂弧菌；HTM脂，只適合嗜血桿菌；GC 瓊脂+1%特定的生長(zhǎng)因子，只適合淋病奈瑟菌；Mueller-Hinton 瓊脂+5%羊血，只適合鏈球菌。（二）藥敏紙片抗菌藥物紙片直徑約為 6.0-6.35mm,每片的吸水量約 20ml。（三）質(zhì)控菌株K-B 法質(zhì)量控制用菌株常規(guī)用：金黃色葡萄球菌 ATCC25923 大腸埃希菌ATCC25922 銅綠假單胞菌 ATCC2785

15、3（四）菌液比濁管接種菌液濃度為 1.5x108/ml,相當(dāng)于 0.5 的麥?zhǔn)媳葷峁??！痉椒ā? .制備接種菌液：挑選瓊脂平板上，形態(tài)相同的菌落移種于 M-H 液體培養(yǎng)基中，置 350C 溫箱中孵育 4 小時(shí)，校正濁度，或用接中環(huán)挑取菌落，置浮于生理鹽水中振蕩混勻后與標(biāo)準(zhǔn)化濁管比濁，調(diào)整濁度與比濁管相同。2 .接種平板：用無(wú)菌棉簽蘸取已制備好的接種好的菌液，在管壁上旋轉(zhuǎn)擠壓九次，去掉過(guò)多的菌液，涂布整個(gè) M-H 培養(yǎng)基表面，并將平板旋轉(zhuǎn) 60C,反復(fù)幾次，最后沿平皿周邊繞兩圈，保證涂布均勻。3 .貼紙片：待平板上的水分被瓊脂完全吸收后（約 15 分鐘），用無(wú)菌銀子取紙片貼在瓊脂平板表面，并用銀

16、尖輕壓一下，使其貼平。每張紙片間距不少于 24mm 紙片中心距平皿邊緣不少于 15mm4 .孵育：把貼好藥敏紙片的平皿放進(jìn) 350C 孵平板，最好單獨(dú)擺放，不超過(guò) 2 個(gè)疊在一起，孵育 18-24 小時(shí)后，讀取結(jié)果。5 .判定結(jié)果：培養(yǎng)后取出平板，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌環(huán)的直徑，抑菌環(huán)的邊緣以肉眼見(jiàn)不到細(xì)菌明顯生長(zhǎng)為限，然后根據(jù)抑菌環(huán)直徑大小、NCCLSJ 斷細(xì)菌的敏感性，并加以記錄。二、稀釋試驗(yàn)【目的】1 .為了決定抗生素的最低抑菌濃度（MIC）。2 .為了決定抗生素殺菌能力，或?qū)嶒?yàn)兩種以上抗生素對(duì)細(xì)菌的協(xié)同作用或?qū)棺饔??！痉椒ā浚ㄒ唬┤鉁♂屧囼?yàn)1 .適用情況：1血液培養(yǎng)。2病人對(duì)適當(dāng)治療方

17、法無(wú)效。3免疫機(jī)能障礙病人4病人經(jīng)治療后復(fù)發(fā)者。2 .培養(yǎng)基的選擇：一般細(xì)菌用調(diào)節(jié)好陽(yáng)離子的 M-H 肉湯（CAMRB 如腸桿菌科、銅綠假單胞菌、不動(dòng)桿菌、葡萄球菌、腸球菌、霍亂弧菌；某些挑剔性細(xì)菌則根據(jù)其生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)需要，向 M-H 肉湯中加入適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如 HTM湯，只適合嗜血桿菌；CAMHB2-5%凍融馬血，適合肺炎鏈球菌以及以外的鏈球菌。3 .肉湯的連續(xù)稀釋：1將各種抗微生物藥物庫(kù)存液稀釋成 200ug/ml 或 200u/ml。2取 10 支無(wú)菌試管，寫上編號(hào) 1-10,為一組每種抗生素需一種。3自第 2 管至 10 管各加入無(wú)菌肉湯 1。04將各實(shí)驗(yàn)藥分別加 1.0ml 至

