實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌人工培養(yǎng)PPT課件

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康膎了解人工培養(yǎng)基的制作。了解人工培養(yǎng)基的制作。n了解了解細(xì)菌的接種方法細(xì)菌的接種方法 分離培養(yǎng)方法分離培養(yǎng)方法平板劃線法平板劃線法 （混合菌液）（混合菌液）n了解了解細(xì)菌的生長現(xiàn)象細(xì)菌的生長現(xiàn)象 液體、固體、半固體培養(yǎng)基液體、固體、半固體培養(yǎng)基第1頁/共22頁 一、一、人工培養(yǎng)基的制備和種類人工培養(yǎng)基的制備和種類n1. 1.制備原則制備原則n2.2.制備程序制備程序 n3.3.常用培養(yǎng)基的分類常用培養(yǎng)基的分類 第2頁/共22頁1. 1.制備原則制備原則l（1 1）適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)成分；）適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)成分；l（2 2）合適的酸堿度；）合適的酸堿度；l（3 3）配制后經(jīng)滅菌使之無菌，方可應(yīng)

2、用。）配制后經(jīng)滅菌使之無菌，方可應(yīng)用。 第3頁/共22頁2.2.制備程序制備程序l配料配料熔化熔化測定及矯正測定及矯正PHPH分裝分裝滅菌滅菌備用備用配制方法配制方法（1）稱量）稱量 分別稱取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和分別稱取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于燒杯中。置于燒杯中。（2）溶化）溶化 加入所需水量加入所需水量2/3的蒸餾水于燒杯中，用玻棒攪拌，使的蒸餾水于燒杯中，用玻棒攪拌，使藥品全部溶化。藥品全部溶化。（3）調(diào)）調(diào)pH 用用1mol/L NaOH溶液調(diào)溶液調(diào)pH至至7.2。（4）定容）定容 將溶液倒入量筒中，加水至所需體積。將溶液倒入量筒中，加水至所需體積。（5

3、）加瓊脂）加瓊脂 加入所需量瓊脂，加熱融化，補(bǔ)足失水。加入所需量瓊脂，加熱融化，補(bǔ)足失水。（6）分裝、加塞、包扎。）分裝、加塞、包扎。（7）高壓蒸汽滅菌）高壓蒸汽滅菌100Pa滅菌滅菌20min。LBLB培養(yǎng)基的配制：培養(yǎng)基的配制：成分：胰蛋白胨成分：胰蛋白胨(tryptone) 10g、酵母提取物、酵母提取物(yeast extract) 5g氯化鈉氯化鈉(NaCl) 10g、固體培養(yǎng)基另加、固體培養(yǎng)基另加 瓊脂粉瓊脂粉 15-20g，加雙蒸水至，加雙蒸水至1000mL, 用用5mol/L NaOH（約（約0.2ml）調(diào)）調(diào)pH至至7.2，121滅菌滅菌30min。第4頁/共22頁按物理狀態(tài)

4、不同劃分按物理狀態(tài)不同劃分固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使其成為固體狀態(tài)，瓊脂含量一般為其成為固體狀態(tài)，瓊脂含量一般為1.5%-2.0%1.5%-2.0%瓊脂含量一般為瓊脂含量一般為0.3%-0.5%不加任何不加任何凝固劑凝固劑半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基常用來進(jìn)行微生物的分離、固體培養(yǎng)基常用來進(jìn)行微生物的分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)及菌種保藏鑒定、活菌計(jì)數(shù)及菌種保藏 觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征、分類鑒定及觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征、分類鑒定及噬菌體效價(jià)滴定噬菌體效價(jià)滴定 用于增菌，大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)及在實(shí)驗(yàn)用于增菌，大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)及

5、在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物的研究室進(jìn)行微生物的研究 3.3.常用培養(yǎng)基的分類常用培養(yǎng)基的分類第5頁/共22頁按用途不同劃分按用途不同劃分基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基含有一般微生物生長繁殖所需的基本營養(yǎng)物。含有一般微生物生長繁殖所需的基本營養(yǎng)物。比如比如 肉湯培養(yǎng)基。肉湯培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基利用細(xì)菌代謝產(chǎn)物不同而使指示劑顯色反應(yīng)利用細(xì)菌代謝產(chǎn)物不同而使指示劑顯色反應(yīng)不同的原理，鑒別和鑒定細(xì)菌。如不同的原理，鑒別和鑒定細(xì)菌。如麥糠凱瓊麥糠凱瓊脂培養(yǎng)基。脂培養(yǎng)基。營養(yǎng)培養(yǎng)基營養(yǎng)培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長

