來比林對抗慶大霉素耳毒性的實驗

1、    來比林對抗慶大霉素耳毒性的實驗               作者：郭淑云 孫曉莉 黃維國 劉順利 【關(guān)鍵詞】  慶大霉素/毒性 Lysisin aspirin protects against gentamicin ototoxicity 【Abstract】 AIM:  To study the prevention of gentamicin ototoxicity by lysisi

2、n aspirin in guinea pigs. METHODS:  Fortyeight guinea pigs were divided into 4 groups with 12 each: gentamicin treated group (GM), Lysisin aspirin treated group (LAP), GM+LAP group and control group. Auditory brainstem response and cochlear preparation transmission electron microscope were used

3、 to evaluate the effects of hair cells on hearing threshold and the morphology of hair cells. Serum levels of GM were also tested. RESULTS:  GM group developed a progressive threshold shift, reaching 50 dB at 8 kHz and the threshold shift in GM+LAP group was 30 dB (P<0.05). Injury in high fr

4、equency was significantly more severe than that in low frequency (P<0.01). Morphological results were consistent with the functional results. LAP did not affect serum levels of GM. CONCLUSION:  The results suggest that LAP may be a promising therapeutic agent in reducing gentamicin ototoxici

5、ty. 【Keywords】 gentamicins/toxicity; lysisin aspirin; drug interactions 【摘要】 目的：  觀察來比林對抗慶大霉素耳毒性的作用.  方法： 將豚鼠隨機分為慶大霉素（gentamicin， GM）組、來比林組 (lysisin aspirin， LAP)、GM+LAP組及對照組，采用聽性腦干反應(yīng)（ABR）、耳蝸鋪片及透射電鏡技術(shù)、觀察用前后聽閾及耳蝸毛細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，并檢測血清尿素氮、肌苷以及慶大霉素血藥濃度. 結(jié)果: GM組8 kHz ABR 4 wk平均閾移達(dá)50 dB，GM+LAP組平均閾移為30

6、dB，差異顯著(P<0.05). 形態(tài)學(xué)改變與聽力變化一致. GM+LAP組血液中丙二醛較GM組明顯減少(P<0.05). GM+LAP組超氧化物歧化酶活性明顯高于GM組(P<0.05). LAP對慶大霉素血藥濃度沒有影響.  結(jié)論： LAP能有效減輕GM的耳毒性作用，水楊酸鹽連接有其他基團(tuán)并不影響拮抗耳毒性的作用. 并且更加安全,有效,方便臨床使用. 【關(guān)鍵詞】 慶大霉素/毒性；來比林；藥物相互作用 0引言 慶大霉素（GM）早期在臨床上應(yīng)用較為普遍 ，其耳毒性所致的感音神經(jīng)性聾較為常見. 近年有研究報道部分自由基清除劑和鐵螯合劑可以減輕氨基糖甙類抗生素的耳毒性1,

7、2. 已有實驗證實水楊酸鈉作為一種自由基清除劑對慶大霉素耳毒性有作用3,4. 藥物來比林是乙酰水楊酸與賴氨酸的復(fù)鹽，水溶性好，酸度適宜，可作注射用，避免對胃腸道的刺激，并具有更為強力的解熱鎮(zhèn)痛作用. 我們旨在利用聽性腦干反應(yīng)（ABR）、耳蝸鋪片及透射電鏡技術(shù)觀察用LAP前后聽閾及耳蝸毛細(xì)胞形態(tài)變化，測定血清中丙二醛（MDA）超氧化物歧化酶（SOD）含量，測定腎功和血清GM濃度，觀察來比林（LAP）預(yù)防慶大霉素耳毒性的作用. 1和方法 1.1材料耳廓反射正常的健康雄性雜色豚鼠，體質(zhì)量250350 g, 由第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供. 硫酸慶大霉素（西安高科陜西金方藥業(yè)公司，批號 020207）

8、,來比林（安徽新力藥業(yè)股份有限公司蚌埠涂山分廠， 批號020713）. 1.2方法 1.2.1動物分組及處理48只豚鼠隨機分為4組，每組12只. 正常對照組，不做任何處理；GM組： GM 120 mgkg-1 皮下注射，1次d-1，連續(xù)19 d；LAP組： LAP 120 mgkg-1  皮下注射，2次d-1，間隔5 h，連續(xù)19 d；GM+LAP組：第1次LAP和GM同時注射,5 h后，第2次注射LAP，劑量同上；動物實驗期間每日秤體質(zhì)量調(diào)整用藥量. 用藥前及用藥后9 d, 19 d, 4 wk, 6 wk檢測ABR，第4次測ABR后每組取2只豚鼠斷頭活殺. 一耳供透射電鏡標(biāo)本的制