18、第 1 管及第 2 管，將第 2 管混勻后移取 0.1ml 至第 3 管，同樣操作，倍比稀釋至第 9 管，第 10 管不加抗生素作為陽(yáng)性生長(zhǎng)對(duì)照。5另外準(zhǔn)備僅含肉湯的試管，作為陰性對(duì)照。4 .細(xì)菌的接種1每支試管接種 1.0ml 菌液 （約 105-106個(gè)細(xì)菌/ml） ,也可將細(xì)菌調(diào)至 0.5 個(gè)麥?zhǔn)蠞岫仍儆萌鉁?1:200 然后接種 1.0ml 至每支試管內(nèi)。2接種后每支試管含混合液，抗生素濃度為 512ug（u）-O.125ug（u）。3若細(xì)菌對(duì)某種抗生素特別敏感，可把操作液先稀釋 10 倍，再予連續(xù) 2 倍稀釋，最后的濃度為 10;5;2.5;0.6;0.3;0.15;0.08;及

19、0.04ug/ml。5 .培養(yǎng)和結(jié)果的判斷在 350C 溫箱中培養(yǎng) 16-20 小時(shí)后，肉眼觀察生長(zhǎng)情況，陽(yáng)性對(duì)照管可見(jiàn)渾濁生長(zhǎng)，陰性對(duì)照管則應(yīng)清澈。以抗生素能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)管的最低濃度為其 MIC 值。6 .測(cè)量最低殺菌濃度（MBC把無(wú)菌生長(zhǎng)的每一試管吸 0.1ml 加到 500C 的胰蛋白凍肉湯（Trypticsoybroth,TSA）20ml 混合均勻后分別倒平板，培養(yǎng) 48-72 小時(shí)后計(jì)算菌落數(shù)，和 1:200 稀釋原菌液作傾注獲得的細(xì)菌數(shù)相比，減少 99.9%,其最小抑菌濃度為可得到抗生素的 MBCS。一般在實(shí)際運(yùn)用中，采用定量接種環(huán)（0.001 毫升）涂化平板，孵育后，平板菌落計(jì)數(shù)

20、小于 5 個(gè)，其抑菌濃度為最小殺菌濃度。7 .質(zhì)控：利用 NCCLSt 議的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行質(zhì)控。（二）微量肉湯稀釋敏感實(shí)驗(yàn)手工法：原理與試管稀釋方法相同。具體操作是在含有 96 小孔的小塑料培養(yǎng)盤進(jìn)行，每一孔可裝 0.1ml 量，每一盤可同時(shí)作數(shù)種抗生素的數(shù)種不同濃度，另 2 孔作為陽(yáng)性與陰性對(duì)照。儀器法：配制儀器 Minidiluter 或 MIC-2000（美國(guó)）Dynatechlabortories,Alexandria,YA自配或購(gòu)買現(xiàn)成的實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基。（三）瓊脂稀釋法1 此法與肉湯稀釋實(shí)驗(yàn)原理相同，但又有其優(yōu)點(diǎn)：可同時(shí)實(shí)驗(yàn)許多菌株，利用多點(diǎn)接種儀可同時(shí)接種多個(gè)菌株到一系列含有各種不同抗生

21、素濃度的平板?？蓹z測(cè)是否污染：由細(xì)菌在平板上生長(zhǎng)的特性判斷?？蓪?duì)肉湯稀釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果不佳的挑剔性細(xì)菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2 .瓊脂培養(yǎng)基的選擇：一般使用 M-H 瓊脂，它適合腸桿菌科、銅綠假單胞菌、不動(dòng)桿菌、葡萄球菌、腸球菌、霍亂弧菌；對(duì)挑剔的細(xì)菌可加入相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)物，如巧克力、動(dòng)物血、5%兌纖維血或冷凍動(dòng)物血等，如 HTM脂，只適合嗜血桿菌；GC 瓊脂+1%特定的生長(zhǎng)因子，只適合淋病奈瑟菌；Mueller-Hinton 瓊脂+5%羊血，只適合肺炎鏈球菌以外的鏈球菌。3 .抗生素稀釋與平板的配制。4 .平板的接種：1每一試驗(yàn)菌株需調(diào)整濃度至 0.5 麥?zhǔn)蠞岫取?平板點(diǎn)接種可用定量接種杯（0.001ml）、毛細(xì)

22、吸管或自動(dòng)接種儀器進(jìn)行。同時(shí)作 5 個(gè)對(duì)照菌株作為質(zhì)控：大腸埃希菌 ATCC25922 大腸埃希菌 ATCC35218 金黃色葡萄球菌 ATCC29213 糞腸球菌 ATCC292125 .待接種菌液被完全吸收后，倒置培養(yǎng)在 350C 溫箱內(nèi)。6 .結(jié)果的判斷：16-20 小時(shí)后，首先看不含抗生素的對(duì)照平板，必須有一株生長(zhǎng)，然后看各實(shí)驗(yàn)平板，凡能完全抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的抗生素最低濃度即為 MIC 值。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人姓名唐玉貞檢驗(yàn)科檢驗(yàn)科日期 06 年 06 月 06 日K 藥敏實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)操作實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期檢驗(yàn)科藥敏實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制檢驗(yàn)科06 年 06 月 06 日