6、，有利于物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長，有利于所需微生物的生長。所需微生物的生長。用來將某種或某類微生用來將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來。物從混雜的微生物群體中分離出來。如如SS瓊瓊脂培養(yǎng)基。脂培養(yǎng)基。在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊營養(yǎng)物質(zhì)制成的在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊營養(yǎng)物質(zhì)制成的一類營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基。如一類營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基。如血瓊脂培養(yǎng)基。血瓊脂培養(yǎng)基。特殊培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)基如厭氧培養(yǎng)基。如厭氧培養(yǎng)基。用于厭氧菌的培養(yǎng)。用于厭氧菌的培養(yǎng)。3.3.常用培養(yǎng)基的分類常用培養(yǎng)基的分類第6頁/共22頁二、細(xì)菌的接種技術(shù)二、細(xì)菌的接種技術(shù) 分離培養(yǎng)接種法分離培養(yǎng)接種法平板劃線法、平行劃線

7、平板劃線法、平行劃線法法 純種細(xì)菌接種法純種細(xì)菌接種法 固體斜面培養(yǎng)基接種法固體斜面培養(yǎng)基接種法 液體培養(yǎng)基接液體培養(yǎng)基接種法種法 半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基接種法接種法 第7頁/共22頁無菌操作：無菌操作：在無菌箱或操作室內(nèi)無菌的環(huán)境下進(jìn)行在無菌箱或操作室內(nèi)無菌的環(huán)境下進(jìn)行第8頁/共22頁第9頁/共22頁 常用的有接種針、接種環(huán)、接種鉤、接種圈、接種常用的有接種針、接種環(huán)、接種鉤、接種圈、接種鏟或接種鋤、玻璃涂棒等。鏟或接種鋤、玻璃涂棒等。圖6接種工具接種工具第10頁/共22頁 細(xì)菌分離培養(yǎng)接種法的原理細(xì)菌分離培養(yǎng)接種法的原理 根據(jù)機(jī)械分離作根據(jù)機(jī)械分離作用，在無菌培養(yǎng)基中從用，在無菌培養(yǎng)基中

8、從混雜的標(biāo)本中分離出所混雜的標(biāo)本中分離出所需的單個(gè)細(xì)菌生長繁殖需的單個(gè)細(xì)菌生長繁殖所形成的菌落。所形成的菌落。 第11頁/共22頁 1、以無菌操作用接種環(huán)取待分離純化的菌液，將菌液點(diǎn)種在、以無菌操作用接種環(huán)取待分離純化的菌液，將菌液點(diǎn)種在平板邊緣一處，取出接種環(huán)，燒去多余的菌種。平板邊緣一處，取出接種環(huán)，燒去多余的菌種。 2、將接種環(huán)再次通過稍打開皿蓋的縫隙（約、將接種環(huán)再次通過稍打開皿蓋的縫隙（約45度角）伸入平度角）伸入平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻,然后從接種有菌然后從接種有菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線。的部位在平板上自左向右輕輕劃

9、線。 3、劃線時(shí)平板面與接種環(huán)面成、劃線時(shí)平板面與接種環(huán)面成30-40度角，以手腕力量在平板度角，以手腕力量在平板表面輕巧滑動(dòng)劃線表面輕巧滑動(dòng)劃線, 線條要平行密集，充分利用平板表面積，線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前后兩條線重疊，劃線完畢，關(guān)上皿蓋注意勿使前后兩條線重疊，劃線完畢，關(guān)上皿蓋.灼燒接種環(huán)。灼燒接種環(huán)。 4.用接種環(huán)先將培養(yǎng)物涂布于平板用接種環(huán)先將培養(yǎng)物涂布于平板1區(qū)并作數(shù)次劃線區(qū)并作數(shù)次劃線,再在再在2、3區(qū)依次劃線。區(qū)依次劃線。 5.每劃完一個(gè)區(qū)域，均將接種環(huán)滅菌一次，待冷后再劃下一區(qū)每劃完一個(gè)區(qū)域，均將接種環(huán)滅菌一次，待冷后再劃下一區(qū)域域 6.每一區(qū)域的劃線均

10、接觸上一區(qū)域的接種線每一區(qū)域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線12次，使接種量次，使接種量逐漸減少，以獲得單個(gè)菌落。其他操作與上述曲線劃線分離法逐漸減少，以獲得單個(gè)菌落。其他操作與上述曲線劃線分離法相同。相同。 斜線斜線( (分區(qū)分區(qū)) )劃線分離法劃線分離法第12頁/共22頁劃線接種注意要點(diǎn)劃線接種注意要點(diǎn)劃線時(shí)接種環(huán)與平皿約成劃線時(shí)接種環(huán)與平皿約成30-40度角度角,輕輕接觸輕輕接觸,以以腕力在瓊脂表面輕快滑動(dòng)腕力在瓊脂表面輕快滑動(dòng),不能劃破瓊脂不能劃破瓊脂.第一次劃線應(yīng)占平皿面積的第一次劃線應(yīng)占平皿面積的1/10,以后每次劃線約以后每次劃線約占面積的占面積的1/41/5.劃線為連續(xù)劃線劃線為連