9、備，另一耳供光鏡觀察耳蝸鋪片. 1.2.2ABR反應(yīng)閾檢測豚鼠的ABR 以波最著，動物在戊巴比妥鈉40 mgkg-1腹腔注射麻醉后，針型記錄電極置前額正中皮下，參考電極置測試耳外耳道口后上皮下，鼻尖接地. 用 Biologic聲刺激器，286自動采樣，采用短純音（tone burst，上升下降時間各2 ms，平臺時間1 ms）1 kHz，8 kHz刺激，間隔75 ms，掃描時間20 ms，疊加256次，帶通濾波801500 Hz,在屏蔽隔聲室內(nèi)常規(guī)測試. 1.2.3耳蝸硬鋪片標(biāo)本制備5動物斷頭活殺，取出聽泡，于顯微鏡下在冰盒內(nèi)快速摘除鐙骨，刺破圓窗，挑開蝸頂；用510 gL-1 AgNO3灌流

10、浸泡15 min；0.1 molL-1的磷酸緩沖液（pH=7.4）漂洗；25 mLL-1戊二醛固定2 h，爆光4060 min，再置于25 mLL-1戊二醛固定24 h（置4度冰箱），解剖顯微鏡下常規(guī)制備，分離各圈基底膜，甘油封片. 1.2.4透射電鏡標(biāo)本制備動物快速斷頭活殺，取出并打開聽泡，用25 mLL-1戊二醛磷酸緩沖液固定，另一只耳按常規(guī)方法制作透射電鏡標(biāo)本. 1.2.5管碟法測定慶大霉素血藥濃度GM組和GM+LAP組動物第9日和第19日注射慶大霉素后1 h心肌取血，測定血清抑菌環(huán)直徑，再查標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，得出血清慶大霉素濃度. 1.2.6檢測血清中MDA,SOD用藥后9 d和19 d各組

11、動物心肌取血. 離心，取血清-20凍存. 采用南京建成生物工程研究所的丙二醛、超氧化物歧化酶試劑盒，按說明操作檢測. 1.2.7檢測腎功GM組和GM+LAP組動物3 wk注射慶大霉素后心肌取血，1000 rmin-1 離心10 min，取血清凍存，全自動生化分析儀（島津CL8000,日本）測定血清尿素氮和肌苷. 學(xué)處理：運用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 10.0 進(jìn)行組間t，P0.05為有顯著性差異. 2結(jié)果 實驗中GM組3只動物死亡，死前均消瘦、耳廓反射消失、無力. GM+LAP組有一只動物死亡. LAP組及對照組中無死亡. 2.1ABR用藥后各組動物ABR出現(xiàn)閾移(Fig 1, 2). 豚鼠用藥4

12、wk后平均反應(yīng)閾變化率達(dá)最高閾移, 1 kHz ABR GM組（28.8±2.9）dB比GM+LAP組(42.5±3.7) dB聽力損失大(P<0.05). 8 kHz ABR GM組(14.5±3.6) dB比GM+LAP組(16.8±3.7) dB聽力損失大(P<0.05). 兩組數(shù)據(jù)經(jīng)方差分析差異顯著(P<0.05)，高頻聽力損失比低頻重. 對照組和LAP組的反應(yīng)閾沒有明顯變化（P>0.05）.aP0.05 vs GMLAP. GM: gentamicin; LAP: lysisin aspirin. 圖1圖2(略) 2.2

13、形態(tài)學(xué)觀察用藥3 wk后耳蝸鋪片顯示GM組用藥后外毛細(xì)胞損傷（Fig 3），從頂回至底回?fù)p傷逐漸加重，內(nèi)毛細(xì)胞較外毛細(xì)胞損傷輕；GM+LAP組外毛細(xì)胞損傷較GM組輕（Fig 4）；透射電鏡見GM組嚴(yán)重?fù)p傷，缺失的外毛細(xì)胞由支持細(xì)胞代替（Fig 5）. GM+LAP組病變較輕，主要為毛細(xì)胞胞質(zhì)稀疏，線粒體變形空化等（Fig 6）. 圖3圖6(略) 2.3血清的MDA濃度和SOD活性GM組的MDA濃度高于GM+LAP組，組間差異非常顯著(P<0.01, Tab 1); 在這兩組中19 d時的均高于9 d時，兩組間差異顯著（P<0.05, Tab 1）; GM組SOD的活性低于GM+LAP組，組間差異非常顯著(P<0.01, Tab 1); 在兩組中19 d時的SOD活性，均高于9 d時，差異顯著(P<0.05, Tab 1). GM組和GM+LAP組的MDA含量和SOD活性，均高于LAP組和Blank組