23、【目的】保證藥敏報(bào)告的準(zhǔn)確性，可靠性及重現(xiàn)性?！驹?SO 吃動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本 SOP 勺工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！具m用范圍】瓊脂紙片擴(kuò)散法?！痉椒ā恳还赎P(guān)苴、夕口仆是紙片擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)必須使用 M-H 瓊脂培養(yǎng)基，因?yàn)樗缓种苹前匪幬?，而其他種類培養(yǎng)基可能含有與磺胺藥拮抗的物質(zhì)，使其抑菌環(huán)變小。1 .培養(yǎng)基的制作過(guò)程必須統(tǒng)一，無(wú)論是培養(yǎng)基或添加物的劑量、PH 值、高溫滅菌的時(shí)間或溫度都需遵照規(guī)定，2 .新的粉狀脫水培養(yǎng)基打開(kāi)時(shí)，要附廠商、編號(hào)、日期、及打開(kāi)者的姓名。3 .無(wú)菌實(shí)驗(yàn)：每一批配好的培養(yǎng)基其中抽取 5%勺量在 350C 或其他適合

24、的溫度下隔夜培養(yǎng)，觀察有無(wú)菌落生長(zhǎng)。4 .若是新購(gòu)的培養(yǎng)基必須觀察其顏色與透明度， 若有沉淀、 渾濁或脫水的現(xiàn)象都必須丟棄，新配好的 M-H 培養(yǎng)基，用塑料袋包好，儲(chǔ)藏于 40C 的水箱內(nèi)，防水蒸5 .平板所含培養(yǎng)基的量太多或太少均不宜，如 MuellerHintonagar 的高度不可超過(guò) 4mm 否則會(huì)影響抑菌環(huán)的直徑（變小）。6 .定期檢測(cè)培養(yǎng)基的有效性，并對(duì)結(jié)果加以記錄，以便能隨時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題。7 .培養(yǎng)基要在有效期內(nèi)使用。二、試劑鑒定細(xì)菌實(shí)驗(yàn)所用的紙條或紙片，儲(chǔ)藏于冰箱時(shí)，須附干燥劑，且須注意所標(biāo)明的有效期限。紙片購(gòu)入時(shí)須作陽(yáng)性與陰性對(duì)照以檢查其是否有效，以后可每周做一次。三、抗生素粉末

25、與抗生素紙片檢查室診斷過(guò)程中所用抗生素粉末必須保持干燥，置冰箱儲(chǔ)藏，若其制成高濃度的庫(kù)存溶液，應(yīng)該采取少量分裝于各小瓶，貯存于-140C 或-140C 以下，一旦取出解凍，未用完的就應(yīng)丟棄。若抗生素粉末用于稀釋試驗(yàn)時(shí)，須限已知 MIC 的微生物作對(duì)照。作藥敏用的抗生素紙片應(yīng)放干燥劑并貯存于-140C 或-140C 以下，若情況不允許，除了penicillins、cephalosporins 及 oxacillin 紙片仍必須冰凍外，其余可置冰箱貯存。從冰箱取出裝抗生素紙片的容器，須待其復(fù)溫至室溫后才能打開(kāi)使用。每天在作藥敏試驗(yàn)時(shí)，最好同時(shí)取已知敏感的微生物質(zhì)控菌株作對(duì)照，來(lái)測(cè)驗(yàn)紙片的功效。四、裝備1 .培養(yǎng)箱、冰箱等裝備于每天早上上班時(shí)須記錄溫度并校正，使用過(guò)程中應(yīng)注意溫度有無(wú)變化。2 .CO 培養(yǎng)箱，要確保其所含的 CO 量。3 .厭氧缸在使用時(shí)，催化劑要先在 1600c 干燥箱中加熱 1-2 小時(shí)，使其恢復(fù)功能，且同時(shí)于缸中放入生物指示劑可確定是否絕對(duì)無(wú)氧。五、操作人員素質(zhì)操作者應(yīng)熟悉藥敏試驗(yàn)的規(guī)范步驟，尤其要注意其影響因素，如：接種菌的濃度不能太高或太低，應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化；接種要用無(wú)菌棉拭子，