11、續(xù)劃線,不能間斷不能間斷.應(yīng)占滿平皿應(yīng)占滿平皿.劃線不能交劃線不能交叉重復(fù)叉重復(fù).每次劃完后接種環(huán)應(yīng)滅菌每次劃完后接種環(huán)應(yīng)滅菌.第13頁/共22頁1、瓊脂斜面接種法、瓊脂斜面接種法菌種：葡萄球菌、大菌種：葡萄球菌、大腸埃希菌等普通瓊脂腸埃希菌等普通瓊脂培養(yǎng)物；培養(yǎng)物；培養(yǎng)基：斜面固體培培養(yǎng)基：斜面固體培養(yǎng)基；養(yǎng)基；用途：擴(kuò)增細(xì)菌、保用途：擴(kuò)增細(xì)菌、保存菌種；或用于觀察存菌種；或用于觀察其某些生化特性其某些生化特性純種細(xì)菌接種法純種細(xì)菌接種法 第14頁/共22頁2、液體接種法、液體接種法菌種：葡萄球菌或大腸菌種：葡萄球菌或大腸埃希菌、枯草桿菌等普埃希菌、枯草桿菌等普通瓊脂培養(yǎng)物；通瓊脂培養(yǎng)物；培

12、養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基；培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基；接種方法：液體接種法。接種方法：液體接種法。 從斜面菌種接入液體從斜面菌種接入液體培養(yǎng)液；從液體培養(yǎng)液培養(yǎng)液；從液體培養(yǎng)液接入液體培養(yǎng)液；接入液體培養(yǎng)液；用途：擴(kuò)增細(xì)菌，用于用途：擴(kuò)增細(xì)菌，用于觀察細(xì)菌的生長特性或觀察細(xì)菌的生長特性或測定其生化特性。測定其生化特性。純種細(xì)菌接種法純種細(xì)菌接種法 第15頁/共22頁3、半固體穿種接種法、半固體穿種接種法菌種：葡萄球菌、大腸埃菌種：葡萄球菌、大腸埃希菌等普通瓊脂培養(yǎng)物；希菌等普通瓊脂培養(yǎng)物；培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基接種方法：接種方法：穿刺接種法。穿刺接種法。用接種針垂直地穿入培養(yǎng)用接種針垂直地穿

13、入培養(yǎng)基中心至底部；然后沿著基中心至底部；然后沿著原接種線將針拔出。原接種線將針拔出。用途：檢驗(yàn)細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性用途：檢驗(yàn)細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性或觀察細(xì)菌的生化反應(yīng)?；蛴^察細(xì)菌的生化反應(yīng)。純種細(xì)菌接種法純種細(xì)菌接種法 第16頁/共22頁（1 1）固體培養(yǎng)基）固體培養(yǎng)基形成菌落和菌苔。形成菌落和菌苔。觀察菌落的大小、形態(tài)、透明度、顏色、表面和邊觀察菌落的大小、形態(tài)、透明度、顏色、表面和邊緣情況及菌落周圍有無溶血環(huán)等。緣情況及菌落周圍有無溶血環(huán)等。三三. .細(xì)菌生長現(xiàn)象觀察（示教）細(xì)菌生長現(xiàn)象觀察（示教）第17頁/共22頁不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征（形狀、顏色等），可以成為對該微生物進(jìn)行分類、鑒定的重要依據(jù)。第18頁/共22頁（2 2）液體培養(yǎng)基）液體培養(yǎng)基均勻混濁生長均勻混濁生長菌膜形成（專性需氧菌）菌膜形成（專性需氧菌）沉淀生長（多見于鏈狀排列的細(xì)菌）沉淀生長（多見于鏈狀排列的細(xì)菌）第19頁/共22頁（3 3）半固體培養(yǎng)基）半固體培養(yǎng)基可用于觀察細(xì)菌有可用于觀察細(xì)菌有無動(dòng)力。無動(dòng)力。痢疾志賀菌沿穿刺痢疾志賀菌沿穿刺線生長，穿刺線清晰，線生長，穿刺線清晰，周圍培養(yǎng)基仍為透明，周圍培養(yǎng)基仍為透明