PCR實驗室要求

1、PCR實驗室設(shè)計要求及功能分區(qū)PCR實驗室分為四個區(qū)域，進入各工作區(qū)域必須嚴格按照單一方向進行，不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū)域時，不得將工作服帶出，四區(qū)域分別為：1.試劑配制區(qū) n2.樣品處理區(qū) n3.核酸擴增區(qū) n4.產(chǎn)物分析區(qū) n如使用全自動分析儀，區(qū)域可適當合并,三四區(qū)可合并為擴增產(chǎn)物分析。各區(qū)的功能是：試劑準備區(qū)：擴增試劑的配制、分裝和保存。樣品處理區(qū)：樣品登記、分裝；核酸提取、保存和加樣。擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增產(chǎn)物的測定、結(jié)果分析、登記及報告。1.2 擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應(yīng)嚴格分開，須使用不同的房間，兩區(qū)之間有一定的間隔。1.3 使用商品化試劑盒

2、可在樣品處理區(qū)進行少量試劑配制。1.4 在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區(qū)和試劑準備區(qū)可設(shè)在同一房間內(nèi)：在生物安全柜內(nèi)操作。每個實驗人員、實驗組分別使用各自的試劑及耗材。盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。用有效的方法對操作區(qū)域和共享器具在實驗前后進行清潔及消毒。設(shè)計要求：PCR實驗室可以是分散形式， 也可以是組合形式 ,現(xiàn)要主要是以組合形式為主流。完成一組 PCR實驗，通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴增及產(chǎn)物分析四個實驗過程， 若實驗工藝需要， 還應(yīng)增加樣品粉碎過程。一、分散形式 PCR實驗室所謂分散形式 PCR實驗室，是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠， 呈分散布置

3、形式。 對于這種布置形式的 PCR實驗室，由于各個實驗之間不易相互干擾，因此無需特殊條件要求。二、組合形式 PCR實驗室所謂組合形式 PCR實驗室 , 是指完成 PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布置，組成獨立實驗區(qū)域的形式。對于組合形式 PCR實驗室，由于各個實驗間集中布置，容易造成相互干擾，因此，對總體布局以及屏障系統(tǒng)具有一定的要求。 各室在入口處設(shè)緩沖間， 以減少室內(nèi)外空氣交換。試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓， 以防外界含核酸氣溶膠的空氣進入，造成污染 ,可以通過控制進風風量大于排風風量達到正壓效果。核酸擴增室及產(chǎn)物分析室應(yīng)呈微負壓，以防含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品， 可以通過控

4、制排風風量大于進風風量達到負壓效果。在理想情況下， PCR實驗室緩沖間內(nèi)，可設(shè)置正壓，使室內(nèi)空氣不流向室外，室外空氣不流向室內(nèi)。PCR實驗室進風由原有中央空調(diào)控制，要求將中央空調(diào)風口安裝到指定定點，且高度為地面鋪裝好后2600mm 處。如果使用熒光 PCR儀，擴增室和產(chǎn)物分析室可以合并。若房間進深允許， 可設(shè) PCR內(nèi)部專用走廊。 需要指出的是在減少室內(nèi)外空氣交換方面，緩沖間比專用走廊更有意義。各個區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實驗工藝流、物流、人流與氣流，形成單向流程的保護屏障， 避免實驗之間的相互干擾， 防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。實驗室的墻體，包括頂棚，應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好 ；所

5、有陰角宜采用圓弧形線條過渡； 墻體內(nèi)壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；地面材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。主要設(shè)備試劑準備區(qū) 儀器設(shè)備主要有冰箱、超凈臺、加樣器、混勻器、天平和離心機等，加樣器、天平除了要專用外，還應(yīng)有定期校準。 試劑分裝應(yīng)在超凈臺中進行 擴增反應(yīng)混合液應(yīng)使用分子生物學(xué)級的，試劑制備好后應(yīng)有質(zhì)檢：一是否有污染、二是檢測試劑的擴增效果。標本制備區(qū)儀器設(shè)備主要有生物安全柜、加樣器、離心機、溫育儀、混勻器等擴增區(qū)擴增區(qū)的主要儀器是核酸擴增儀、 超凈臺、微量加樣器、離心機、可移動紫外燈。擴增儀需進行校準。并配備UPS電源，以防止由于電壓的波動，停電對擴增效果的影響。分析

6、區(qū)本區(qū)所使用的儀器設(shè)備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等潔凈實驗區(qū)的緩沖間部分面積不能超過主實驗室的八分之一,這是有規(guī)定的 .1、主體結(jié)構(gòu)：主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金50 內(nèi)圓角鋁，從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu)牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。2、標準的四區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)：將 PCR過程分成試劑準備、標本制備和 PCR擴增，產(chǎn)物分析四個獨立的實驗區(qū)。 整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。 每個獨立實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū)，同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié)， 使整個 PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染?？纱蜷_緩沖區(qū)，緩沖區(qū)和 PCR 擴增區(qū)的排風扇往外排氣，在實驗區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風量可調(diào)的回風口， 空氣通過回風口向室內(nèi)換氣。3、 消毒：在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈，供消毒用。在試劑準備區(qū)和標本制備區(qū)還設(shè)置移動紫外線燈，對實驗桌進行局部消毒。4、 不銹鋼傳遞窗 ：試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼 （不建議使用電子連鎖方式） 傳遞窗傳遞，保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染（人物分流） 。5、 地面地面建議使用 PVC卷材地面或自流坪地面， 整體性好。便于進行清掃，耐腐蝕。6、 照明燈具要選用凈化燈具，能達到便于清洗、不