大鼠白細胞介素12IL-12酶聯(lián)免疫分析

1、大鼠白細胞介素 12 （IL-12 ）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T2 n g/L -80 ng/L使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中白細胞介素12 （IL-12 ）含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠白細胞介素12（ IL-12 ）水平。用純化的大鼠白細胞介素 12（ IL-12 ）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 白細胞介素 12（ IL-12），再與 HRP 標記的白細胞介素 12（IL-12 ）抗體結合，形成抗體-抗 原-酶標抗體復合物， 經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 H

2、RP 酶的催化下轉化成藍 色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素12（ IL-12 ）呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠白 細胞介素12（ IL-12 ）濃度。試劑盒組成130 倍濃縮洗滌液20mlX1 瓶7終止液6mlX1 瓶2酶標試劑6mlX1 瓶8標準品（160 ng/L）0.5mlX1 瓶3酶標包被板12 孔X8 條9標準品稀釋液1.5mlX1 瓶4樣品稀釋液6mlX1 瓶10說明書1 份5顯色劑 A 液6mlX1 瓶11圭寸板膜2 張6顯色劑 B 液6mlX1/瓶12密封袋1 個標本要求1 標本采集后

3、盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于 -20C保存，但應避免反復凍融2.不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。80 ng/L5 號標準品150d的原倍標準品加入 150d標準品稀釋液40 n g/L4 號標準品150d的 5 號標準品加入 150d標準品稀釋液20 n g/L3 號標準品150d的 4 號標準品加入 150d標準品稀釋液10 ng/L2 號標準品150d的 3 號標準品加入 150d標準品稀釋

4、液5 ng/L1 號標準品150d的 2 號標準品加入 150d標準品稀釋液2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50 山,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40 山,然后再加待測樣品 10d（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置 37C溫育 30 分鐘。4.配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標試劑

5、50d，空白孔除外。7.溫育：操作同 3。8.洗滌：操作同 5。9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50d，再加入顯色劑 B50d，輕輕震蕩混勻，37C避光顯色 15 分鐘.10.終止：每孔加終止液 50d，終止反應（此時藍色立轉黃色）。11.測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（ OD 值）。測定應在加終止 液后 15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結：準備試劑，樣品和標準品計算以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式， 將樣品的 OD 值代入方

6、程式， 計算出樣品濃度， 再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實際濃度。 注意事項 1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用， 酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。 3各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n 倍）后再測定，計 算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（XnX5）O5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.&a